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具有人鼠交叉结合活性的抗IL-1R3抗体的筛选与鉴定
1
作者 秦慧 郁心蕊 +5 位作者 刘娇 古丽赛娜·恰尔谢 崔靖敏 王茜 杜鹏 周春阳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期14-24,共11页
目的:IL-1受体辅助蛋白(IL-1R3)是炎症调控的潜在新靶点。筛选获得具有人鼠交叉结合活性的抗IL-1R3抗体,为炎症干预机制探究与新药开发奠定基础。方法:基于对人源和鼠源IL-1R3氨基酸序列与结构的比对,采用交替包被人源和鼠源IL-1R3的策... 目的:IL-1受体辅助蛋白(IL-1R3)是炎症调控的潜在新靶点。筛选获得具有人鼠交叉结合活性的抗IL-1R3抗体,为炎症干预机制探究与新药开发奠定基础。方法:基于对人源和鼠源IL-1R3氨基酸序列与结构的比对,采用交替包被人源和鼠源IL-1R3的策略对噬菌体抗体库进行筛选;将获得的抗体可变区基因克隆到真核表达载体,制备抗体样品;在分子和细胞水平对候选抗体的结合活性与功能活性进行评价;采用重新配对抗体轻链与重链的策略获得新抗体,尝试改善其特性。结果:筛选获得5个具有人鼠交叉结合活性的抗IL-1R3抗体,其中4个对人源和鼠源IL-1R3的亲和力相当,均在10^(-7)mol/L水平;2个溶解度较好的抗体在细胞水平上具有阻断活性;重新配对候选抗体的轻链与重链,获得1个溶解度明显提升且结合活性有所改善的新抗体。结论:优选获得2个具有人鼠交叉结合活性的抗IL-1R3抗体AET1907和4H6L,为后续深入探索奠定了物质基础。 展开更多
关键词 il-1r3 抗体 噬菌体展示 抗体库 交叉结合活性 溶解度
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栀子多糖调控P2X7R/NLRP3/IL-1β通路对抑郁症大鼠海马损伤的作用机制
2
作者 孙小燕 韩月娇 +4 位作者 盛蕊 仵志欢 李颖娟 陈海霞 邢敏 《南昌大学学报(医学版)》 2025年第4期51-55,共5页
目的探究栀子多糖调控P2X7R/NLRP3/IL-1β通路对抑郁症大鼠海马组织损伤的可能作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、抑郁症组、栀子多糖+抑郁症组,每组10只。采用旷场实验、糖水偏好实验及强迫游泳实验检测大鼠抑郁情况;采用HE... 目的探究栀子多糖调控P2X7R/NLRP3/IL-1β通路对抑郁症大鼠海马组织损伤的可能作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、抑郁症组、栀子多糖+抑郁症组,每组10只。采用旷场实验、糖水偏好实验及强迫游泳实验检测大鼠抑郁情况;采用HE染色检测海马组织病理损伤情况,Nissl染色检测Nissl小体,Western blotting检测海马组织中P2X7R、NLRP3、IL-1β蛋白表达水平,TUNEL试剂盒检测海马组织凋亡水平。结果与对照组相比,抑郁症组大鼠中央停留时间、休憩时间、穿越总格数、糖水偏好率显著减少(P<0.05),不动时间显著增加(P<0.05),海马区细胞排列紊乱,层次结构不明显,细胞之间的间隙增大,出现细胞松散分布的现象,部分细胞核固缩,染色加深,Nissl小体数量减少,且分布不均匀,海马组织中TUNEL阳性率显著增加(P<0.05),海马组织中P2X7R、NLRP3、IL-1β的蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与抑郁症组相比,栀子多糖+抑郁症组大鼠中央停留时间、休憩时间、穿越总格数、糖水偏好率显著增加(P<0.05),不动时间显著减少(P<0.05),海马区细胞排列及结构改善,Nissl小体数量增加,海马组织中TUNEL阳性率显著减少(P<0.05),海马组织中P2X7R、NLRP3、IL-1β的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论栀子多糖可通过下调P2X7R/NLRP3/IL-1β通路改善抑郁症大鼠海马组织损伤。 展开更多
关键词 抑郁症 栀子多糖 P2X7r/NLrP3/il-1β通路 海马组织损伤 动物 实验 大鼠
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IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移 被引量：4
3
作者 季加标 宋杨 +1 位作者 杨明 杨见明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第11期1637-1641,共5页
目的研究白介素(IL)-17通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移。方法以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Western blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中I... 目的研究白介素(IL)-17通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移。方法以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Western blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中IL-6、IL-6R、JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3的表达变化。迁移、侵袭实验观察IL-17的刺激对Hep-2细胞侵袭、迁移的影响。结果 Western blot实验中,在IL-17刺激下,1、50、100 ng/ml浓度组较0 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P<0.01),50、100 ng/ml浓度组较1 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P<0.01),100 ng/ml浓度组较50 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P<0.01);各组间JAK1、STAT3的表达无明显变化。侵袭与迁移实验显示IL-17可以促进Hep-2细胞的侵袭和迁移。结论 IL-17可能通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 il-17 il-6/il-6r/JAK1/STAT3信号通路 喉癌
