IER5基因对HeLa细胞辐射敏感性的影响 被引量：6

1

作者 李秀楠 李莉 +10 位作者 杨川杰 郝淳 乔茶 杨芬 周平坤 王佩 袁增强 李延玲 鲁玮媛 张为远 丁库克 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期847-853,共7页

为寻找放射敏感性基因,采用基因芯片技术筛选出辐射可诱导表达mRNA上调的基因,其中就有IER5.为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌放疗中的作用,采用RNA干扰技术构建IER5基因表达抑制的质粒载体并构建IER5-siRNA-HeLa细胞系.对该细... 为寻找放射敏感性基因,采用基因芯片技术筛选出辐射可诱导表达mRNA上调的基因,其中就有IER5.为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌放疗中的作用,采用RNA干扰技术构建IER5基因表达抑制的质粒载体并构建IER5-siRNA-HeLa细胞系.对该细胞系与HeLa细胞进行辐射,旨在了解IER5-siRNA-HeLa的细胞生长曲线、细胞周期等实验参数的变化,揭示了IER5基因在辐射诱导中的生物学功能.实验发现,IER5基因表达抑制可提高细胞分裂进入S期与G2-M期的比例,促进细胞分裂,促进细胞生长,提高细胞对辐射的拮抗性,同时发现IER5-siRNA-HeLa细胞在尺寸上大于HeLa细胞.研究表明,IER5基因表达抑制可促使细胞受辐射后发生S期与G2-M期的阻滞,IER5参与辐射细胞周期的调控,对临床宫颈癌放疗有一定的潜在应用价值. 展开更多

关键词 ier5 早期反应基因 HELA细胞 辐射敏感性 宫颈癌

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利用RNA干扰技术构建IER5-SiRNA-Hela细胞系 被引量：4

2

作者 李莉 赵焕英 +6 位作者 杨川杰 鲁苇媛 郝淳 乔茶 周平坤 徐勤芝 丁库克 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第1期3-6,共4页

目的观察小干扰RNA(siRNA)转染Hela细胞后,对IER5基因抑制效果,筛选出高效的siRNA转染质粒。方法利用siRNA设计软件,将设计好的RNA片断插入到siRNA表达质粒载体PsilencerTM 3.1-H1 hygro中,测序正确后转染至Hela细胞中。利用Real-time ... 目的观察小干扰RNA(siRNA)转染Hela细胞后,对IER5基因抑制效果,筛选出高效的siRNA转染质粒。方法利用siRNA设计软件,将设计好的RNA片断插入到siRNA表达质粒载体PsilencerTM 3.1-H1 hygro中,测序正确后转染至Hela细胞中。利用Real-time PCR的方法 ,测定siRNA对Hela细胞中IRE5的抑制效果。结果在mRNA水平及Western blot测试,IER5-siRNA-Hela细胞的IER5基因mRNA表达抑制效果明显。从细胞形态上讲,IER5-siRNA-Hela细胞与正常Hela细胞相比,IER5-siRNA-Hela细胞比Hela细胞体积大。结论本实验成功的获得了特异性抑制IER5基因的IER5-siRNA-Hela细胞系。 展开更多

关键词 REAL-TIMEPCR ier5基因 早期反应基因

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GCF低表达宫颈癌HeLa细胞系的构建及辐射对其调控IER5基因表达的初步探究 被引量：2

