几种氨基酸及其衍生物对猪肠上皮细胞IPEC-1细胞活力与生长的影响 被引量：3

1

作者 欧阳万金 龙民慧 +4 位作者 侯永清 肖航 丁斌鹰 易丹 王蕾 《饲料工业》 北大核心 2014年第3期42-46,共5页

研究L-谷氨酰胺(L-glutamine,GLN),Nα-乙酰-L-谷氨酰胺(Nα-acetyl-L-glutamine,NAG),L-精氨酸(L-arginine,ARG),N-α-乙酰-L-精氨酸(N-alpha-acetyl-L-arginine,NAA)、瓜氨酸(L-citrulline,CIT),α-酮戊二酸(Alpha-ketoglutaric acid,... 研究L-谷氨酰胺(L-glutamine,GLN),Nα-乙酰-L-谷氨酰胺(Nα-acetyl-L-glutamine,NAG),L-精氨酸(L-arginine,ARG),N-α-乙酰-L-精氨酸(N-alpha-acetyl-L-arginine,NAA)、瓜氨酸(L-citrulline,CIT),α-酮戊二酸(Alpha-ketoglutaric acid,AKG)和L-脯氨酸(L-Proline,PRO)对猪小肠上皮细胞(Intestinal porcine epithelial cells,IPEC-1)细胞活力与生长的影响,比较这几种氨基酸及其衍生物对IPEC-1细胞生长的作用效果。在IPEC-1定制培养液中分别添加不同浓度的氨基酸或其衍生物培养4 d,用CCK8(cell counting kit 8)法检测细胞的活力,并用细胞计数法检测这些氨基酸或其衍生物对细胞生长的影响。试验的整个4 d,GLN组IPEC-1细胞的数量(P<0.05)和OD值(P<0.05)均显著高于其他组。在试验的第4 d,NAG、AKG、CIT、NAA和ARG组细胞数量均高于对照组(P<0.05或0.01)。培养液中添加PRO对IPEC-1细胞的生长无明显影响。①在这几种氨基酸及其衍生物中,GLN促进IPEC-1细胞生长的作用效果最好。②NAG、AKG、CIT、NAA或ARG均能提高第4 d IPEC-1细胞的数量。 展开更多

关键词 氨基酸及其衍生物 ipec-1 细胞活力

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肿瘤坏死因子-α刺激对IPEC-1细胞活力、物理屏障以及炎症相关基因表达的影响 被引量：6

2

作者 李佩 王树辉 +4 位作者 陈少魁 王秀英 肖勘 刘玉兰 王丹 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期4337-4344,共8页

本试验探讨了肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激对IPEC-1细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、紧密连接蛋白和炎症相关基因表达的影响。分别选取0(对照组)、10、20、40、50 ng/mL的TNF-α刺激IPEC-1细胞12、24、48 h,检测相关指标。结果表明:1)... 本试验探讨了肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激对IPEC-1细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、紧密连接蛋白和炎症相关基因表达的影响。分别选取0(对照组)、10、20、40、50 ng/mL的TNF-α刺激IPEC-1细胞12、24、48 h,检测相关指标。结果表明:1)与对照组相比,当刺激时间为24 h时,不同浓度的TNF-α均导致细胞活力显著下降(P<0.05);当刺激时间为48 h时,40和50 ng/mL的TNF-α导致细胞活力显著下降(P<0.05)。2)与对照组相比,当刺激时间为24和48 h时,40和50 ng/mL的TNF-α导致LDH活性显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,当刺激时间为24 h时,40和50 ng/mL的TNF-α导致IPEC-1细胞紧密连接蛋白闭合小环蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白-1(Claudin-1)、咬合蛋白(Occludin)的mRNA表达量显著上升(P<0.05);当刺激时间为48 h时,不同浓度的TNF-α对Claudin-1蛋白表达量无显著影响(P>0.05)。4)与对照组相比,当刺激时间为24和48 h时,不同浓度的TNF-α均导致TNF-α和白细胞介素-8(IL-8)的mRNA表达量显著上升(P<0.05),并呈时间和剂量依赖关系。以上结果表明,TNF-α刺激诱导了IPEC-1细胞的炎症反应,引起了IPEC-1细胞损伤。综合考虑各指标,可采用40 ng/mL TNF-α刺激IPEC-1细胞48 h构建IPEC-1细胞损伤模型。 展开更多

关键词 ipec-1细胞 TNF-Α 细胞活力 LDH活性 紧密连接蛋白 炎症相关基因

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灵芝多糖对大肠杆菌感染IPEC-1细胞免疫功能的影响 被引量：7

3

作者 翟俊磊 林颖 +3 位作者 王美艳 高玉云 王长康 金灵 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期7118-7130,共13页

