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IDH1-R132H突变体通过调控miR-548ac/MYC轴抑制胶质瘤细胞干性
1
作者 敖登高娃 张洋 +1 位作者 刘攀 赵化荣 《脑与神经疾病杂志》 2026年第3期133-140,共8页
目的 探究IDH1-R132H突变体通过调控miR-548ac/MYC轴对胶质瘤细胞干性的影响。方法TCGA和CGGA数据库分析MYC的表达与胶质瘤及异柠檬酸脱氢酶1 (IDH1)突变的关系。在U87-MG细胞中敲除MYC,检测干性标志物醛脱氢酶1 (ALDH1)活性,CCK-8法检... 目的 探究IDH1-R132H突变体通过调控miR-548ac/MYC轴对胶质瘤细胞干性的影响。方法TCGA和CGGA数据库分析MYC的表达与胶质瘤及异柠檬酸脱氢酶1 (IDH1)突变的关系。在U87-MG细胞中敲除MYC,检测干性标志物醛脱氢酶1 (ALDH1)活性,CCK-8法检测细胞增殖。qPCR和Western blot分别检测Sox2、Nanog、Nestin干性标志蛋白的表达,肿瘤成球实验检测细胞自我更新能力。双荧光素酶报告基因验证miR-548ac和MYC的靶向关系。在U-87MG IDH1 R132H mutant细胞中分别转染pcDNA-MYC、miR-548ac inhibitor、miR-548ac inhibitor+si-MYC检测IDH1-R132H突变调控miR-548ac/MYC轴对胶质瘤细胞干性的影响。结果 MYC在胶质瘤病人及细胞系中高表达,IDH1-R132H突变显著抑制MYC表达(P <0.001),敲除MYC使U-87MG细胞中ALDH1活性显著降低(P<0.01),Sox2、Nanog、Nestin表达水平显著下降(均P<0.001),肿瘤成球能力也显著减弱(P<0.01)。在U-87MGIDH1R132H mutant细胞中过表达MYC或者敲低miR-548ac时均可明显增强其干性维持能力,在U-87MG IDH1R132H mutant细胞同时敲低miR-548ac和MYC不影响其干性维持能力。结论 在胶质瘤细胞中IDH1-R132H突变体通过miR-548ac/MYC轴抑制胶质瘤细胞干性。 展开更多
关键词 idh1-r132H突变 miR-548ac MYC 胶质瘤 肿瘤干细胞
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IDH1-R132H突变体通过调节HIF-1α通路抑制胶质瘤U87细胞恶性进展
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作者 方松 唐国强 +2 位作者 叶友忠 李明松 陈加贝 《临床神经外科杂志》 2024年第6期654-659,共6页
目的 探究异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)-R132H突变体通过调节低氧诱导因子-1α(HIF-1α)通路抑制胶质瘤U87细胞恶性进展。方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测胶质瘤组织和细胞IDH1 mRNA和蛋白表达水平。将U87细胞... 目的 探究异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)-R132H突变体通过调节低氧诱导因子-1α(HIF-1α)通路抑制胶质瘤U87细胞恶性进展。方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测胶质瘤组织和细胞IDH1 mRNA和蛋白表达水平。将U87细胞分为对照组、Vector组、IDH1 wt组、IDH1-R132H组,qRT-PCR和Western Blot检测IDH1 wt、IDH1-R132H转染效率,噻唑蓝(MTT)和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测IDH1、PCNA、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、HIF-1α、HIF-2α蛋白表达。结果 与癌旁组织和正常胶质细胞NHAs相比,胶质瘤组织和人神经胶质母细胞瘤细胞T98G、U138、U87中IDH1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。qRT-PCR和Western Blot结果表明,IDH1 wt、IDH1-R132H转染成功;与对照组或Vector组比较,IDH1-R132H组细胞活性、PCNA、MMP-2、Bcl-2蛋白表达明显降低,VEGF、HIF-1α、HIF-2α蛋白表达明显升高,且IDH1-R132H组克隆细胞数和迁移细胞数减少,细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);但对照组、Vector组、IDH1 wt组上述指标两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 IDH1-R132H突变体可能通过调节HIF-1α通路抑制胶质瘤U87细胞增殖和迁移,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 idh1-r132H突变体 HIF-1α通路 胶质瘤 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡
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IDH1-R132H突变体通过miR-191-5p/p53轴调控U87MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及凋亡 被引量：1
3
作者 方松 唐国强 陈加贝 《中国临床神经科学》 2022年第4期392-399,共8页
目的 探索IDH1-R132H突变抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法 (1)以U87 MG细胞为研究对象,采用慢病毒转染构建IDH 1-R132H突变型及野生型细胞株,并诱导为胶质母细胞瘤干细胞,观察细胞球形成情况;流式细胞术... 目的 探索IDH1-R132H突变抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法 (1)以U87 MG细胞为研究对象,采用慢病毒转染构建IDH 1-R132H突变型及野生型细胞株,并诱导为胶质母细胞瘤干细胞,观察细胞球形成情况;流式细胞术检测肿瘤干细胞标志物CD133表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况和PI/Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡情况;qRCP和Western blot法分别检测IDH1、miR-191-5p及p53表达水平。(2)以NOD/SCID荷瘤小鼠作为研究对象,在体内水平考察miR-191-5p、p53表达及肿瘤生长情况。结果IDH1-R132H突变能够在体内外抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖(P<0.01)及分化(P<0.05),诱导其凋亡(P<0.01),下调miR-191-5p表达(体内P<0.05,体外P<0.001),上调p53(P<0.001)及其编码基因TP53(体内P<0.01,体外P<0.000 1)表达。结论 IDH1-R132H突变引起的U87 MG胶质瘤干细胞增殖及凋亡的调控可能与其作用于mi R-191-5p/p53轴,抑制胶质瘤细胞活性密切相关。 展开更多
关键词 idh1-r132H突变 miR-191-5p P53 胶质母细胞瘤 肿瘤干细胞
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