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臭氧联合关节镜对膝关节骨关节炎滑膜IL1R Ⅰ、CXCL13与IL24的影响 被引量：13
1
作者 付纳新 马超 +5 位作者 孙劲 黄晖 赵伟 孟桢桢 田莉 刘朝奇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第18期3055-3059,共5页
目的观察医用臭氧对膝关节骨关节炎滑膜组织IL1R Ⅰ、CXCL13与IL24的影响。方法 65例(失访11例)膝关节骨关节炎患者,随机分为臭氧联合关节镜治疗组和单纯关节镜治疗组,每组27例,分别于第一次手术及6个月后的第二次手术中切取患者膝关节... 目的观察医用臭氧对膝关节骨关节炎滑膜组织IL1R Ⅰ、CXCL13与IL24的影响。方法 65例(失访11例)膝关节骨关节炎患者,随机分为臭氧联合关节镜治疗组和单纯关节镜治疗组,每组27例,分别于第一次手术及6个月后的第二次手术中切取患者膝关节增生滑膜组织,其中臭氧联合关节镜治疗组关节镜手术后关节腔内注射40μg/mL浓度医用臭氧40 mL/周,共2周;单纯关节镜治疗组术后不注射臭氧,采用反转录PCR法、蛋白印迹法比较两组滑膜治疗前后IL1RⅠ、CXCL13与IL24基因和蛋白表达的差异。结果与单纯关节镜治疗组相比,臭氧联合关节镜治疗组术后滑膜组织IL1R Ⅰ的表达量降低有显著统计学意义(P<0.01);CXCL13的表达量较单纯关节镜治疗组升高有显著统计学意义(P<0.01);IL24 mRNA和蛋白质表达量较关节镜组升高有统计学意义(P<0.05)。结论医用臭氧能通过影响IL1RⅠ、CXCL13与IL24的表达减轻关节炎症状,延缓滑膜炎的进展,臭氧联合关节镜治疗骨关节炎较单纯关节镜清理术临床效果更好,但不能完全阻止和逆转骨关节炎病程进展。 展开更多
关键词 臭氧 关节镜 骨关节炎 IL1RI CXCL13 il24
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携带IL24基因复制缺陷型腺病毒对膀胱癌生长的抑制作用 被引量：1
2
作者 宋松 毛立军 +3 位作者 禚保彪 史震 孙方浩 郑骏年 《徐州医学院学报》 CAS 2008年第10期661-664,共4页
目的研究携带人IL24基因的复制缺陷型腺病毒(Ad-IL24)对膀胱癌的杀伤效应。方法聚合酶链反应(PCR)鉴定Ad-IL24,并扩增、纯化和滴度测定。Ad-IL24感染人膀胱癌Biu87细胞系,通过结晶紫染色及四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞杀伤作用;Wester... 目的研究携带人IL24基因的复制缺陷型腺病毒(Ad-IL24)对膀胱癌的杀伤效应。方法聚合酶链反应(PCR)鉴定Ad-IL24,并扩增、纯化和滴度测定。Ad-IL24感染人膀胱癌Biu87细胞系,通过结晶紫染色及四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞杀伤作用;Western blot法检测腺病毒IL24蛋白的表达情况;并进一步建立裸鼠膀胱癌模型,应用Ad-IL24瘤内注射体内观察抗肿瘤效果。结果PCR鉴定说明Ad-IL24包含目的基因且为复制缺陷型腺病毒;Western blot结果表明Ad-IL24能有效介导IL24基因在Biu87细胞中的表达;结晶紫染色结果表明Ad-IL24对Biu87细胞有明显的杀伤作用,MTT表明用MOI=10的Ad-IL24和Ad-EGFP感染Biu87细胞,6天后存活率分别为(47.6±2.6)%、(84.7±4.5)%,比较差异有统计学意义(P<0.05)。成功建立膀胱癌动物模型后,瘤内注射病毒Ad-IL24、Ad-EGFP和PBS后5周,AdIL-24、Ad-EGFP和PBS各组肿瘤大小分别为(420.3±49.0)mm3、(639.8±52.9)mm3和(766.1±75.8)mm3。结论成功获得纯化的Ad-IL24,并进一步证明Ad-IL24能在体内外有效抑制膀胱癌的生长,显示出良好的抗肿瘤效果,为进一步应用于膀胱癌基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 腺病毒 il24 膀胱癌
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低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其机制 被引量：2
3
作者 杨圆圆 卢杨 +3 位作者 张晓龙 张晴 李真真 张砚君 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1030-1034,共5页