本试验旨在探究灵芝多糖对IPEC-1细胞增殖、周期和免疫功能的影响,为灵芝多糖在仔猪肠道健康方面的应用提供理论依据。试验分为空白组和不同浓度(5、10、20、50、100、200、400和800μg/mL)灵芝多糖组,CCK-8法检测IPEC-1细胞活力,利用P... 本试验旨在探究灵芝多糖对IPEC-1细胞增殖、周期和免疫功能的影响,为灵芝多糖在仔猪肠道健康方面的应用提供理论依据。试验分为空白组和不同浓度(5、10、20、50、100、200、400和800μg/mL)灵芝多糖组,CCK-8法检测IPEC-1细胞活力,利用PI染色和流式细胞仪检测灵芝多糖对IPEC-1细胞周期的影响。利用肠出血性大肠杆菌(EHEC)构建的IPEC-1细胞炎症模型,设空白组、EHEC组以及不同浓度(5、10、20、50和100μg/mL)灵芝多糖+EHEC组,测定灵芝多糖处理IPEC-1细胞后对EHEC的抑菌活性;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测IPEC-1细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10)的分泌量;荧光定量PCR技术检测IPEC-1细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10 mRNA相对表达量。结果显示:1)与空白组相比,灵芝多糖作用IPEEC-1细胞48 h后细胞活力下降,且24 h时细胞活力优于12 h时,故选择24 h作为最佳作用时间。灵芝多糖作用24 h,浓度为5~100μg/mL时细胞活力优于浓度为200~800μg/mL时。2) 5、 10、 20、 50和100μg/mL灵芝多糖可显著抑制EHEC的增殖;50和100μg/mL的灵芝多糖处理IPEC-1细胞24 h,显著提高细胞抗EHEC活性(P<0.05)。3)与空白组相比,EHEC组的IL-1β、IL-6和IFN-γ分泌量显著上升(P<0.05),IL-10分泌量显著下降(P<0.05);与EHEC组相比,5、10、20、50和100μg/mL灵芝多糖+EHEC组的IL-6、TNF-α和IFN-γ分泌量显著降低(P<0.05),20、50和100μg/mL灵芝多糖+EHEC组的IL-1β分泌量显著降低(P<0.05),5和50μg/mL灵芝多糖+EHEC组IL-10分泌量显著上升(P<0.05)。4)与空白组相比,EHEC组的IL-1β和TNF-αmRNA相对表达量显著上升(P<0.05);与EHEC组相比,50和100μg/mL灵芝多糖+EHEC组IL-1βmRNA相对表达量显著下降(P<0.05)。由上述结果可知,灵芝多糖能抑制大肠杆菌的增殖,缓解IPEC-1细胞的炎症反应,增强细胞的免疫功能。 展开更多

关键词 灵芝多糖 ipec-1细胞 大肠杆菌 细胞因子

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细胞因子信号传导抑制因子1在双氧水诱导的IPEC-1细胞炎症和损伤中的作用 被引量：4

4

作者 肖勘 涂治骁 +3 位作者 黄菲菲 吕青青 朱惠玲 刘玉兰 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2021年第7期159-163,共5页

试验旨在研究干扰细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)对猪小肠上皮细胞(IPEC-1)细胞活力、上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性及炎性细胞因子mRNA表达影响。首先采用0.2 mmol/L或0.5 mmol/L双氧水刺激IPEC-1细胞3 h后收集细胞检测toll样受体4(TL... 试验旨在研究干扰细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)对猪小肠上皮细胞(IPEC-1)细胞活力、上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性及炎性细胞因子mRNA表达影响。首先采用0.2 mmol/L或0.5 mmol/L双氧水刺激IPEC-1细胞3 h后收集细胞检测toll样受体4(TLR4)信号通路关键因子及其负调控因子SOCS1的表达。然后采用2×2因子设计,2个主因子分别为SOCS1 siRNA(0、100 nmol/L)和双氧水(0、0.5 mmol/L)处理,即用SOCS1 siRNA干扰24 h,再用双氧水刺激3 h,收细胞样和上清液待测。结果表明:0.5 mmol/L双氧水刺激导致IPEC-1细胞TLR4、NF-κB和SOCS1 mRNA的表达量升高(P<0.05),并有提高MyD88 mRNA表达量的趋势(P=0.058);双氧水刺激导致IPEC-1细胞SOCS1 mRNA表达量升高(P<0.001),SOCS1 siRNA导致SOCS1 mRNA表达量降低(P<0.05);双氧水刺激导致IPEC-1细胞活力下降(P<0.001),SOCS1 siRNA对细胞活力无显著影响,双氧水和SOCS1 siRNA对IPEC-1细胞上清液LDH活性无显著影响;双氧水刺激导致IPEC-1细胞炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达量升高(P<0.001),SOCS1 siRNA导致IL-6和TNF-αmRNA表达量升高(P<0.001)。以上结果表明,双氧水刺激能激活TLR4信号通路,提高SOCS1的表达,干扰SOCS1能促进细胞炎症反应,表明SOCS1可以抑制细胞炎症反应,但是在氧化应激诱导的细胞损伤中并未发挥作用。 展开更多

关键词 ipec-1 SOCS1 双氧水 细胞损伤 炎症

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甘露二糖、甘露三糖体外抑制大肠杆菌对IPEC-1细胞的黏附作用研究 被引量：2

