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犬源干扰素刺激基因ISG15和IFIT2荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
1
作者 王改丽 程悦宁 +5 位作者 张淑琴 王建科 王超 孙娜 易立 程世鹏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1119-1123,1135,共6页
干扰素刺激基因在抗病毒及调节IFN信号通路的过程中具有重要作用。本课题组前期对犬瘟热病毒(CDV)感染宿主前后全转录组进行测序分析,发现干扰素刺激基因ISG15和IFIT2明显上调,为了进一步探究ISG15和IFIT2对CDV感染的影响,本研究设计合... 干扰素刺激基因在抗病毒及调节IFN信号通路的过程中具有重要作用。本课题组前期对犬瘟热病毒(CDV)感染宿主前后全转录组进行测序分析,发现干扰素刺激基因ISG15和IFIT2明显上调,为了进一步探究ISG15和IFIT2对CDV感染的影响,本研究设计合成了犬源ISG15、IFIT2和持家基因GAPDH的特异性引物,分别进行PCR扩增,构建质粒标准品,建立荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验。结果表明,犬源ISG15、IFIT2和GAPDH的荧光定量PCR标准曲线的相关性R^2均大于0.98,表明线性关系良好。ISG15、IFIT2和GAPDH的融解曲线均为单峰,扩增产物单一,且峰值一致,表明建立的荧光定量PCR方法特异性良好。组内与组间的变异系数均小于0.2%,表明该方法重复性较好。对CDV感染宿主细胞前后的ISG15和IFIT2 mRNA表达水平进行检测,发现CDV感染后ISG15和IFIT2的表达量升高,表明ISG15和IFIT2在CDV感染过程中发挥重要作用。该结果为针对CDV与干扰素抗病毒研究的开展提供重要的技术手段,并为进一步揭示CDV致病的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 干扰素刺激基因 ISG15 ifit2 荧光定量PCR
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脂肪量和肥胖相关蛋白FTO调控IFIT2促进肝细胞癌发生发展 被引量：2
2
作者 兰兰 宣自学 姜金颖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期834-839,共6页
目的初步研究脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)调控肝细胞癌(HCC)的分子机制。方法构建FTO敲低的肝细胞癌细胞系HepG2细胞,收集FTO敲低的和未敲低的HepG2细胞,利用Illumina Hiseq平台进行高通量测序,筛选两组别间基因表达差异;通过对这些差异... 目的初步研究脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)调控肝细胞癌(HCC)的分子机制。方法构建FTO敲低的肝细胞癌细胞系HepG2细胞,收集FTO敲低的和未敲低的HepG2细胞,利用Illumina Hiseq平台进行高通量测序,筛选两组别间基因表达差异;通过对这些差异基因进行GO和KEGG富集分析,研究FTO调控通路及筛选FTO下游靶基因;利用生信分析和细胞实验揭示FTO下游靶基因在HCC中的作用。结果转录组测序结果显示,FTO敲低的和未敲低的HepG2细胞间有386个基因发生了差异性表达,它们参与对干扰素-γ的反应等生物过程;FTO敲低后IFIT2(响应性最强的干扰素刺激基因之一)表达上调;IFIT2多个位点会发生潜在的m^(6)A甲基化;IFIT2高表达HCC患者生存期显著延长,敲低IFIT2促进HCC生长和迁移。结论FTO可能通过介导m^(6)A调控IFIT2,进而促进HCC发生发展。 展开更多
关键词 FTO ifit2 肝细胞癌 转录组测序 HEPG2 m^(6)A
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