目的探讨低剂量5-Fu与腺病毒表达的IL24联用对HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法采用PCR、酶切、连接等方法构建pAd-IL24腺病毒表达载体,Western blot检测IL24蛋白水平表达情况。CCK8法确定5-Fu联用剂量,检测与Ad-IL24联用对HepG2... 目的探讨低剂量5-Fu与腺病毒表达的IL24联用对HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法采用PCR、酶切、连接等方法构建pAd-IL24腺病毒表达载体,Western blot检测IL24蛋白水平表达情况。CCK8法确定5-Fu联用剂量,检测与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞的抑制效果,并计算联合指数。流式细胞术检测不同腺病毒感染复数及不同5-Fu浓度下绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞的比例。流式细胞术检测5-Fu作用前后HepG2细胞表面柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)的表达变化。结果成功构建腺病毒表达载体pAd-IL24。确定5-Fu联用剂量为1μg/ml和2μg/ml,Ad-IL24与低剂量5-Fu联用可以协同抑制HepG2肝癌细胞生长,联合指数分别为0.75和0.64。低剂量5-Fu作用于HepG2后使其表面CAR水平显著增加(P<0.01)。结论低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞系的抑制有协同作用,可能与5-Fu上调HepG2表面CAR水平相关。 展开更多
关键词 肝癌 5氟尿嘧啶 il24 腺病毒 柯萨奇腺病毒受体
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溶瘤腺病毒ZD55-IL24联合雷帕霉素协同抑制Hep3B细胞生长的研究
4
作者 卓玲燕 马步云 +4 位作者 黄盼盼 张蓉 贾晓渊 周秀梅 王毅刚 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第10期1353-1361,共9页
PI3K/AKT/m TOR信号通路的激活能引发人体细胞发生癌变,哺乳动物靶标m TOR作为PI3K/AKT信号通路下游的一个效应分子,被视为针对肿瘤发生和形成的关键治疗靶点,因此阻断该信号通路的相关靶点可以作为恶性肿瘤治疗的一个策略。白细胞介素2... PI3K/AKT/m TOR信号通路的激活能引发人体细胞发生癌变,哺乳动物靶标m TOR作为PI3K/AKT信号通路下游的一个效应分子,被视为针对肿瘤发生和形成的关键治疗靶点,因此阻断该信号通路的相关靶点可以作为恶性肿瘤治疗的一个策略。白细胞介素24(interleukin 24,IL24)是一个选择性诱导肿瘤细胞凋亡的重要抑癌基因。该研究分别利用MTT法和实时无标记细胞功能分析仪检测携带IL24基因的溶瘤腺病毒ZD55-IL24与m TOR抑制剂雷帕霉素(rapamycin)单独或联合作用对多种肝癌细胞的体外杀伤效果;倒置显微镜分别观察ZD55-IL24、雷帕霉素单独作用及两者联合作用引起的细胞形态学变化;Hoechst 33342、流式细胞术和TUNEL染色检测各处理组细胞的凋亡情况;Western blot检测IL24、AKT以及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的蛋白质水平。结果显示,溶瘤腺病毒ZD55-IL24与雷帕霉素联合作用较两者单独作用更显著地抑制了肝癌细胞Hep3B的生长并诱导了肝癌细胞的凋亡;此外,两者联合作用更有效地上调了肝癌细胞Hep3B中的细胞因子IL24和促凋亡蛋白Bax的表达,同时下调了PI3K/AKT/m TOR信号通路关键蛋白AKT和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。该研究结果表明,雷帕霉素很可能在一定程度上促进了ZD55-IL24病毒介导的IL24表达而增强对肝癌细胞的杀伤作用,进而为肝癌治疗研究提供了一条新型有效的方案。 展开更多
关键词 il24 溶瘤腺病毒 雷帕霉素 MTOR
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增殖腺病毒SG600-IL24与非增殖腺病毒Ad-IL24的抗肿瘤效果比较
5
作者 那曼丽 陈东锋 +5 位作者 苏长青 李林芳 吴红平 钱炎珍 姜梨华 钱其军 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2008年第1期113-118,共6页
利用DNA克隆和重组技术,构建增殖腺病毒SG600-IL24。ELISA检测比较SG600-IL24和非增殖腺病毒Ad-IL24分别感染肝癌细胞BEL-7402、Hep3B、HepGⅡ、SK-Hep-1和成纤维细胞BJ细胞后IL24的表达量,表明SG600-IL24病毒能在肿瘤细胞内大量表达IL-... 利用DNA克隆和重组技术,构建增殖腺病毒SG600-IL24。ELISA检测比较SG600-IL24和非增殖腺病毒Ad-IL24分别感染肝癌细胞BEL-7402、Hep3B、HepGⅡ、SK-Hep-1和成纤维细胞BJ细胞后IL24的表达量,表明SG600-IL24病毒能在肿瘤细胞内大量表达IL-24,最高可达773 ng/mL(MOI=1),且在多数肿瘤细胞内IL24表达量显著高于Ad-IL24,而在正常细胞内表达量与Ad-IL24基本相同。半数组织感染剂量(TCID50)法检测SG600-IL24 48 h和96 h的增殖情况,发现SG600-IL24可在上述4种肿瘤细胞内大量增殖,96 h的最高增殖倍数可达到246153。MTT法和CPE法对比SG600-IL24和Ad-IL24对不同细胞的杀伤作用结果显示上述4种肿瘤细胞SG600-IL24对上述4种肿瘤细胞的50%杀伤剂量(IC50)和90%杀伤剂量(IC90)均明显低于Ad-IL24。以上结果表明SG600-IL24体现了病毒治疗与基因治疗的双重抗肿瘤用,其效果明显好于Ad-IL24,为该病毒治疗肝癌的体内研究打下基础。 展开更多
