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IBDV VP3结构蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定 被引量:14
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作者 张改平 席俊 +4 位作者 王选年 乔宏兴 张华 王丽 郭军庆 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第8期88-91,共4页
应用RT-PCR技术从鸡IBDV总RNA中克隆出893bp的VP3基因,并将其进一步克隆于pET-28a载体T7启动子的下游,构建了pETVP3原核表达载体。经IPTG诱导,在其宿主菌BL21(DE3)中成功表达了35.5,33kDa的鸡IBDVVP3蛋白。经SDS-PAGE和Westernblotting... 应用RT-PCR技术从鸡IBDV总RNA中克隆出893bp的VP3基因,并将其进一步克隆于pET-28a载体T7启动子的下游,构建了pETVP3原核表达载体。经IPTG诱导,在其宿主菌BL21(DE3)中成功表达了35.5,33kDa的鸡IBDVVP3蛋白。经SDS-PAGE和Westernblotting分析,VP3表达产物以包涵体形式存在,并与鸡IBDV抗血清特异性反应。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 vp3蛋白 表达 抗原性
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基于重组IBDV VP3蛋白的免疫磁珠间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 被引量:3
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作者 龚如月 于淑媛 +8 位作者 王书博 姜艳平 崔文 乔薪瑗 王丽 周晗 徐义刚 李一经 唐丽杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期678-686,共9页
本研究旨在毕赤酵母中表达鸡传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的VP3蛋白,以重组VP3蛋白作为包被抗原建立IBDV血清抗体免疫磁珠间接ELISA检测方法并进行初步应用。利用毕赤酵母表达系统获得约为39 ku的重组VP3蛋... 本研究旨在毕赤酵母中表达鸡传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的VP3蛋白,以重组VP3蛋白作为包被抗原建立IBDV血清抗体免疫磁珠间接ELISA检测方法并进行初步应用。利用毕赤酵母表达系统获得约为39 ku的重组VP3蛋白,Western-blotting检测表明,重组VP3蛋白具有良好的特异性和反应原性。免疫磁珠间接ELISA的最佳反应条件:磁珠和抗原偶联的缓冲液是50 mmol/L MES(p H 8.0),偶联时间为3 h,抗原加入量为95μg,抗原与羧基磁珠最大偶联量为80μg。待检血清和酶标二抗的稀释度分别为1∶1 600和1∶4 000,血清孵育时间为30 min,酶标二抗孵育时间为20 min。在该优化条件下,阴性、阳性临界值判定标准为0.134。特异性试验显示,对抗AIV、IBV、MDV、NDV阳性血清检测结果均为阴性。敏感性试验显示,本试验所建立的检测方法敏感性高于商品化IBDV血清抗体检测试剂盒。重复性试验显示,批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.8%和5.9%。稳定性试验结果显示变异系数小于7%。用建立的检测方法和商品化IBDV血清抗体检测试剂盒同时检测50份血清,结果显示两种检测方法的相对敏感性为94.6%,相对特异性为92.3%,符合率为94.0%。本试验建立的检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好、稳定性高特点,为其应用于临床IBDV血清抗体的检测奠定了基础。 展开更多
关键词 免疫磁珠间接ELISA ibdv抗体检测 ibdv vp3蛋白 毕赤酵母表达系统
原文传递
传染性囊病病毒(IBDV)VP3蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 王彬 李淑芹 +3 位作者 李晓齐 曹红 王永强 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期25-28,共4页
为制备抗IBDV VP3蛋白的单克隆抗体,以VP3-His蛋白免疫BALB/c小鼠,经4次免疫、融合、亚克隆,筛选出1株能够稳定分泌抗VP3蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为4H8F7C10。经间接ELISA方法检测,小鼠的腹水效价为2.05×106,单克隆抗体的解离... 为制备抗IBDV VP3蛋白的单克隆抗体,以VP3-His蛋白免疫BALB/c小鼠,经4次免疫、融合、亚克隆,筛选出1株能够稳定分泌抗VP3蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为4H8F7C10。经间接ELISA方法检测,小鼠的腹水效价为2.05×106,单克隆抗体的解离常数(k D)为9.67×10-8,此株抗体亚类为Ig G3。通过Western Blot和间接免疫荧光试验检测,该株单克隆抗体可以识别IBDV感染DF-1细胞产生的VP3蛋白。初步确定此株单克隆抗体的抗原识别区位于VP3蛋白N端的第50-90位氨基酸。此株单克隆抗体的制备为IBDV临床检测方法的建立以及致病分子机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ibdv 单克隆抗体 vp3蛋白
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传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位的鉴定 被引量:1
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作者 邓小芸 高玉龙 +3 位作者 高宏雷 祁小乐 王晓艳 王笑梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期305-311,共7页
