目的:分析tsRNA-Arg-5-0022在口腔癌中的异常表达,对口腔癌细胞恶性增殖的影响及其潜在的分子机制。方法:通过tsRFun数据库分析头颈部鳞状细胞癌中差异表达的tsRNAs,并通过RT-PCR在口腔癌组织中进行验证;CCK8和克隆形成实验检测tsRNA-Ar...目的:分析tsRNA-Arg-5-0022在口腔癌中的异常表达,对口腔癌细胞恶性增殖的影响及其潜在的分子机制。方法:通过tsRFun数据库分析头颈部鳞状细胞癌中差异表达的tsRNAs,并通过RT-PCR在口腔癌组织中进行验证;CCK8和克隆形成实验检测tsRNA-Arg-5-0022对口腔癌细胞增殖能力的影响;OncotRF网站预测tsRNA-Arg-5-0022下游靶基因及潜在的结合位点;Western Blot检测tsRNA-Arg-5-0022对口腔癌细胞中DNA结合抑制因子4(inhibitor of DNA binding 4,ID4)表达水平的影响;双荧光素酶报告基因实验检测tsRNA-Arg-5-0022与ID4的3'UTR区的结合能力;UALCAN数据库分析ID4在头颈鳞癌中的表达水平,并通过RT-PCR在口腔癌组织中进行验证,分析其与tsRNA-Arg-5-0022表达水平的相关性;CCK8和克隆形成实验检测tsRNA-Arg-5-0022通过靶向抑制ID4对口腔癌细胞增殖能力的影响。结果:tsRFun数据库分析结果显示tsRNA-Arg-5-0022在头颈鳞癌中显著上调(P<0.05);RT-PCR结果显示tsRNA-Arg-5-0022在口腔癌中显著上调(P<0.05);tsRNA-Arg-5-0022抑制物能够显著抑制tsRNA-Arg-5-0022表达(P<0.05);tsRNA-Arg-5-0022抑制物能够显著抑制口腔癌细胞的增殖能力;OncotRF网站预测结果显示tsRNA-Arg-5-0022与ID4的3'UTR区存在结合位点;Western Blot检测结果显示tsRNA-Arg-5-0022抑制物能够显著升高口腔癌细胞中ID4表达水平(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,tsRNA-Arg-5-0022能够与ID4的3'UTR区结合;UALCAN数据库分析结果显示ID4在头颈鳞癌中表达水平下调(P<0.05);RT-PCR结果显示ID4在口腔癌中表达水平下调,且与tsRNA-Arg-5-0022表达水平呈负相关关系;CCK8和克隆形成实验结果显示tsRNA-Arg-5-0022能够通过靶向抑制ID4促进口腔癌细胞增殖。结论:tsRNA-Arg-5-0022在口腔癌中高表达,能够通过直接靶向ID4促进口腔癌细胞恶性增殖,是口腔癌潜在的分子标志物。展开更多
尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白...尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白血病。本研究在前期建立的甲基化定量PCR体系的基础上,用该方法检测患者骨髓样本,探讨ID4甲基化定量指标(percentage of methylated reference,PMR)的临床意义。采集我院门诊及住院确诊的初治、完全缓解、复发3个阶段的急性白血病患者骨髓样本及正常对照者骨髓样本。应用ID4甲基化定量PCR体系对样本进行检测。按初治、完全缓解、复发分组比较PMR值。比较相同病例不同疾病状态的PMR的动态变化。结果表明,初治组PMR最高,其次为复发组,而完全缓解组最低。初治组PMR与完全缓解组比较存在统计学差异。4例随访病例的PMR值波动与病情变化一致。在1例复发病例中,PMR升高早于骨髓细胞学检查确认复发1.7个月。结论:本研究通过ID4基因启动子区甲基定量检测的方法初步验证:甲基化水平的量化指标PMR值与急性白血病患者肿瘤细胞负荷关系密切。PMR动态监测波动与疾病变化一致,可能具有预测复发的作用,但ID4甲基化定量指标的临床价值还有待进一步研究证据的支持。展开更多