5

作者 李国辉 王金荣 +3 位作者 段二珍 陈勇江 杨强 高温婷 《饲料研究》 CAS 北大核心 2019年第4期52-56,共5页

试验以猪小肠上皮细胞(IPEC-1)为模型,探讨甘露二糖和甘露三糖抑制大肠杆菌对IPEC-1细胞黏附、侵袭和损伤的影响。在IPEC-1细胞培养基中分别加入甘露二糖和甘露三糖,使培养基中甘露二糖和甘露三糖终浓度分别为0(对照组)、5、10、20μg/m... 试验以猪小肠上皮细胞(IPEC-1)为模型,探讨甘露二糖和甘露三糖抑制大肠杆菌对IPEC-1细胞黏附、侵袭和损伤的影响。在IPEC-1细胞培养基中分别加入甘露二糖和甘露三糖,使培养基中甘露二糖和甘露三糖终浓度分别为0(对照组)、5、10、20μg/mL和40μg/mL。采用平板计数法检测甘露二糖和甘露三糖对IPEC-1黏附与侵袭的影响;建立大肠杆菌诱导细胞损伤模型,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测甘露寡糖对细胞损伤的修复作用。试验结果表明:与对照组相比,甘露二糖和甘露三糖能显著抑制大肠杆菌对IPEC-1细胞的黏附与侵袭,且随着甘露二糖和甘露三糖浓度的增加,其抑制效果增强,具有剂量效应,甘露二糖、甘露三糖浓度在40μg/mL时,其对大肠杆菌的黏附抑制达到最强;甘露二糖、甘露三糖能降低大肠杆菌对IPEC-1细胞的损伤。甘露二糖和甘露三糖能抑制致病性大肠杆菌对IPEC-1细胞的黏附、侵袭和损伤,保证细胞的完整性。 展开更多

关键词 甘露二糖 甘露三糖 大肠杆菌 ipec-1细胞 黏附 侵袭

原文传递

TNF-α对IPEC-1细胞生长、屏障功能以及程序性坏死关键基因表达的影响 被引量：2

6

作者 吕青青 秦琴 +4 位作者 涂治骁 肖世平 杨彩梅 刘玉兰 肖勘 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2022年第7期263-267,共5页

本试验探讨了肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激对猪小肠上皮细胞(IPEC-1)细胞生长、屏障功能以及程序性坏死关键基因表达的影响。IPEC-1细胞分别用0或50 ng/mL的TNF-α处理48 h,收集细胞和上清检测相关指标。结果表明:与对照组相比,TNF-α... 本试验探讨了肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激对猪小肠上皮细胞(IPEC-1)细胞生长、屏障功能以及程序性坏死关键基因表达的影响。IPEC-1细胞分别用0或50 ng/mL的TNF-α处理48 h,收集细胞和上清检测相关指标。结果表明:与对照组相比,TNF-α刺激使IPEC-1细胞活力下降(P<0.001),细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性升高(P<0.05),细胞数量减少(P<0.05);TNF-α刺激使IPEC-1细胞跨上皮电阻降低(P<0.05),同时荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖4(FD4)通透性增加(P<0.05);TNF-α刺激使咬合蛋白(Occludin)和闭合小环蛋白-1(ZO-1)的膜分布紊乱,Occludin(P<0.001)和ZO-1(P<0.05)的表达量降低;TNF-α刺激增加了程序性坏死关键因子受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)和混合系激酶样结构域蛋白(MLKL)的mRNA表达量(P<0.05)。以上结果表明,TNF-α刺激诱导IPEC-1细胞损伤,破坏了细胞屏障,激活了细胞程序性坏死信号通路。 展开更多

关键词 TNF-Α ipec-1细胞 屏障功能 程序性坏死

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两种中药制剂对IPEC-1细胞因子表达的影响 被引量：3

7

作者 施杏芬 邵斌 +1 位作者 林辉 占永祥 《中国动物保健》 2018年第4期44-47,共4页

为研究戈戈健和本草劲方对猪肠上皮细胞因子表达的影响,本实验分别以200μg/m L的戈戈健和500μg/m L的本草劲方溶液处理猪肠上皮细胞,培养后收集细胞,提取总RNA,反转录成c DNA,通过荧光定量PCR测定各种相关细胞因子m RNA表达水平。结... 为研究戈戈健和本草劲方对猪肠上皮细胞因子表达的影响,本实验分别以200μg/m L的戈戈健和500μg/m L的本草劲方溶液处理猪肠上皮细胞,培养后收集细胞,提取总RNA,反转录成c DNA,通过荧光定量PCR测定各种相关细胞因子m RNA表达水平。结果显示,戈戈健能显著上调IFN-β(P<0.05)、IL-6(P<0.05)、IL-8(P<0.01)、TNF-α(P<0.05)和TGF-β(P<0.05)m RNA表达水平;本草劲方能显著上调IFN-α(P<0.05)、IFN-β(P<0.01)和TGF-β(P<0.05)m RNA表达水平,显著下调IL-6(P<0.05)和TNF-α(P<0.01)m RNA表达水平。表明这两种中药制剂均能通过诱导I型干扰素产生而发挥抗病毒作用;戈戈健能通过促进抗炎因子IL-6、IL-8和TNF-α分泌来增强细胞免疫,同时上调抑炎因子TGF-β表达来防止过度炎症;本草劲方能抑制促炎因子IL-6和TNF-α的产生并促进抑炎因子TGF-β的分泌,从而增强细胞的抗炎能力。本研究为戈戈健和本草劲方用于预防和治疗猪场病毒病提供了理论依据。 展开更多