关键词 端粒酶逆转录酶 缺氧反应元件 增殖腺病毒 il24 肝癌
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白细胞介素-24基因在膝关节骨性关节炎发病中的作用及意义 被引量：5
6
作者 刘扬 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第13期63-67,共5页
目的探讨白细胞介素-24(IL-24)基因在膝关节骨性关节炎(KOA)疾病中的作用及意义,为KOA的早期诊断及基因治疗提供一定的科学依据。方法选择该医院骨科原发性KOA的滑膜标本,提取总RNA,用实时逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测KOA... 目的探讨白细胞介素-24(IL-24)基因在膝关节骨性关节炎(KOA)疾病中的作用及意义,为KOA的早期诊断及基因治疗提供一定的科学依据。方法选择该医院骨科原发性KOA的滑膜标本,提取总RNA,用实时逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测KOA滑膜组织中IL-24基因的表达。结果 IL-24基因表达在KOA滑膜组织中降低(P<0.01)。结论 IL-24在膝关节骨性关节炎滑膜中的表达降低,且与KOA病变关系密切,为将来诊断和基因治疗膝关节骨性关节炎疾病提供参考。 展开更多
关键词 膝关节骨性关节炎 IL-24 基因
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新型重组IL6D24PE40KDEL外毒素融合蛋白的理化分析
7
作者 崔建武 郭斯启 +3 位作者 孙玉英 刘楠 梁飞 奚永志 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期825-828,共4页
为了对构建成功的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白的部分物化表征进行分析鉴定 ,采用Edman法、SDS PAGE法、胰蛋白酶消化的MALDI TOF MS质谱法、蛋白印迹法和MTT法分别测定该融合蛋白的N 末端 6个氨基酸、相对分子量、肽谱、... 为了对构建成功的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白的部分物化表征进行分析鉴定 ,采用Edman法、SDS PAGE法、胰蛋白酶消化的MALDI TOF MS质谱法、蛋白印迹法和MTT法分别测定该融合蛋白的N 末端 6个氨基酸、相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性。结果表明 :所构建表达纯化的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白N末端 6个氨基酸序列为Met Ile Asp Lys Gln Ile ,而IL 6缺失 2 4个氨基酸后的原序列为Ile Asp Lys Gln Ile ,由于采用了大肠杆菌表达系统 ,因此在N末端第 1位多出了 1个Met,经12 %SDS PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算 ,其相对分子量为 5 8.75kD ,与理论值 5 6.9kD相比误差在5 %之内。MALTI TOF MS质谱测定共获得 10个与理论预测值相符的肽段 ,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明 ,在分子量为 5 7kD左右的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白 ,证明本融合蛋白为全新蛋白 ,与预测的目的蛋白相符。WB实验显示IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白能与IL 6及PEA抗体特异性结合。MTT生物活性测定表明 ,该融合蛋白对表达IL 6R的多发性骨髓瘤细胞系U2 66产生特异性杀伤 ,而对不表达IL6R的CEM淋巴细胞系无任何杀伤。结论 展开更多
关键词 外毒素融合蛋白 IL6D24-PE40KDEL 纯化鉴定
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重组人白细胞介素24蛋白对胰腺癌细胞生长的影响
8
作者 杜丽川 郝建宇 +1 位作者 黄秉仁 崔迎宾 《中国药物与临床》 CAS 2008年第3期174-176,共3页