利用肽扫描技术对4株IBDV VP3的单克隆抗体(HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E)的抗原表位进行了研究。通过Western blot和ELISA鉴定,将HRB-3F和HRB-7B的抗原表位定位于VP3 109-119aa(位于IB-DV聚合蛋白的864-874aa),HRB-7C和HRB-10... 利用肽扫描技术对4株IBDV VP3的单克隆抗体(HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E)的抗原表位进行了研究。通过Western blot和ELISA鉴定,将HRB-3F和HRB-7B的抗原表位定位于VP3 109-119aa(位于IB-DV聚合蛋白的864-874aa),HRB-7C和HRB-10E的抗原表位定位于VP3 177-190aa(位于IBDV聚合蛋白的932-945aa)。进一步检测其反应原性及免疫原性,结果表明,这两个表位均能与抗IBDV阳性血清反应。将这两个表位短肽免疫BALB/c小鼠,其血清可以和IBDV反应,具有较好的免疫原性。与D6948、HK46和UK661等多株IBDV相应区域的同源性进行了比较,结果显示,这两个表位在多种毒株中同源性为100%。通过IBDV VP3抗原表位的研究,筛出两个新的保守线性表位并进行精确定位,对进一步分析IBDV结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。 展开更多
关键词 ibdv vp3 抗原表位 融合表达 WESTERN BLOT ELISA 单抗
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传染性腔上囊病病毒VP3蛋白模拟表位的筛选 被引量:1
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作者 邓小芸 高玉龙 +4 位作者 高宏雷 祁小乐 程宇 王晓艳 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期791-794,共4页
为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩... 为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩增淘洗,从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取20个单克隆噬菌斑,通过间接ELISA和竞争抑制ELISA检测,共选出13个单克隆噬菌斑,经噬菌体gⅢ部分基因的核苷酸序列测定,确定了8个15肽为IBDV抗原表位。这8个15肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与IBDV Gx(Gen-Bank登录号:AY444873)VP3的氨基酸序列相同,但二级结构上均以β折叠为主,并且与单抗的结合可被VP3蛋白有效地抑制。证实,筛选的是IBDV VP3的模拟表位。 展开更多
关键词 传染性腔上囊病病毒 vp3蛋白 抗原表位 噬菌体随机15肽库 筛选
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传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP3基因的克隆与原核表达 被引量:4
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作者 彭志伟 王笑梅 +4 位作者 高宏雷 付朝阳 张厚双 包晓玮 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期124-127,共4页
利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH... 利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白VP3基因,约33Ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9%,经Westernblot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与vvIBDV阳性血清发生特异性反应。这为IBDV血清学诊断方法的建立打下了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 结构蛋白vp3基因 克隆与原核表达
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IBDV野毒株主要结构蛋白基因RT─PCR方法的建立 被引量:3
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作者 姜平 陈溥言 蔡宝祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期8-11,共4页
借助计算机软件,在分析比较了9个传染性法氏囊病病毒(IBDV)A片段结构蛋白基因的基础上,设计并合成了2对VP2和VP3基因PCR引物,经RT-PCR反应条件优化选择,成功地建立了RT-PCR方法,用于扩增IBDVV... 借助计算机软件,在分析比较了9个传染性法氏囊病病毒(IBDV)A片段结构蛋白基因的基础上,设计并合成了2对VP2和VP3基因PCR引物,经RT-PCR反应条件优化选择,成功地建立了RT-PCR方法,用于扩增IBDVVP2和VP3基因,经琼脂糖凝胶电泳和分子杂交鉴定,获得4个IBDV野毒株VP2和VP3基因。 展开更多
关键词 RT-PCR VP2 结构蛋白 基因 vp3 ibdv 野毒株
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Residues of 862, 921 of VP3 are associated with virulence in infectious bursal disease virus
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作者 Renmao Li Haiying Wang +1 位作者 Guangming Huang Manfu Zhang 《Natural Science》 2010年第7期718-725,共8页
