目的分离纯化碧根果致敏原Car i 1,并对其结构进行表征鉴定。方法以新鲜碧根果果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、粗分级、凝胶过滤层析,对碧根果致敏原蛋白Car i 1进行分离纯化。结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串...目的分离纯化碧根果致敏原Car i 1,并对其结构进行表征鉴定。方法以新鲜碧根果果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、粗分级、凝胶过滤层析,对碧根果致敏原蛋白Car i 1进行分离纯化。结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串联质谱法和免疫印迹法3种方法对Cari1进行鉴定,并通过圆二色谱仪与紫外分光光度计表征其二、三级结构。结果本方法纯化获得碧根果致敏原Cari1,单轮制备量可达5 mg以上,且纯度大于95%,蛋白质高级结构未被破坏,能够被全部3名碧根果过敏患者的血清准确识别。结论该纯化方法技术路线简单、设备要求低且单次制备量高,总得率可达65%,操作便捷,为碧根果致敏原Car i 1的相关研究奠定了物质基础。展开更多
目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响。方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检...目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响。方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检测大鼠骨骼肌中Cox4i1、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Tet1、Tet2和Tet3基因m RNA表达水平;BSP法检测Cox4i1基因DNA甲基化状态;Western blot法检测骨骼肌中TET3和DNMT3A蛋白表达情况。结果:模型组COX4I1蛋白量和m RNA水平均比空白组显著增加(P<0.01);花椒低、高剂量组能显著降低模型组大鼠Cox4i1 m RNA水平(P<0.01,P<0.05)。模型组Cox4i1甲基化频率有降低趋势,且接近显著水平;花椒低剂量组能显著增加Cox4i1甲基化频率(P<0.05)。模型组Dnmt1、Tet1、Tet2 m RNA水平显著增加(P<0.05);花椒低剂量组能显著降低Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt1、Tet1、Tet2和Tet3 m RNA水平(P<0.05,P<0.01);花椒高剂量组能显著降低Dnmt3b、Tet3、Tet2 m RNA水平(P<0.05,P<0.01)。花椒高、低剂量组对于DNMT3A和TET3蛋白表达量均未有显著影响。结论:低剂量花椒可能通过同时降低DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达水平,而发挥甲基化的作用,使Cox4i1 DNA甲基化频率增加,从而使m RNA水平降低。展开更多
文摘目的分离纯化碧根果致敏原Car i 1,并对其结构进行表征鉴定。方法以新鲜碧根果果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、粗分级、凝胶过滤层析,对碧根果致敏原蛋白Car i 1进行分离纯化。结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串联质谱法和免疫印迹法3种方法对Cari1进行鉴定,并通过圆二色谱仪与紫外分光光度计表征其二、三级结构。结果本方法纯化获得碧根果致敏原Cari1,单轮制备量可达5 mg以上,且纯度大于95%,蛋白质高级结构未被破坏,能够被全部3名碧根果过敏患者的血清准确识别。结论该纯化方法技术路线简单、设备要求低且单次制备量高,总得率可达65%,操作便捷,为碧根果致敏原Car i 1的相关研究奠定了物质基础。
文摘目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响。方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检测大鼠骨骼肌中Cox4i1、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Tet1、Tet2和Tet3基因m RNA表达水平;BSP法检测Cox4i1基因DNA甲基化状态;Western blot法检测骨骼肌中TET3和DNMT3A蛋白表达情况。结果:模型组COX4I1蛋白量和m RNA水平均比空白组显著增加(P<0.01);花椒低、高剂量组能显著降低模型组大鼠Cox4i1 m RNA水平(P<0.01,P<0.05)。模型组Cox4i1甲基化频率有降低趋势,且接近显著水平;花椒低剂量组能显著增加Cox4i1甲基化频率(P<0.05)。模型组Dnmt1、Tet1、Tet2 m RNA水平显著增加(P<0.05);花椒低剂量组能显著降低Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt1、Tet1、Tet2和Tet3 m RNA水平(P<0.05,P<0.01);花椒高剂量组能显著降低Dnmt3b、Tet3、Tet2 m RNA水平(P<0.05,P<0.01)。花椒高、低剂量组对于DNMT3A和TET3蛋白表达量均未有显著影响。结论:低剂量花椒可能通过同时降低DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达水平,而发挥甲基化的作用,使Cox4i1 DNA甲基化频率增加,从而使m RNA水平降低。