关键词 黄芪多糖 双黄连 ipec-1 细胞因子 抗病毒 抗炎

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解淀粉芽孢杆菌SC06与肠毒性大肠杆菌K88对IPEC-1细胞转运载体、紧密连接、凋亡和免疫相关基因表达的影响 被引量：5

8

作者 徐函 曹雪芳 +3 位作者 刘容容 曾忠花 汤俐 李卫芬 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2267-2277,共11页

本试验以IPEC-1细胞为材料,探究解淀粉芽孢杆菌SC06(以下简称SC06)与肠毒性大肠杆菌K88(以下简称K88)对肠上皮屏障功能相关基因表达的影响。将IPEC-1细胞分为4个组并作不同处理:CK组为空白对照,不作处理; SC06组和SC06+K88组用含有108CF... 本试验以IPEC-1细胞为材料,探究解淀粉芽孢杆菌SC06(以下简称SC06)与肠毒性大肠杆菌K88(以下简称K88)对肠上皮屏障功能相关基因表达的影响。将IPEC-1细胞分为4个组并作不同处理:CK组为空白对照,不作处理; SC06组和SC06+K88组用含有108CFU/mL SC06的DM EM/F12培养基先预处理6 h,之后K88组和SC06+K88组加入含有108CFU/mL K88的DM EM/F12培养基处理3 h;乳酸脱氢酶(LDH)活性测定另设以含1%Trinton X-100的DM EM/F12培养基处理的Trinton组为阳性对照。各组细胞均培养9 h。结果表明:1)与CK组相比,K88和SC06单独处理均显著降低了葡萄糖转运载体2 (GLUT2)和小肽转运载体1(PepT1)基因的相对表达量(P<0.05),SC06单独处理显著增加了丙氨酸/丝氨酸/半胱氨酸/苏氨酸转运载体2(ASCT2)和兴奋性氨基酸转运载体1(EAAC1)基因的相对表达量(P<0.05);与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了K88诱导的LDH活性和EAAC1基因相对表达量的增加(P<0.05)。2)与CK组相比,K88单独处理显著上调了闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)基因的表达(P <0.05),显著下调了密封蛋白(claudin)-3、claudin-4和黏蛋白-1(MUC1)基因的表达(P <0.05); SC06单独处理显著上调了ZO-1、claudin-4基因的表达(P <0.05); K88和SC06单独处理均显著促进了天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、凋亡相关因子(Fas)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因的表达(P<0.05),显著抑制了天冬氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达(P<0.05),且K88单独处理还显著降低了天冬氨酸蛋白水解酶-8(caspase-8)基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著阻止了由K88诱导的ZO-1、caspase-3和Bcl-2基因相对表达量的增加(P<0.05)及claudin-3、claudin-4、MUC1、caspase-9和Bax基因相对表达量的降低(P <0.05)。3)与CK组相比,K88单独处理显著上调了肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及转化生长因子β(TGF-β)基因的表达(P<0.05),并显著上调了核转录因子-κB-p50(NF-κB-p50)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、髓样分化因子88(MyD88)、核苷酸结合寡聚域1(NOD-1)及Toll样受体-4(TLR4)基因的表达(P <0. 05); SC06单独处理显著降低了IL-6、NOD1与Toll样受体-6(TLR6)基因的表达(P<0.05),显著上调了TG F-β和MyD88基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了由K88导致的MyD88、NOD-1及TLR4基因相对表达量的增加(P<0.05)。综上所述,K88诱导IPEC-1细胞发生炎症反应,破坏肠上皮细胞的完整性,SC06在一定程度上有缓解作用。 展开更多

关键词 解淀粉芽孢杆菌SC06 肠毒性大肠杆菌K88 PEC-1细胞 基因表达 凋亡 炎症反应

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HO-1对IPEC-J2细胞氧化损伤的缓解作用

9

作者 吴魏 杨涵琳 +6 位作者 刘一 张赛宇 何俊辉 杨彦宾 郭爽 王月影 李和平 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期64-70,共7页