Reverse genetics was used to study the effect of particular amino acids of infectious bursal disease virus (IBDV) on virulence. Using site-directed mutagenesis, altering of two amino acids in VP2 (Q253H, A284T) and VP... Reverse genetics was used to study the effect of particular amino acids of infectious bursal disease virus (IBDV) on virulence. Using site-directed mutagenesis, altering of two amino acids in VP2 (Q253H, A284T) and VP3 (H783Q, V862M, I921V) in the segment A of a Chinese very virulent IBDV field strain Harbin-1, 4 virus mutants including H253/284, H783/862, H862/921, H921/783 were rescued. To evaluate the characteristics of the recovered viruses in vivo, we inoculated 4-week-old chickens with virus mutants and rescued Harbin- 1 (rHarbin-1), analyzed their bursae for pathological lesions 4 days postinfection. rHarbin-1 and H783/862, H253/284 caused severe bursal lesion, milder lesion for H862/921, mildest for H921/783. However, H253/284 caused the lowest mortality. The results showed that residue at position Q253, A284 of VP2 and V862, I921 of VP3 gene are involved with virulence, but there is difference between VP2 and VP3’s role in virulence. The ability of 862 and 921 to control virulence in VP3 is stronger than 253 and 284. 展开更多
关键词 ibdv vp3 MUTAGENESIS REVERSE Genetics Viru-lence
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传染性法氏囊病病毒山西株的鉴定及毒力分析 被引量:2
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作者 刘华栋 陆冰洋 +3 位作者 李婷婷 唐娟 丁树荣 王彩先 《中国家禽》 北大核心 2020年第2期32-36,共5页
研究通过对山西某养鸡场送检疑似鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的病鸡采集病料,设计引物进行PCR鉴定,扩增出831 bp的特异性片段,初步确定病鸡感染IBDV。扩增分离病毒的VP2和VP3片段序列并进行同源性比对和构建系统发育进化树,而后进... 研究通过对山西某养鸡场送检疑似鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的病鸡采集病料,设计引物进行PCR鉴定,扩增出831 bp的特异性片段,初步确定病鸡感染IBDV。扩增分离病毒的VP2和VP3片段序列并进行同源性比对和构建系统发育进化树,而后进行生物学毒力测定试验和动物回归试验。结果显示:VP2和VP3扩增出总长度为474 bp和771 bp的片段;VP2序列中七肽氨基酸顺序为SWSARGS,且在222、253、256、279、284、294、299位点的氨基酸分别为P、H、V、N、T、L、N,均与标准弱毒株相同;分离株VP2序列与B87和Gt株的同源性最高,与B87和Gt株等处于同一个分支;分离株VP3序列与B87和Gt株的同源性最高,且与之位于同一个分支;病毒生物学毒力试验结果显示,分离株的MDT、IVPI、ICPI分别是120 h、0、0.4。确定分离的IBDV为弱毒株;动物回归试验结果显示,发病SPF鸡剖检有典型的传染性法氏囊病病变,表明分离株具有明显的致病性。 展开更多
关键词 ibdv VP2 vp3 ICPI IVPI MDT
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传染性法氏囊病病毒结构的分子生物学研究进展
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作者 裴超信 罗薇 柏黎黎 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第S1期78-82,共5页
传染性法氏囊病是一种严重危害雏鸡的免疫抑制性、高度接触性传染病.传染性法氏囊病病毒为双RNA病毒,有A、B两个片断.A片断编码4种蛋白VP2,VP3,VP4和VP5,B片断编码VP1蛋白.其中的VP2和VP3是主要的宿主保护性抗原,在病毒的结构、变异、... 传染性法氏囊病是一种严重危害雏鸡的免疫抑制性、高度接触性传染病.传染性法氏囊病病毒为双RNA病毒,有A、B两个片断.A片断编码4种蛋白VP2,VP3,VP4和VP5,B片断编码VP1蛋白.其中的VP2和VP3是主要的宿主保护性抗原,在病毒的结构、变异、毒力和免疫原性方面有着重要的作用. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 传染性法氏囊病病毒变异株 传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvibdv) VP2 vp3
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