3

作者 史海敏 丁库克 +4 位作者 周平坤 陈丹 郭冬梅 赵春丽 张新 《医学研究杂志》 2015年第4期37-41,共5页

目的构建GCF低表达的宫颈癌He La细胞系,在60Coγ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。方法经带有荧光标记的GCF低表达的质粒稳定转染He La细胞,G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到GCF-shRNA-H... 目的构建GCF低表达的宫颈癌He La细胞系,在60Coγ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。方法经带有荧光标记的GCF低表达的质粒稳定转染He La细胞,G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到GCF-shRNA-He La单克隆细胞系。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法探究不同剂量照射后的细胞增殖情况,在不同照射剂量下用蛋白印迹法检测GCF-shRNA-He La及对照细胞中IER5蛋白的表达情况。结果成功构建稳定表达的GCF-shRNA-He La单克隆细胞系,显微镜下观察GCF-shRNA-He La细胞比正常He La细胞体积小,细胞间隙较大,其中梭形细胞较多。蛋白印迹法及实时定量PCR验证了GCF-shRNA-He La的蛋白表达及mRNA转录水平均低于对照组(P<0.05)。辐射情况下实验结果显示在同一照射剂量、同一时间下GCF-shRNA-He La细胞比control对照细胞增殖缓慢(P=0.014)。不同剂量照射情况下蛋白印迹法检测He La细胞、control-shRNA-He La与GCF-shRNA-He La细胞IER5蛋白表达情况,结果同一辐照剂量下GCF沉默的细胞系中IER5的表达量比对照细胞高,4Gy照射的GCF-shRNA-HeLa的IER5表达量最高(P<0.05)。结论本实验构建了低表达GCF的He La细胞系,初步探讨GCF作为IER5基因抑制性转录因子的作用。结合临床基因靶向治疗,可寻求可以降低GCF表达的方式,通过上调IER5表达这一双效途径来加速宫颈癌细胞凋亡。 展开更多

关键词 GCF ier5 HELA细胞 细胞增殖

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宫颈癌细胞辐射敏感性与IER5基因的关系 被引量：1

4

作者 吉晨 吴玉梅 +1 位作者 李秀楠 周平坤 《肿瘤学杂志》 CAS 2017年第4期305-311,共7页

[目的]通过RNA干扰技术致基因沉默和基因过表达的方法研究IER5基因与宫颈癌SiHa细胞系辐射敏感性的相关性,探讨IER5基因不同表达的细胞系对辐射敏感性的差异。[方法]构建IER5沉默及过表达的真核表达载体,转染细胞并筛选出稳定表达的细胞... [目的]通过RNA干扰技术致基因沉默和基因过表达的方法研究IER5基因与宫颈癌SiHa细胞系辐射敏感性的相关性,探讨IER5基因不同表达的细胞系对辐射敏感性的差异。[方法]构建IER5沉默及过表达的真核表达载体,转染细胞并筛选出稳定表达的细胞系,经Western Blot和Real-time PCR鉴定成功。观察IER5基因不同表达的3种细胞系的形态;对细胞系进行4Gy的辐射后使用CCK-8检测细胞生长曲线;对细胞系进行10Gy的辐射后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;对细胞系进行4Gy的辐射后使用流式细胞仪检测不同时间点细胞周期的情况。[结果]IER5基因沉默使SiHa细胞略有增大,照射后的细胞增殖速度加快;而其过表达可使SiHa细胞缩小呈圆形,并且细胞增殖速度有所减慢。IER5沉默导致辐射诱导的SiHa细胞凋亡率降低,过表达可促进辐射诱导的SiHa细胞凋亡,其凋亡在照射后48h最为显著。照射后细胞周期的G2-M期阻滞效应随IER5表达含量的降低而升高,IER5基因沉默促进细胞的增殖分裂。[结论 ]IER5基因与宫颈癌SiHa细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化及对辐射的反应有明显相关性,IER5基因可能可提高宫颈癌细胞对放射的敏感性。 展开更多

关键词 ier5基因 SIHA细胞 细胞系构建 辐射敏感性 宫颈肿瘤

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早期反应基因IER5生物学功能研究

5

作者 丁库克 杨川杰 +1 位作者 周平坤 李莉 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期159-160,共2页

采用基因芯片技术筛选出IER5基因辐射后出现mRNA表达上调。为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌的放疗中的作用。

关键词 ier5 早期反应基因 HELA 辐射敏感性 宫颈癌

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人IER5基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