旨在研究HO-1对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化损伤的缓解作用。利用不同浓度H_(2)O_(2)(100、200、300、400、500、600、1000μmol/L)分别处理IPEC-J2细胞6、12、24 h,利用CCK-8法检测细胞活力,确定H_(2)O_(2)处理细胞的浓度。将IPEC-J2... 旨在研究HO-1对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化损伤的缓解作用。利用不同浓度H_(2)O_(2)(100、200、300、400、500、600、1000μmol/L)分别处理IPEC-J2细胞6、12、24 h,利用CCK-8法检测细胞活力,确定H_(2)O_(2)处理细胞的浓度。将IPEC-J2细胞分为对照组(CT)、H_(2)O_(2)组、HO-1+H_(2)O_(2)组,每组3个重复。RT-qPCR检测IPEC-J2细胞中IL-1α、IL-6、IL-8、Keap1、Nrf2 mRNA的相对表达丰度;ELISA检测IPEC-J2细胞中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;化学荧光法检测细胞中活性氧(ROS)水平。结果显示,随着H_(2)O_(2)浓度的增加,IPEC-J2细胞活力降低,400μmol/L H_(2)O_(2)处理12 h,600μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h或24 h,IPEC-J2细胞活力均降至50%以下。根据细胞活力下降50%的原则,后续选用400μmol/L H_(2)O_(2)处理IPEC-J2细胞12 h。与CT组相比,H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中的IL-1α(P<0.05)、IL-6(P<0.01)和IL-8(P<0.01)mRNA相对表达丰度增加,细胞中ROS荧光强度增强(P<0.01)和MDA含量(P<0.001)升高。与H_(2)O_(2)组相比,HO-1+H_(2)O_(2)组IPEC-J2细胞中IL-6(P<0.05)、IL-1α(P<0.01)和IL-8(P<0.05)mRNA相对表达丰度降低,细胞中ROS荧光强度减弱(P<0.05)和MDA含量显著下降(P<0.01)。Keap1/Nrf2信号结果显示,H_(2)O_(2)上调Keap1 mRNA表达(P<0.01),下调Nrf2 mRNA表达(P<0.01),降低CAT活性(P<0.01);HO-1与H_(2)O_(2)共处理,IPEC-J2细胞中Keap1 mRNA表达下调(P<0.01),Nrf2 mRNA表达上调(P<0.01),CAT活性升高(P<0.01)。提示400μmol/L H_(2)O_(2)能诱导IPEC-J2细胞发生氧化损伤,HO-1能在一定程度上缓解H_(2)O_(2)诱导IPEC-J2细胞的氧化损伤,HO-1能激活H_(2)O_(2)抑制的Keap1/Nrf2信号,促进抗氧化酶CAT的产生,发挥抑炎、抗氧化作用。 展开更多

关键词 血红素加氧酶1 过氧化氢 猪小肠上皮细胞 氧化损伤

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猴头菇多糖对氧化应激的IPEC-J2细胞抗氧化能力及紧密连接蛋白ZO-1的影响 被引量：6

10

作者 陈新瑶 张建龙 +3 位作者 董星 陈景杰 黄一帆 李健 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1769-1776,共8页

旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH... 旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH-DA染色观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)的含量;通过比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(MDA)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及乳酸脱氢酶(LDH)的释放率;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测紧密连接蛋白ZO-1基因的转录水平。结果显示,(1)构建IPEC-J2细胞氧化应激模型的H_2O_2浓度为0.4mmol·L-1。(2)H_2O_2能够极显著地增加细胞内的ROS含量,诱导细胞凋亡,同时极显著地降低了SOD和CAT的活力,极显著地升高MDA含量与LDH释放率。但是,与模型组相比,经过HEPs预处理后,细胞内ROS的含量极显著地降低(P<0.01);同时极显著地提高了SOD和CAT的活力(P<0.01),极显著地降低了MDA含量与LDH释放率(P<0.01)。(3)实时荧光定量PCR结果显示,H_2O_2能够极显著地降低ZO-1基因的转录量(P<0.01),与模型组比较,HEPs能够极显著的提高ZO-1基因的转录量(P<0.01);Western blot结果显示ZO-1蛋白的表达量与ZO-1基因类似。可见,猴头菇多糖对H_2O_2诱导氧化损伤状态下的IPEC-J2细胞具有保护作用。 展开更多

关键词 猴头菇多糖 过氧化氢 ipec-J2细胞 氧化应激 ZO-1

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黄曲霉毒素B_(1)、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的累加细胞毒性研究 被引量：6

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作者 王晓敏 常娟 +5 位作者 王平 尹清强 刘超齐 朱群 彭峰 杨小进 《中国饲料》 北大核心 2021年第9期98-101,共4页