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清热通络方对痛风性关节炎大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路的影响 被引量：5
4
作者 沈嘉艳 杨琦 +2 位作者 张晓宇 谢招虎 李兆福 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2061-2066,共6页
目的:研究清热通络方通过P2X7R/NALP3/IL-1β炎症信号通路干预痛风性关节炎(GA)大鼠的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,秋水仙碱组,清热通络方低、中、高剂量组(1.63、8.14、16.3 g·kg^(-1)·d~(-1))... 目的:研究清热通络方通过P2X7R/NALP3/IL-1β炎症信号通路干预痛风性关节炎(GA)大鼠的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,秋水仙碱组,清热通络方低、中、高剂量组(1.63、8.14、16.3 g·kg^(-1)·d~(-1))。除空白对照组、模型组外,各组大鼠预灌胃给药4 d。除空白对照组外,第4天灌胃后复制GA模型,造模后各时间段(4、6、12、24、48、72 h)检测大鼠踝关节肿胀率和热痛阈。给药7 d后取材,HE染色观察踝关节滑膜病理情况,生化法检测血清ATP水平,ELISA法测血清白细胞介素(IL)-8、IL-37、IL-1β水平,免疫组化法测滑膜组织P2X7R、NF-κB(P50、P65)、NALP3、IL-1β蛋白表达,RT-qPCR检测PBMCs P2X7R、IL-1β mRNA表达,Western Blot检测PBMCs P2X7R、IL-1β蛋白表达。结果:造模后4 h,各组大鼠踝关节肿胀率升高,24 h达高峰后下降;热痛阈下降,24 h达最低后上升。造模72 h后,与模型组比较,秋水仙碱组和清热通络方高剂量组肿胀率和热痛阈显著改善(P<0.05)。秋水仙碱及清热通络方各剂量组踝关节滑膜细胞炎症均有所改善;秋水仙碱组和清热通络方高剂量组血清ATP、IL-8、IL-37、IL-1β水平,PBMCs中P2X7R、IL-1β蛋白及mRNA表达,滑膜组织P2X7R、NALP3、NF-κB(P50、P65)、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论:清热通络方可能通过抑制GA大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路缓解炎症,发挥治疗作用。 展开更多
关键词 痛风性关节炎 清热通络方 P2X7r/NALP3/il-1β信号通路
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醒脑开窍针刺调控P2X7R/NLRP3/IL-1β通路对卒中后抑郁大鼠抑郁行为的影响
5
作者 金玉 王翠 +3 位作者 王非 张京兰 杨晶 刘永梨 《中国比较医学杂志》 2026年第1期51-61,共11页
目的探究醒脑开窍针刺调控嘌呤受体P2X7(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)/白细胞介素1β(IL-1β)通路对卒中后抑郁大鼠抑郁行为的影响。方法构建卒中后抑郁模型大鼠(通过检测血清指标证实其与卒中后非抑郁大鼠存在不同)并... 目的探究醒脑开窍针刺调控嘌呤受体P2X7(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)/白细胞介素1β(IL-1β)通路对卒中后抑郁大鼠抑郁行为的影响。方法构建卒中后抑郁模型大鼠(通过检测血清指标证实其与卒中后非抑郁大鼠存在不同)并将其分为模型组、阳性对照(氟西汀)组、针刺组、通路抑制剂(CBBG)组、针刺+通路激活剂(针刺+BzATP)组,另取健康大鼠作为对照组。检测各组大鼠抑郁样行为(糖水偏好度试验、旷场实验),血清中炎症因子和氧化应激因子水平(ELISA法),海马组织病理变化(HE染色、尼氏小体染色),海马组织中神经元凋亡情况(TUNEL法),海马组织中P2X7R、NLRP3、IL-1β、离子钙结合适配器分子1(Iba-1)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、促凋亡蛋白(Bax)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase3)蛋白表达量(Western blot法)。结果与对照组比较,模型组大鼠糖水偏好度和旷场活动距离明显减少、脑组织发生明显的病理损伤,血清中炎症因子及丙二醛(MDA)含量、神经元凋亡占比显著增加,过氧化氢酶(CAT)活性明显降低,海马组织中P2X7R/NLRP3/IL-1β通路蛋白、Iba-1和促凋亡蛋白表达量明显增加,抗凋亡蛋白表达量降低(P<0.05);与模型组比较,氟西汀、针刺、CBBG组大鼠糖水偏好度和旷场活动距离增加、海马组织病理损伤减轻、尼氏小体数量增多,血清中炎症因子及MDA含量、神经元凋亡占比下降,CAT活性增强,海马组织中P2X7R/NLRP3/IL-1β通路蛋白、Iba-1和促凋亡蛋白表达量降低,抗凋亡蛋白表达量增加(P<0.05);与针刺组相比,针刺+BzATP组大鼠抑郁行为加重、海马组织发生明显病理损伤、尼氏小体数量减少,机体发生炎症和氧化应激反应,P2X7R/NLRP3/IL-1β通路蛋白、Iba-1和促凋亡蛋白表达量升高,抗凋亡蛋白表达量下降(P<0.05)。结论醒脑开窍针刺法可能通过调节P2X7R/NLRP3/IL-1β通路,减轻大鼠炎症和氧化应激反应、抑制神经元凋亡,从而改善大鼠海马组织损伤、发挥抗抑郁作用。 展开更多
关键词 卒中后抑郁 醒脑开窍针刺 P2X7r/NLrP3/il-1β通路
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