6

作者 熊强 姜晓燕 +3 位作者 丁立新 刘晓丹 周平坤 丁库克 《癌变·畸变·突变》 CAS 2020年第1期57-61,66,共6页

目的:利用昆虫杆状病毒表达系统表达早期快速反应基因5(IER5)蛋白,为后续蛋白质结晶及探索蛋白质三级结构提供线索。方法:以HeLa细胞cDNA为模板扩增出IER5基因片段,构建重组转移质粒pFastBac1-IER5;重组转移质粒经双酶切及测序鉴定后转... 目的:利用昆虫杆状病毒表达系统表达早期快速反应基因5(IER5)蛋白,为后续蛋白质结晶及探索蛋白质三级结构提供线索。方法:以HeLa细胞cDNA为模板扩增出IER5基因片段,构建重组转移质粒pFastBac1-IER5;重组转移质粒经双酶切及测序鉴定后转化至感受态细胞DH10Bac,以获得重组的穿梭质粒rBacmid-IER5;将重组穿梭质粒感染Sf9细胞,待细胞出现明显病变时收集重组杆状病毒;用间接免疫荧光、SDS-PAGE及Western blot以及对表达产物进行分析鉴定。结果:重组转移质粒pFastBac1-IER5经双酶切后得到与预期相同的2条条带;重组穿梭质粒rBacmid-IER5经PCR鉴定在3300 bp左右出现一条特异性条带;间接免疫荧光结果提示IER5蛋白在Sf9细胞中得到表达;SDS-PAGE结果显示,表达产物的相对分子质量约为48 k,Western blot结果表明表达产物能与IER5抗体特异性结合。结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统成功表达了人IER5蛋白,获得了体外表达重组IER5蛋白的相对分子质量、溶解性等物理化学特性。 展开更多

关键词 ier5 SF9细胞 杆状病毒表达系统 鉴定

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IER5和Ku70在子宫颈癌中的表达及临床意义

7

作者 魏雯雯 刘宋宋 张淞盛 《临床和实验医学杂志》 2019年第18期1970-1974,共5页

目的探讨IER5和Ku70在子宫颈癌中的表达及临床意义。方法前瞻性选取2010年5月至2016年5月山东大学第二妇幼保健院收治的首次接受同步放化疗的子宫颈癌患者120例为研究对象。采集患者的子宫颈癌组织,根据不同病理特点、不同放射剂量(0 Gy、... 目的探讨IER5和Ku70在子宫颈癌中的表达及临床意义。方法前瞻性选取2010年5月至2016年5月山东大学第二妇幼保健院收治的首次接受同步放化疗的子宫颈癌患者120例为研究对象。采集患者的子宫颈癌组织,根据不同病理特点、不同放射剂量(0 Gy、10 Gy、20 Gy、30 Gy)、放射敏感与抵抗的患者IER5和Ku70表达情况。采用蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR技术检测IER5和Ku70蛋白的表达;采用相关图像分析软件定量分析IER5和Ku70蛋白在子宫颈癌组织中的相对表达量。结果鳞癌中IER5蛋白、Ku70蛋白的表达量最高,明显高于腺癌和鳞腺癌;ⅢA~ⅢBIER5蛋白、Ku70蛋白表达量显著高于ⅡB;肉眼肿瘤直径> 4 cm者显著高于≤4 cm者;低分化者显著高于中分化者,差异均有显著性(P <0. 05);对于不同放射剂量治疗的子宫颈癌,两种蛋白的表达量最高的是30 Gy(P <0. 05);放射敏感组IER5和Ku70的mRNA表达显著高于放射抵抗组(P <0. 05)。结论在子宫颈癌的治疗过程中,使用放射治疗可提高IER5和Ku70在子宫颈癌中的表达量,随着放射量的增加,IER5和Ku70在子宫颈癌中的表达量相应升高。此外,IER5和Ku70表达水平还与子宫颈癌的病理类型、临床分期和肿瘤直径有关,这对于临床子宫颈癌的诊断、预后评估和临床治疗指导具有重要意义。 展开更多