由于饲料中多种霉菌毒素并存的几率比较高,本研究以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,研究黄曲霉毒素B1(AFB_(1))、玉米赤霉烯酮(ZEA)和呕吐毒素(DON)的叠加细胞毒性。细胞毒性试验选用AFB1、ZEA和DON三种毒素作为响应面Box-Behnke设计的... 由于饲料中多种霉菌毒素并存的几率比较高,本研究以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,研究黄曲霉毒素B1(AFB_(1))、玉米赤霉烯酮(ZEA)和呕吐毒素(DON)的叠加细胞毒性。细胞毒性试验选用AFB1、ZEA和DON三种毒素作为响应面Box-Behnke设计的三个因素,以AFB_(1):10、20、30μg/L,ZEA:150、300、450μg/L,DON:500、1000、1500μg/L作为Box-Behnke设计的三个编码水平。利用响应面设计构建得到17组复合霉菌毒素组合,以其对IPEC-J2细胞活力的影响作为参考指标,得到对细胞损伤程度最高和最低的霉菌毒素添加比例。结果表明:经方程预测后,得到细胞活力最低(霉菌毒素毒性最高)的AFB_(1)、ZEA和DON组合为30、150μg/L和1500μg/L,经测定细胞活力为32.32%;得到细胞活力最高(霉菌毒素毒性最低)的AFB_(1)、ZEA和DON组合为10、150μg/L和600μg/L,经测定细胞活力为53.01%。该结果为多种霉菌毒素叠加毒性的研究提供了依据。 展开更多

关键词 ipec-J2细胞 黄曲霉毒素B_(1) 玉米赤霉烯酮 呕吐毒素 细胞毒性

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低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮对IPEC-J2细胞紧密连接蛋白表达的影响 被引量：1

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作者 傅春妮 李元辉 +2 位作者 李鹏程 李留安 秦顺义 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4311-4318,共8页

试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEN)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)紧密连接蛋白表达的影响。试验分为对照组(C)、ZEN(30μg/mL ZEN)、ZEN+0.5 Se(30μg/mL ZEN+0.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 S... 试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEN)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)紧密连接蛋白表达的影响。试验分为对照组(C)、ZEN(30μg/mL ZEN)、ZEN+0.5 Se(30μg/mL ZEN+0.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组。待细胞长至60%~70%汇合时,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液,C和ZEN组更换为正常培养液,12 h后向含ZEN组加入30μg/mL ZEN,继续培养24 h。收集各组细胞培养液,检测碱性磷酸酶(AKP)活性;Western blotting法检测闭锁连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的表达,免疫荧光法检测ZO-1和Occludin蛋白的表达和定位情况。AKP活性检测结果表明,与对照组相比,ZEN、ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se组AKP活性均显著升高(P<0.05),ZEN+3 Se组AKP活性差异不显著(P>0.05);与ZEN组相比,ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组AKP活性均显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,与对照组比,ZEN组ZO-1和Occludin蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与ZEN组比,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组ZO-1表达水平均差异不显著(P>0.05),但随着Se浓度的增加,ZO-1表达水平逐渐升高,ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se、ZEN+3 Se组Occludin表达水平均显著升高(P<0.05)。免疫荧光结果表明,低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的ZO-1和Occludin蛋白荧光信号减弱现象,并恢复ZO-1和Occludin蛋白的定位分布。由此说明,低聚壳聚糖硒可降低ZEN引起的IPEC-J2细胞AKP活性升高,上调ZEN引起的ZO-1、Occludin蛋白表达水平下降,并调节其定位分布。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 低聚壳聚糖硒 猪小肠上皮细胞(ipec-J2) 闭锁连接蛋白(ZO-1)

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槲皮素对产肠毒素大肠杆菌K88诱导的猪肠上皮细胞凋亡和焦亡信号通路的影响

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作者 徐晓叶 龚晗秋 +4 位作者 张敏芳 贺鹏伟 周墨涵 刘玉兰 肖勘 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期6723-6731,共9页

本试验旨在研究槲皮素(Que)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪肠上皮细胞损伤、炎症反应、凋亡和焦亡信号通路的影响。试验以猪肠上皮细胞IPEC-1为研究对象,分为4组:对照组、Que组、ETEC K88组、Que+ETEC K88组。用0或10μmol/L ... 本试验旨在研究槲皮素(Que)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪肠上皮细胞损伤、炎症反应、凋亡和焦亡信号通路的影响。试验以猪肠上皮细胞IPEC-1为研究对象,分为4组:对照组、Que组、ETEC K88组、Que+ETEC K88组。用0或10μmol/L Que处理细胞24 h后,再用磷酸盐缓冲液(PBS)或50倍细胞数的ETEC K88刺激细胞2 h,收集样品测定细胞活力、细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞中炎性因子含量、细胞凋亡和焦亡信号通路相关基因的mRNA表达水平。结果显示:1)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞活力的下降和细胞上清液中LDH活性的上升(P<0.05)。2)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的上升(P<0.05)。3)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞凋亡信号通路相关基因凋亡相关因子配体(FasL)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平的上升和B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)的mRNA表达水平的下降(P<0.05)。4)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞焦亡信号通路相关基因含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、IL-18、消皮素D(GSDMD)和NLR家族CARD结构域4(NLRC4)的mRNA表达水平的上升(P<0.05)。综上所述,Que可抑制ETEC K88刺激导致的IPEC-1细胞凋亡和焦亡信号通路的激活,缓解细胞损伤。 展开更多

