目的:研究肿瘤抑制基因人ING4(inhibitor of growth family,member4)对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法:将携有绿色荧光蛋白(GFP)腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His(由本科室构建)分别感染C6细胞,RT-PCR法检测hING4的转录,Weste...目的:研究肿瘤抑制基因人ING4(inhibitor of growth family,member4)对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法:将携有绿色荧光蛋白(GFP)腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His(由本科室构建)分别感染C6细胞,RT-PCR法检测hING4的转录,Western-blotting法检测目的蛋白的表达。并观测hING4基因表达对C6胶质瘤细胞的作用,用MTT法绘制生长曲线,计算抑瘤率。再取重组腺病毒Ad-hING4-His及空腺病毒Ad作用后的C6细胞分别行激光共聚焦显微镜观察凋亡小体、透射电镜观察亚细胞结构的变化,抽提基因组DNA行琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测。结果:Ad-hING4-His感染C6细胞后,RT-PCR及Western-blotting结果提示有目的基因的转录和表达。hING4基因表达可以显著抑制C6细胞生长。激光共聚焦观察可见明显核断裂、透射电镜可见实验组细胞呈凋亡表现、基因组DNA电泳呈现梯形条带,流式细胞仪检测有明显AP峰,凋亡率达18.1%。结论:hING4可以通过促进细胞凋亡作用而显著抑制C6细胞的增殖和生长。展开更多
目的检测ING4(inhibitor of growth 4)对MCF-7细胞凋亡的影响。方法从人胎盘总RNA中克隆人ING4基因,构建其真核表达质粒pEGFP-ING4转染MCF-7细胞表达ING4后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR检测ING4、NF-κB、caspase-3、IL-8...目的检测ING4(inhibitor of growth 4)对MCF-7细胞凋亡的影响。方法从人胎盘总RNA中克隆人ING4基因,构建其真核表达质粒pEGFP-ING4转染MCF-7细胞表达ING4后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR检测ING4、NF-κB、caspase-3、IL-8、Bcl-2及Bax基因的表达。结果构建的重组质粒转染可见目的蛋白融合表达,与对照相比MCF-7细胞凋亡率增高;ING4、caspase-3及IL-8基因的表达上调,NF-κB与Bcl-2/Bax基因的表达下调。结论成功从人胎盘组织克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达;ING4在人MCF-7细胞中能引起凋亡相关基因的改变并促进MCF-7细胞的凋亡,这为进一步研究ING4的抗肿瘤机制奠定了基础。展开更多
目的探讨重组腺病毒介导的人生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因对人乳腺癌多药耐药MCF-7/ADR细胞体外抑制和化疗增敏作用及相关分子机制。方法用携带ING4基因的重组腺病毒感染MCF-7/ADR细胞,本实验分为胎牛血清(PBS)阴性...目的探讨重组腺病毒介导的人生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因对人乳腺癌多药耐药MCF-7/ADR细胞体外抑制和化疗增敏作用及相关分子机制。方法用携带ING4基因的重组腺病毒感染MCF-7/ADR细胞,本实验分为胎牛血清(PBS)阴性对照组、Ad-GFP空载体腺病毒组、Ad-ING4重组腺病毒组、3.0μg/mL ADR组和Ad-ING4+3.0μg/mL ADR组5组,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在MCF-7/ADR细胞中的表达情况;用CCK-8法检测各组MCF-7/ADR细胞生长情况;分别用流式细胞术(FCM)PI单染法和AnnexinⅤ-PE/7-AAD双荧光标记法检测各组细胞周期和细胞凋亡情况;并使用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组MCF-7/ADR细胞中Bax、Bcl-2和Survivin等相关基因的表达情况。结果腺病毒介导的ING4基因在MCF-7/ADR细胞中成功表达;Ad-ING4和ADR对MCF-7/ADR细胞生长均有明显的生长抑制和促凋亡作用,Ad-ING4使MCF-7/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,F=129.294,P<0.05。Ad-ING4联合ADR对细胞的生长抑制和促凋亡作用更明显,培养至第4天,其生长抑制率可达(73.13±3.78)%,显著高于Ad-ING4组(19.29±1.53)%和ADR组(48.39±2.96)%,F=257.397,P<0.05;其凋亡率可达(26.48±3.13)%,显著高于Ad-ING4组(11.57±1.26)%和ADR组(17.21±2.34)%,F=30.253,P=0.001。蛋白质印迹法结果分析显示,导入ING4基因和ADR处理使Bax的表达增强,Bcl-2和Survivin的表达下降。与其他组相比较,Ad-ING4联合ADR使上述效应更加显著,差异有统计学意义,P值均<0.05。结论 Ad-ING4在体外可抑制MCF-7/ADR细胞的生长,并诱导其凋亡,对ADR的细胞毒作用具有协同增敏效应,其机制可能与ING4降低Bcl-2/Bax比值和抑制Survivin的表达有关。展开更多
文摘目的:研究肿瘤抑制基因人ING4(inhibitor of growth family,member4)对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法:将携有绿色荧光蛋白(GFP)腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His(由本科室构建)分别感染C6细胞,RT-PCR法检测hING4的转录,Western-blotting法检测目的蛋白的表达。并观测hING4基因表达对C6胶质瘤细胞的作用,用MTT法绘制生长曲线,计算抑瘤率。再取重组腺病毒Ad-hING4-His及空腺病毒Ad作用后的C6细胞分别行激光共聚焦显微镜观察凋亡小体、透射电镜观察亚细胞结构的变化,抽提基因组DNA行琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测。结果:Ad-hING4-His感染C6细胞后,RT-PCR及Western-blotting结果提示有目的基因的转录和表达。hING4基因表达可以显著抑制C6细胞生长。激光共聚焦观察可见明显核断裂、透射电镜可见实验组细胞呈凋亡表现、基因组DNA电泳呈现梯形条带,流式细胞仪检测有明显AP峰,凋亡率达18.1%。结论:hING4可以通过促进细胞凋亡作用而显著抑制C6细胞的增殖和生长。
文摘目的检测ING4(inhibitor of growth 4)对MCF-7细胞凋亡的影响。方法从人胎盘总RNA中克隆人ING4基因,构建其真核表达质粒pEGFP-ING4转染MCF-7细胞表达ING4后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR检测ING4、NF-κB、caspase-3、IL-8、Bcl-2及Bax基因的表达。结果构建的重组质粒转染可见目的蛋白融合表达,与对照相比MCF-7细胞凋亡率增高;ING4、caspase-3及IL-8基因的表达上调,NF-κB与Bcl-2/Bax基因的表达下调。结论成功从人胎盘组织克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达;ING4在人MCF-7细胞中能引起凋亡相关基因的改变并促进MCF-7细胞的凋亡,这为进一步研究ING4的抗肿瘤机制奠定了基础。