关键词 子宫颈癌 ier5 KU70 临床意义

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IER5在宫颈癌中的表达、功能富集、信号通路和预后关系生物信息分析

8

作者 王德颖 《首都食品与医药》 2024年第10期8-11,共4页

目的探讨IER5在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法在TCGA数据库中检索分析IER5基因在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达情况;采用GO和KEGG对IER5基因进行功能分析,STRIGN数据库构建IER5相关蛋白作用网络(PPI)。结果在宫颈癌组织中IER5基因m... 目的探讨IER5在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法在TCGA数据库中检索分析IER5基因在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达情况;采用GO和KEGG对IER5基因进行功能分析,STRIGN数据库构建IER5相关蛋白作用网络(PPI)。结果在宫颈癌组织中IER5基因mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);IER5蛋白间相互作用关系edge=67,区域聚类指数为0.67,蛋白作用网络富集显著(P<0.05);PPP1R13L基因与IER5正向相关表达最为显著(r=0.6397,P<0.05)。而PLCH1基因与IER5负相关表达最为显著(r=-0.553,P<0.05)。IER5基因相关信号通路主要富集于细胞紧密连接、人乳头瘤病毒感染、PI3K-Akt等信号通路。预后分析提示IER5基因mRNA高表达患者总生存期低于低表达组(HR=1.8,P=0.013);但高低表达组无疾病进展生存期无统计学差异(HR=1.4,P=0.26)。结论IER5在宫颈癌中高表达,并与患者的TNM分期、淋巴结转移及预后有关。 展开更多

关键词 ier5基因 宫颈癌 生物信息 免疫组化

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辐射介导下HeLa细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系 被引量：2

9

作者 赵现哲 刘晓丹 +2 位作者 周平坤 姜晓燕 丁库克 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2017年第6期405-410,417,共7页

目的:探索辐射介导下He La细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系。方法:用4 Gyγ射线分别照射正常He La细胞和IER5-si RNA-He La细胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36 h的细胞样本,并设未照射细胞为对照组。采用q PCR法检测照射... 目的:探索辐射介导下He La细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系。方法:用4 Gyγ射线分别照射正常He La细胞和IER5-si RNA-He La细胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36 h的细胞样本,并设未照射细胞为对照组。采用q PCR法检测照射后Cdc25B m RNA的表达;Western blot检测细胞内IER5和Cdc25B蛋白的表达;流式细胞术检测照射后G2期细胞周期阻滞情况。结果:q PCR结果显示,照射后0.5~24 h内,与对照组相比,正常He La细胞内Cdc25B m RNA在0.5 h先下降2 h再上升之后再下降,差异均有统计学意义(P均<0.05);在IER5-si RNA-He La细胞内Cdc25B m RNA在0.5 h先下降后再上升,差异均有统计学意义(P均<0.05,2 h组除外)。Western blot结果显示,照射后0.5~24 h内,与对照组相比,正常He La细胞内Cdc25B蛋白从2 h开始上升8 h开始下降,差异有统计学意义(P均<0.01);IER5-si RNA-He La细胞内Cdc25B蛋白从0.5 h开始下降8 h开始逐渐上升,差异有统计学意义(P均<0.01,24 h除外)。照射后0~36 h内,与对照组相比,正常He La细胞与IER5-si RNA-He La细胞的IER5蛋白表达水平分别在照后8 h与0 h后开始出现明显上升,差异均具有统计学意义(P均<0.05);而Cdc25B蛋白表达水分别在照射后8 h与0 h后开始出现下降,差异均具有统计学意义(P均<0.05),正常He La细胞与IER5-si RNA-He La细胞中Cdc25B蛋白与IER5蛋白的表达分别从8 h与0 h后开始呈现负相关关系(r分别为-0.740和-0.669,P均<0.01),当两种细胞中Cdc25B蛋白表达量下降时,G2期细胞周期阻滞比例升高(P<0.05)。结论:辐射介导下He La细胞中Cdc25B蛋白表达变化是由Cdc25B m RNA变化引起的,并且Cdc25B与IER5蛋白表达呈负相关关系。 展开更多

