目的:研究核转录因子κB抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)抑制剂对大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的影响。方法:将32只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、盐水组和药物组,盐水组和药物组建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型。...目的:研究核转录因子κB抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)抑制剂对大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的影响。方法:将32只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、盐水组和药物组,盐水组和药物组建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型。盐水组与假手术组均给予生理盐水注射,药物组给予IKK抑制剂注射,造模成功后15 d,采用HE染色观察血管内皮形成及内膜的增生情况,采用蛋白质印迹法检测核转录因子κB(NF-κB)、IKK、NF-κB抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor kappa B,IκB)的表达情况,采用放射免疫法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用基质金属蛋白酶1(MMP-1)检测试剂盒检测MMP-1的含量。结果:假手术组、药物组及盐水组大鼠颈总动脉内膜均逐渐增厚。假手术组和药物组与盐水组内膜面积,NF-κB、IKK、IκB表达水平,及IL-6、TNF-α、MMP-1含量比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),假手术组和盐水组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IKK抑制剂通过抑制IKK-IκB-NF-κB通道所诱导的炎症反应,可以抑制血管损伤后再狭窄的发生。展开更多
目的:研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药前后人大肠癌(结直肠癌)HT-29细胞中透明质酸蛋白聚糖连结蛋白1(hyaluronan and proteoglycan link protein 1,HAPLN1)表达的变化及其对MTX耐药性的影响,并探究可能的分子机制。方法:采用浓度...目的:研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药前后人大肠癌(结直肠癌)HT-29细胞中透明质酸蛋白聚糖连结蛋白1(hyaluronan and proteoglycan link protein 1,HAPLN1)表达的变化及其对MTX耐药性的影响,并探究可能的分子机制。方法:采用浓度梯度递增法构建耐药细胞株HT-29/MTX;RT-PCR检测HAPLN1和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的mRNA表达水平;采用脂质体介导法将人HAPLN1和MRP2基因的干扰质粒转染HT-29/MTX细胞并筛选出稳定表达的细胞系;采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测HAPLN1、MRP2、IκB激酶(IκB kinase,IKK)α/β、p-IKKα/β(Ser176/Ser177)、p65和p-p65(Ser536)的蛋白水平。结果:HT-29/MTX细胞中HAPLN1和MRP2的mRNA和蛋白表达水平都显著高于其亲代HT-29细胞(P<0.05),耐药倍数高达463.756。抑制HAPLN1和MRP2基因表达使MTX对HT-29/MTX细胞的IC_(50)从15.304μmol/L分别降至6.119μmol/L和7.801μmol/L,逆转倍数分别为2.501和1.962,并增强MTX诱导的细胞凋亡(P<0.05)。敲减HAPLN1基因表达和使用IKK抑制剂IKK16均可下调IKKα/β和p65蛋白磷酸化水平以及MRP2蛋白表达水平(P<0.05),但IKK16未对HAPLN1蛋白表达产生影响(P>0.05)。结论:敲减HAPLN1基因表达可在体外增强人大肠癌耐药细胞株HT-29/MTX对MTX的敏感性,这可能与其抑制IKK/p65信号通路活化,继而下调MRP2基因表达有关。展开更多
文摘目的:研究核转录因子κB抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)抑制剂对大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的影响。方法:将32只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、盐水组和药物组,盐水组和药物组建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型。盐水组与假手术组均给予生理盐水注射,药物组给予IKK抑制剂注射,造模成功后15 d,采用HE染色观察血管内皮形成及内膜的增生情况,采用蛋白质印迹法检测核转录因子κB(NF-κB)、IKK、NF-κB抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor kappa B,IκB)的表达情况,采用放射免疫法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用基质金属蛋白酶1(MMP-1)检测试剂盒检测MMP-1的含量。结果:假手术组、药物组及盐水组大鼠颈总动脉内膜均逐渐增厚。假手术组和药物组与盐水组内膜面积,NF-κB、IKK、IκB表达水平,及IL-6、TNF-α、MMP-1含量比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),假手术组和盐水组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IKK抑制剂通过抑制IKK-IκB-NF-κB通道所诱导的炎症反应,可以抑制血管损伤后再狭窄的发生。
文摘目的:研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药前后人大肠癌(结直肠癌)HT-29细胞中透明质酸蛋白聚糖连结蛋白1(hyaluronan and proteoglycan link protein 1,HAPLN1)表达的变化及其对MTX耐药性的影响,并探究可能的分子机制。方法:采用浓度梯度递增法构建耐药细胞株HT-29/MTX;RT-PCR检测HAPLN1和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的mRNA表达水平;采用脂质体介导法将人HAPLN1和MRP2基因的干扰质粒转染HT-29/MTX细胞并筛选出稳定表达的细胞系;采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测HAPLN1、MRP2、IκB激酶(IκB kinase,IKK)α/β、p-IKKα/β(Ser176/Ser177)、p65和p-p65(Ser536)的蛋白水平。结果:HT-29/MTX细胞中HAPLN1和MRP2的mRNA和蛋白表达水平都显著高于其亲代HT-29细胞(P<0.05),耐药倍数高达463.756。抑制HAPLN1和MRP2基因表达使MTX对HT-29/MTX细胞的IC_(50)从15.304μmol/L分别降至6.119μmol/L和7.801μmol/L,逆转倍数分别为2.501和1.962,并增强MTX诱导的细胞凋亡(P<0.05)。敲减HAPLN1基因表达和使用IKK抑制剂IKK16均可下调IKKα/β和p65蛋白磷酸化水平以及MRP2蛋白表达水平(P<0.05),但IKK16未对HAPLN1蛋白表达产生影响(P>0.05)。结论:敲减HAPLN1基因表达可在体外增强人大肠癌耐药细胞株HT-29/MTX对MTX的敏感性,这可能与其抑制IKK/p65信号通路活化,继而下调MRP2基因表达有关。