关键词 槲皮素 产肠毒素大肠杆菌K88 ipec-1 细胞凋亡 细胞焦亡 细胞损伤

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原儿茶酸对肠毒素大肠杆菌K88诱导的猪小肠上皮细胞程序性坏死和Toll样受体4信号通路的影响 被引量：1

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作者 龚晗秋 徐晓叶 +4 位作者 张敏芳 贺鹏伟 陈少魁 刘玉兰 肖勘 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期4665-4676,共12页

本试验旨在研究原儿茶酸(PCA)对肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-1细胞)程序性坏死和Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。试验采用2×2因子设计,分为4个组:对照组、PCA组(40μmol/L PCA作用24 h)、ETEC K88组... 本试验旨在研究原儿茶酸(PCA)对肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-1细胞)程序性坏死和Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。试验采用2×2因子设计,分为4个组:对照组、PCA组(40μmol/L PCA作用24 h)、ETEC K88组(50倍细胞数ETEC K88作用2 h)和PCA+ETEC K88(40μmol/L PCA作用24 h+50倍细胞数ETEC K88作用2 h)组,每组3个重复。结果显示:1)与对照组相比,ETEC K88组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组细胞活力显著升高(P<0.05),细胞上清液LDH活性显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,ETEC K88刺激导致细胞形态损伤,超微结构破坏,表现为细胞膜破裂,细胞核皱缩,染色质外溢,线粒体出现肿胀并且空泡化;ETEC K88组细胞坏死率显著升高(P<0.05)。与ETEC K88组相比,添加PCA能够保护细胞形态,PCA+ETEC K88组细胞坏死率显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,ETEC K88组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4、脂多糖结合蛋白(LBP)、髓样分化蛋白2(MD2)、白细胞介素受体相关激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和髓样分化因子88(MyD 88)的mRNA相对表达显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组TNF-α、TLR4、LBP、MD2、IRAK1、TRAF6和MyD88的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。4)与对照组相比,ETEC K88组肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、Fas相关死亡结构域(FADD)、混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)、高迁移率蛋白1(HMGB1)、动力相关蛋白1(Drp1)和磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组TNFR1、FADD、HMGB1、Drp1和PGAM5的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。由此可见,PCA可能通过抑制细胞程序性坏死和TLR4信号通路的激活,缓解ETEC K88诱导的IPEC-1细胞的炎症反应和损伤。 展开更多

关键词 肠毒素大肠杆菌K88 原儿茶酸 ipec-1 程序性坏死 TOLL样受体4

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博落回生物碱对猪肠上皮细胞增殖的影响 被引量：25

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作者 李杰 伍树松 +2 位作者 熊兴耀 苏丁丁 贺建华 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1632-1637,共6页

本试验旨在研究博落回中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱在不同浓度、不同时间段对猪肠上皮细胞（IPEC-1）增殖的影响。IPEC-1预培养24 h后，在培养基中分别加入不同浓度（4、2、1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.012 5、0.00... 本试验旨在研究博落回中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱在不同浓度、不同时间段对猪肠上皮细胞（IPEC-1）增殖的影响。IPEC-1预培养24 h后，在培养基中分别加入不同浓度（4、2、1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.012 5、0.006 25 μg/mL的血根碱或白屈菜红碱；100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5 μg/mL的原阿片碱或别隐品碱，各组不同浓度梯度均设8个重复）的博落回生物碱继续培养12或24 h，4-甲基偶氮唑盐（MTT）染色法检测细胞增殖。结果表明：0.25~4 μg/mL的血根碱、0.25~4 μg/mL的白屈菜红碱、100 μg/mL的原阿片碱或100 μg/mL的别隐品碱对IPEC-1的增殖有显著的抑制作用（P0.05）。由此可见，博落回生物碱在一定浓度范围内可促进IPEC-1的增殖。这说明博落回生物碱提高动物生长性能可能是通过促进小肠细胞增殖分化更新，从而增强小肠消化、吸收、免疫屏障和应激反应等功能的途径实现的。 展开更多

关键词 博落回生物碱 ipec-1 MTT 增殖

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丙氨酰-谷氨酰胺预处理对氧化应激猪小肠上皮细胞活力和自噬的影响 被引量：2

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作者 辛向荣 贺琴 +2 位作者 游金明 叶亚玲 邓宸玺 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2018年第8期91-95,共5页