关键词 辐射 基因 CDC25B 细胞周期阻滞

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γ射线照射对IER5基因mRNA表达的影响 被引量：9

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作者 丁库克 沈晶晶 +6 位作者 许莉莉 李延玲 周萍 马斌荣 赵增强 隋建丽 周平坤 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期5-8,共4页

目的应用实时PCR技术分析^60Coγ射线照射正常人淋巴母细胞（AHH1）、宫颈癌细胞（HeLa）与接种人肿瘤细胞的裸鼠后IER5基因表达的影响。方法对于离体培养的AHH1、HeLa与BALB／c—nu裸鼠，按照不同剂量（0．5、2、4、6、10、15Gy）与照... 目的应用实时PCR技术分析^60Coγ射线照射正常人淋巴母细胞（AHH1）、宫颈癌细胞（HeLa）与接种人肿瘤细胞的裸鼠后IER5基因表达的影响。方法对于离体培养的AHH1、HeLa与BALB／c—nu裸鼠，按照不同剂量（0．5、2、4、6、10、15Gy）与照射后不同时间点（2、4、8、12、24h）进行分组进行提取mRNA、反转录与IER5基因表达量测试。结果在相同条件下AHH1对照射比HeLa更灵敏，其表达量的峰值对应的剂量比HeLa的要低。对于AHH1细胞，对2Gy低剂量的照射反应比10Gy的高剂量反应要快，而HeLa细胞，对于2Gy的低剂量与10Gy的高剂量的照射反应没有太大差异，在照射后2h都出现基因表达的最大值。此外，人肝肿瘤的IER5基因对照射比较敏感，而人肺与脑肿瘤的IER5基因不敏感。结论IER5基因有可能成为宫颈癌与肝肿瘤新的辐射损伤生物分子的一个标记物，对肝肿瘤放疗具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 ier5基因 照射 AHH-1细胞 HELA细胞

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宫颈癌细胞放射损伤后IER5蛋白表达及其相互作用蛋白的筛选和验证 被引量：3

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作者 于新平 马腾 +1 位作者 周平坤 吴玉梅 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期246-250,共5页

的 了解IER5蛋白经放射损伤后的表达变化,并筛选IER5蛋白在放射损伤后可能参与DNA损伤修复通路中的相互作用蛋白.方法 HeLa细胞经4 Gyγ射线照射后在不同时间点收集细胞,提取总蛋白质和细胞核蛋白行Western blot检验;构建3×Flag标... 的 了解IER5蛋白经放射损伤后的表达变化,并筛选IER5蛋白在放射损伤后可能参与DNA损伤修复通路中的相互作用蛋白.方法 HeLa细胞经4 Gyγ射线照射后在不同时间点收集细胞,提取总蛋白质和细胞核蛋白行Western blot检验;构建3×Flag标签融合表达的IER5蛋白表达载体,转染人肾上皮细胞293T并照射,收集细胞行免疫沉淀富集IER5的结合蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离免疫共沉淀复合物,考马斯亮蓝染色观察差异条带并切胶酶解后行质谱分析,对可能相互作用蛋白结果进行Western blot验证.结果 IER5蛋白照后4h表达逐渐增加,12 h至高峰,持续至48 h;细胞核内IER5蛋白表达也有增加趋势;质谱分析数据表明,照射组检测出374个蛋白,对照组检测出256个蛋白,两组比较差异蛋白41个,照射组中包括与DNA结合、代谢、损伤修复相关的10个蛋白;其中,与DNA损伤修复密切相关的1型聚ADP核糖基化聚合酶（PARP1）得到Western blot验证.结论 IER5是放射损伤相关蛋白,其可能参与DNA损伤修复通路. 展开更多

关键词 宫颈癌 ier5 免疫共沉淀 质谱分析

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