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IKK2dn体外转染对大鼠树突状细胞成熟度的影响 被引量：3
1
作者 欧阳骏 樊一笋 +4 位作者 樊彩斌 温端改 侯建全 严春寅 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期745-747,750,共4页
目的:探讨腺病毒介导IKK2dn基因(Adv-IKK2dn)体外转染大鼠树突状细胞(DCs)对其生物学行为的影响。方法:将含有IKK2dn基因的腺病毒载体转染大鼠骨髓源性DCs,获得稳定高表达IKK2dn的DCs。流式细胞术(FCM)分析转染IKK2dn基因DCs的表型变化... 目的:探讨腺病毒介导IKK2dn基因(Adv-IKK2dn)体外转染大鼠树突状细胞(DCs)对其生物学行为的影响。方法:将含有IKK2dn基因的腺病毒载体转染大鼠骨髓源性DCs,获得稳定高表达IKK2dn的DCs。流式细胞术(FCM)分析转染IKK2dn基因DCs的表型变化,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激同种T细胞增殖的能力,ELISA测定MLR上清IL-10和IFN-γ水平。结果:Westernblot结果显示,转染pAdxsi-GFP-IKK2dn病毒质粒的DCs稳定表达IKK2dn。转染IKK2dn基因的DCs与未转基因的DCs相比,表面CD86和MHC-II的表达水平无显著差异。和负载BN大鼠抗原的未转染IKK2dn的DCs相比,转染IKK2dn并负载BN抗原的DCs刺激同种T细胞增殖能力显著下降(P<0.01),MLR上清中IL-10水平升高(P<0.01),而IFN-γ水平降低(P<0.01)。结论:IKK2dn基因的转染能使DCs维持于未成熟状态。同时,负载BN抗原的转IKK2dn基因的DCs可以抑制同种T细胞增殖反应,为诱导体内免疫耐受提供了实验依据。 展开更多
关键词 ikk2dn 树突状细胞 混合淋巴细胞反应 BN抗原
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编码人IKK2dn重组腺病毒载体的构建及表达验证 被引量：1
2
作者 樊彩斌 温端改 +5 位作者 欧阳骏 农绍军 侯建全 严春寅 浦金贤 张学光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第2期296-300,共5页
目的构建含有人IKK2dn基因的重组腺病毒载体,为转染未成熟树突状细胞(DC)诱导免疫耐受研究奠定基础。方法从质粒pACCMVPLPASR(+)-IKK2dn中酶切出IKK2dn基因,并插入pShuttle-CMV-GFP(-)TEMP载体中构建成腺病毒穿梭质粒,KpnI/HindⅢ酶切... 目的构建含有人IKK2dn基因的重组腺病毒载体,为转染未成熟树突状细胞(DC)诱导免疫耐受研究奠定基础。方法从质粒pACCMVPLPASR(+)-IKK2dn中酶切出IKK2dn基因,并插入pShuttle-CMV-GFP(-)TEMP载体中构建成腺病毒穿梭质粒,KpnI/HindⅢ酶切鉴定。将pShuttle-CMV-GFP(-)TEMP-IKK2dn转移到pAdxsi载体上,得到pAdxsi-GFP-IKK2dn病毒质粒,XhoI酶切后鉴定。将鉴定正确的质粒用脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293细胞,包装成重组病毒颗粒;并在HEK293细胞中反复扩增并纯化,根据报告基因GFP测定病毒滴度。转染宫颈癌细胞株HeLa细胞后采用RT-PCR检测目的基因的表达。结果经酶切和RT-PCR鉴定,得到预期的1060bp条带,证实成功构建了携带IKK2dn基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度(2×1011PFU/ml)的重组腺病毒。结论成功构建了含IKK2dn-cDNA的重组腺病毒,为进一步研究用IKK2dn基因修饰DC诱导免疫耐受等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒载体 ikk2dn 树突状细胞
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转染IKK2dn的受者树突状细胞回输延长同种异体肾移植大鼠的存活时间 被引量：2
3
作者 欧阳骏 樊彩斌 +3 位作者 温端改 侯建全 严春寅 张学光 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期148-152,共5页