目的构建人白细胞介素24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中诱导表达,观察纯化后的IL-24融合蛋白导致人胰腺癌细胞(Panc-1)生长抑制的作用。方法用限制性内切酶从质粒pET30b-IL-24中酶切获取人IL-24cDNA片段。并将该片段与pET42a原核... 目的构建人白细胞介素24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中诱导表达,观察纯化后的IL-24融合蛋白导致人胰腺癌细胞(Panc-1)生长抑制的作用。方法用限制性内切酶从质粒pET30b-IL-24中酶切获取人IL-24cDNA片段。并将该片段与pET42a原核表达载体基因重组,在大肠杆菌中实现重组基因的表达,提取并纯化rhIL-24蛋白。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和Westernblot对表达产物进行鉴定。以不同浓度的重组蛋白IL-24与胰腺癌细胞Panc-1、正常肝胚细胞CCC-HEL-1共培养48h,同时设立相应浓度梯度的HIS-GST融合蛋白组对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的生长抑制情况。结果酶切结果证实,成功构建了pET42a-IL24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达。rhIL-24蛋白以浓度依赖性的关系抑制Panc-1细胞的生长,抑制率明显高于HIS-GST蛋白。结论rhIL-24蛋白对胰腺癌细胞Panc-1生长有抑制作用。 展开更多
关键词 白细胞介素类 原核表达 HIS—GST—IL—24融合蛋白 人胰腺癌细胞
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新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的表达优化及下游纯化
9
作者 崔建武 罗卫东 +3 位作者 梁飞 刘楠 孙玉英 奚永志 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2005年第6期454-458,共5页
目的优化提高重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白在原核细胞中的表达量,并建立有效的下游纯化路线。方法对IL6D24-PE40KDEL的受体菌、菌体生长状态及诱导表达时间等进行优化,经反复筛选确定了高效简捷的纯化路线:即将Q型强离子交换树脂... 目的优化提高重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白在原核细胞中的表达量,并建立有效的下游纯化路线。方法对IL6D24-PE40KDEL的受体菌、菌体生长状态及诱导表达时间等进行优化,经反复筛选确定了高效简捷的纯化路线:即将Q型强离子交换树脂与DEAE弱离子交换树脂相结合的两步纯化法。结果宿主工程菌HB101的优化表达条件为2%接种量,30℃培养3h,42℃再诱导4h,可使目标蛋白的表达量由最初的13.5%提高到23.8%;经12%SDS-PAGE蛋白电泳证实,特异性表达产物为包涵体形式,占包涵体蛋白的40%,分子量约为60kD,与所预测的IL6D24-PE40KDEL融合蛋白的分子量相吻合。两步纯化法可获得纯度>95%的IL6D24-PE40KDEL融合蛋白,纯化蛋白的回收率为8.7%,经Western-blot实验证明,它可同PEA多抗和IL6单抗特异性的结合。MTT试验检测证实,该融合蛋白能特异性的杀伤高表达IL6R的U266多发性骨髓瘤细胞,ID50为180ng/ml;而对IL6R的T淋巴白血病细胞CEM则无杀伤,ID50>1000ng/ml。结论获得了高表达重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的菌株并建立了高效简捷的下游纯化路线,融合蛋白能特异性的杀伤表达IL6R的多发性骨髓瘤细胞系U266。 展开更多
关键词 毒素融合蛋白 重组 IL6D24-PE40KDEL 蛋白/表达优化 蛋白/纯化
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携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应
10
作者 何国清 罗小芳 +3 位作者 雷文 孔彦平 马卉 王毅刚 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第6期913-918,共6页
研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表... 研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P<0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。 展开更多
关键词 ZD55-IL-24 5-FU 肺癌细胞NCI-H460 凋亡
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