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,...多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。展开更多
文摘目的:分析tsRNA-Arg-5-0022在口腔癌中的异常表达,对口腔癌细胞恶性增殖的影响及其潜在的分子机制。方法:通过tsRFun数据库分析头颈部鳞状细胞癌中差异表达的tsRNAs,并通过RT-PCR在口腔癌组织中进行验证;CCK8和克隆形成实验检测tsRNA-Arg-5-0022对口腔癌细胞增殖能力的影响;OncotRF网站预测tsRNA-Arg-5-0022下游靶基因及潜在的结合位点;Western Blot检测tsRNA-Arg-5-0022对口腔癌细胞中DNA结合抑制因子4(inhibitor of DNA binding 4,ID4)表达水平的影响;双荧光素酶报告基因实验检测tsRNA-Arg-5-0022与ID4的3'UTR区的结合能力;UALCAN数据库分析ID4在头颈鳞癌中的表达水平,并通过RT-PCR在口腔癌组织中进行验证,分析其与tsRNA-Arg-5-0022表达水平的相关性;CCK8和克隆形成实验检测tsRNA-Arg-5-0022通过靶向抑制ID4对口腔癌细胞增殖能力的影响。结果:tsRFun数据库分析结果显示tsRNA-Arg-5-0022在头颈鳞癌中显著上调(P<0.05);RT-PCR结果显示tsRNA-Arg-5-0022在口腔癌中显著上调(P<0.05);tsRNA-Arg-5-0022抑制物能够显著抑制tsRNA-Arg-5-0022表达(P<0.05);tsRNA-Arg-5-0022抑制物能够显著抑制口腔癌细胞的增殖能力;OncotRF网站预测结果显示tsRNA-Arg-5-0022与ID4的3'UTR区存在结合位点;Western Blot检测结果显示tsRNA-Arg-5-0022抑制物能够显著升高口腔癌细胞中ID4表达水平(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,tsRNA-Arg-5-0022能够与ID4的3'UTR区结合;UALCAN数据库分析结果显示ID4在头颈鳞癌中表达水平下调(P<0.05);RT-PCR结果显示ID4在口腔癌中表达水平下调,且与tsRNA-Arg-5-0022表达水平呈负相关关系;CCK8和克隆形成实验结果显示tsRNA-Arg-5-0022能够通过靶向抑制ID4促进口腔癌细胞增殖。结论:tsRNA-Arg-5-0022在口腔癌中高表达,能够通过直接靶向ID4促进口腔癌细胞恶性增殖,是口腔癌潜在的分子标志物。
文摘尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白血病。本研究在前期建立的甲基化定量PCR体系的基础上,用该方法检测患者骨髓样本,探讨ID4甲基化定量指标(percentage of methylated reference,PMR)的临床意义。采集我院门诊及住院确诊的初治、完全缓解、复发3个阶段的急性白血病患者骨髓样本及正常对照者骨髓样本。应用ID4甲基化定量PCR体系对样本进行检测。按初治、完全缓解、复发分组比较PMR值。比较相同病例不同疾病状态的PMR的动态变化。结果表明,初治组PMR最高,其次为复发组,而完全缓解组最低。初治组PMR与完全缓解组比较存在统计学差异。4例随访病例的PMR值波动与病情变化一致。在1例复发病例中,PMR升高早于骨髓细胞学检查确认复发1.7个月。结论:本研究通过ID4基因启动子区甲基定量检测的方法初步验证:甲基化水平的量化指标PMR值与急性白血病患者肿瘤细胞负荷关系密切。PMR动态监测波动与疾病变化一致,可能具有预测复发的作用,但ID4甲基化定量指标的临床价值还有待进一步研究证据的支持。
文摘多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。