试验旨在研究预添加丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)对过氧化氢诱导下的小肠上皮细胞IPEC-1的影响。采用单因子试验设计,向IPEC-1细胞培养基中分别添加0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L Ala-Gln,预处理20 h,然后利用400μmol/L H2O2诱... 试验旨在研究预添加丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)对过氧化氢诱导下的小肠上皮细胞IPEC-1的影响。采用单因子试验设计,向IPEC-1细胞培养基中分别添加0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L Ala-Gln,预处理20 h,然后利用400μmol/L H2O2诱导细胞4 h,创建氧化应激模型。试验共设6个处理,每个处理8个重复。结果表明:IPEC-1细胞活力随Ala-Gln预处理水平的提高而提高(P<0.05);且在Ala-Gln预处理水平为2.00 mmol/L时细胞活力达最大值,4.0 mmol/L水平下反而使细胞活力下降(P<0.05),但仍高于0.50、1.00 mmol/L Ala-Gln水平下IPEC-1细胞活力;添加Ala-Gln提高了氧化应激状态IPEC-1谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05),降低了丙二醛(MDA)含量(P<0.05);细胞SOD活性呈曲线变化,在Ala-Gln预处理水平为0.25、0.50 mmol/L时活性较高,之后随Ala-Gln预处理水平提高而降低(P<0.05);在Ala-Gln预处理水平为1.00 mmol/L时,MDA含量趋于稳定;添加Ala-Gln后,随Ala-Gln水平细胞质中阳性荧光信号不断增强,且在Ala-Gln为1.00、2.00 mmol/L预处理水平下较为明显;4.00 mmol/L Ala-Gln水平下IPEC-1同对照组相比密度显著增加,且结构完整度相似,阳性荧光信号无显著差异,但同2.00 mmol/L AlaGln添加水平相比细胞密度和生物膜结构完整度提高,胞内荧光信号有减少趋势。由此可得,预添加Ala-Gln可显著提高氧化应激状态下IPEC-1细胞中GSH-Px、SOD酶活性,显著降低脂质过氧化产物MDA含量,缓解氧化应激;在IPEC-1细胞中预添加Ala-Gln能通过增强细胞自噬用以缓解细胞氧化应激。 展开更多

关键词 丙氨酰-谷氨酰胺 小肠上皮细胞ipec-1 氧化应激 细胞活力 自噬

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猪源A型产气荚膜梭菌β2毒素与宿主细胞互作蛋白的筛选鉴定 被引量：4

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作者 曾秀 张兰桥 +3 位作者 周姣 王婧祺 戴益民 张锦华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1204-1209,共6页

产气荚膜梭菌产生的β2毒素在仔猪肠炎中起着重要作用,为研究该毒素侵入宿主细胞的作用机制,本研究以β2为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4的BD(DNA binding domain)融合表达,利用猪肠上皮细胞系IPEC-1的cDNA文库与GAL4的AD区(Acti... 产气荚膜梭菌产生的β2毒素在仔猪肠炎中起着重要作用,为研究该毒素侵入宿主细胞的作用机制,本研究以β2为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4的BD(DNA binding domain)融合表达,利用猪肠上皮细胞系IPEC-1的cDNA文库与GAL4的AD区(Activation domain)融合表达,通过酵母双杂交系统筛选鉴定与β2毒素相互作用的猪肠上皮细胞蛋白。筛选得到的阳性转化子经提取质粒和测序后,比对其所包含的编码蛋白序列,得到4个潜在的与β2毒素存在相互作用的细胞蛋白,分别为S20、LGALS1、L12和Atrophin-1。其中S20、L12和Atrophin-1是位于细胞内的核蛋白,而LGALS1是一种存在于细胞膜外侧的半乳糖凝集素,可能是毒素的作用位点。对LGALS1进行回交验证,结果显示其C端与β2毒素的相互作用强于其完整蛋白与β2毒素的相互作用。本研究结果对研究β2毒素的致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 β2毒素 产气荚膜梭菌 ipec-1 酵母双杂交系统 半乳糖凝集素(LGALS1)

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一种有机稀土及其与植物甾醇复合物的体外应用评估 被引量：1

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作者 代发文 黄玉岚 +3 位作者 于海娜 姚宏明 许甲平 冯一凡 《饲料工业》 北大核心 2020年第23期44-48,共5页

试验旨在应用悬液定量法和猪肠上皮细胞(IPEC-1)培养试验评定一种有机稀土(REE)及其与植物甾醇复合物(REP)的抑菌活性和对细胞增殖的影响。结果发现:①REE和REP对大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌抑菌效率随处理浓度(1 mg/ml、500μg/ml、1... 试验旨在应用悬液定量法和猪肠上皮细胞(IPEC-1)培养试验评定一种有机稀土(REE)及其与植物甾醇复合物(REP)的抑菌活性和对细胞增殖的影响。结果发现:①REE和REP对大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌抑菌效率随处理浓度(1 mg/ml、500μg/ml、10μg/ml)降低而显著降低(P<0.05),低浓度(10μg/ml)下REP抑菌效率显著低于同浓度REE组(P<0.05)。②与对照组相比,高浓度(1 mg/ml、500μg/ml)REE和REP显著抑制IPEC-1细胞增殖(P<0.05),低浓度(50μg/ml、10μg/ml)REE和REP对IPEC-1增殖均无抑制作用,适宜浓度(50μg/ml)REP对IPEC-1还表现出显著的促生长作用(P<0.05)。由此可见,高浓度有机稀土及其与植物甾醇复合物具有较好体外抑菌效率,显著抑制IPEC-1细胞增殖,低浓度下添加植物甾醇的REP抑菌效率降低并促进IPEC-1细胞增殖。 展开更多

关键词 有机稀土 植物甾醇 抑菌效率 肠上皮细胞 细胞增殖

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