目的 探讨IKK2dn基因转染并负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞（imDC）延长同种异体肾移植大鼠的存活时间及其机制。方法获取和培养Lewis大鼠骨髓源性DC，转染IKK2dn并负载BN大鼠可溶性抗原进行体外实验，检测CD86和主要组织相容性复... 目的 探讨IKK2dn基因转染并负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞（imDC）延长同种异体肾移植大鼠的存活时间及其机制。方法获取和培养Lewis大鼠骨髓源性DC，转染IKK2dn并负载BN大鼠可溶性抗原进行体外实验，检测CD86和主要组织相容性复合物（MHC）II的表达及DC刺激T淋巴细胞增殖的能力。。肾移植受者为Lewis大鼠，用随即数字表法分DC组、空转染组、转染组、对照组，术前7d分别输注1×10^7个DC、Adv-0-DC、负载BN抗原的Adv-IKK2dn-DC和等量生理盐水，供者均为BN大鼠，另设第i方供者组，术前处理同转染组，供者为Wistar大鼠。移植后检测各组受者T淋巴细胞的增殖能力及血清白细胞介素2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）的表达水平，观察各组大鼠的存活时间和发生排斥反应情况。结果DC的体外实验结果显示：与转染IKK2dn前相比，转染后DC仍能低水平表达CD86和MHCⅡ，负载供者抗原后CD86和MHCⅡ表达均增加，而转染IKK2dn后再负载供者抗原，CD86和MHCⅡ的表达未发生明显变化；DC负载供者抗原后，刺激T淋巴细胞增殖的能力明显增强（P〈0．05），而转染IKK2dn并负载供者抗原后不能有效刺激T淋巴细胞增殖。肾移植术后的检测结果显示：转染组T淋巴细胞的增殖能力明显低于其他4组（P〈0．05或P〈0．01），血清ID2和IFN-γ水平也显著降低。转染组移植肾存活时间为（26．8±1．76）d，较其他各组显著延长（P〈0．01），并且转染组发生排斥反应的病理级别较低，病理学观察仅见间质少量炎症细胞浸润，肾小球和肾小管基本正常。结论IKK2dn基因转染并负载供者抗原的受者imDC回输可以延长同种异体肾移植大鼠存活时间，其机制可能与降低DC共刺激分子表达、抑制TH1细胞因子产生有关。 展开更多
关键词 树突细胞 ikk2dn 肾移植 大鼠
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IKK2dn转染树突状细胞诱导产生的CD4＋CD25-T细胞的筛选及鉴定
4
作者 樊彩斌 张东兴 +3 位作者 温端改 侯建全 欧阳骏 杜科霖 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1076-1079,F0003,共5页
目的探讨从转染IKK2dn并负载供者抗原的未成熟树突状细胞（imDC）诱导产生的调节性T细胞（Treg）中筛选CD4＋CD25-Treg的方法，并进行鉴定。方法Lewis大鼠骨髓源性imDC，转染IKK2dn后负载供者BN大鼠抗原，与Lewis大鼠T细胞进行体外混合... 目的探讨从转染IKK2dn并负载供者抗原的未成熟树突状细胞（imDC）诱导产生的调节性T细胞（Treg）中筛选CD4＋CD25-Treg的方法，并进行鉴定。方法Lewis大鼠骨髓源性imDC，转染IKK2dn后负载供者BN大鼠抗原，与Lewis大鼠T细胞进行体外混合淋巴细胞反应（MLR）诱导产生Treg，用免疫磁珠法（MACS）筛选出CD4＋CD25-T细胞，流式细胞仪（FCM）检测细胞纯度。加入CD4＋CD25-T细胞行再次MLR检测其抑制T细胞增殖的作用。结果经MACS筛选，CD4＋CD25-T细胞纯度为（95．78±1．25）％。再次MLR结果显示CD4＋CD25-T细胞组的吸光度值为（0．106±0．006），低于BN抗原组（0．189±0．007）、Adv0—CD4＋T细胞组（0．419±0．014）及第三方供者抗原组（0．200±0．008），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论转染IKK2dn并负载抗原的imDC诱导产生的Treg，经MACS筛选可以获得高纯度的CD4＋CD25-T细胞，对同种T细胞增殖具有针对供者的特异性免疫抑制作用。 展开更多
关键词 树突状细胞 ikk2dn 混合淋巴细胞反应 调节性T细胞
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