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结核分枝杆菌Hsp16.3表达与感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的关系 被引量：3
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作者 庹清章 董江涛 +7 位作者 田玺择 刘云霞 董伟杰 刘丹霞 李微 吴芳 章乐 张万江 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期300-305,共6页
目的探讨结核分枝杆菌（MTB）小分子热休克蛋白Hspl6．3表达与感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的关系。方法分别将MTB国际标准强毒株H37Rv株Hspl6．3基因缺失突变菌株（△H37Rv）、结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株（H37Rv）以及无菌生理盐水... 目的探讨结核分枝杆菌（MTB）小分子热休克蛋白Hspl6．3表达与感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的关系。方法分别将MTB国际标准强毒株H37Rv株Hspl6．3基因缺失突变菌株（△H37Rv）、结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株（H37Rv）以及无菌生理盐水溶液（空白对照）通过小鼠尾静脉注入小鼠体内以建立小鼠的感染模型，并在感染后的1、3、5、7、9、11、13、15d分离及鉴定小鼠肺泡巨噬细胞，用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定MTB感染小鼠肺泡巨噬细胞；流式细胞术检测不同时间点感染小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率；Westernblot技术检测小鼠肺泡巨噬细胞内半胱天冬酶-3（Caspase-3）和B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bel-2）蛋白的表达。结果△H37Rv菌株感染组和H37Rv菌株感染组凋亡率均高于空白对照组，△H37Rv组的巨噬细胞凋亡率在感染1-7d内逐渐升高，至感染7d时达到高峰，随后呈下降趋势，与H37Rv组相比，1-7d及13-15d，△H37Rv组的巨噬细胞凋亡率高于H37Rv组，差异有统计学意义（P〈0．05）；H37Rv组和△H37Rv组的巨噬细胞Caspase-3和Bcl2蛋白表达水平均高于空白对照组；l-7d内，H37Rv感染组和△H37Rv感染组的巨噬细胞Caspase-3表达水平逐渐升高，至第7天达到高峰，且△H37Rv感染组在第13天时出现第二次高峰，但Caspase-3表达水平均高于H37Rv感染组，差异有统计学意义（P〈0．05）；在感染的早期（1-7d），△H37Rv感染组Bcl-2的表达水平无明显变化（P〈o．05），但在9d后逐渐升高；H37Rv感染组巨噬细胞内Bcl-2的表达水平1-7d内无明显变化（P〈O．05），7d后逐渐升高，但△H37Rv感染组Bcl-2的表达水平始终低于H37Rv组且7d后表现更为显著。结论在MTB感染的早期和晚期，MTB小分子热休克蛋白Hspl6．3的表达能够有效抑制小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡，而这种抑制作用可能是通过抑制凋亡蛋白酶Caspase-3的表达，同时促进Bcl-2蛋白的表达来实现的。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 hspl6 3 肺泡巨噬细胞 凋亡 CASPASE 3 BCL-2
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卡介苗Hsp16.3基因突变株对小鼠巨噬细胞RAW 264.7自噬的影响 被引量：2
2
作者 杨丽 师长宏 +2 位作者 赵勇 张彩琴 白冰 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第23期7-12,34,共7页
构建及鉴定卡介苗(BCG)Hsp16.3基因突变株,观察该突变株对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增Hsp16.3基因两侧分子量分别为663 bp和684 bp的两个DNA片段,并将这两个目的片段分别插入p KO载体上相应的位点。... 构建及鉴定卡介苗(BCG)Hsp16.3基因突变株,观察该突变株对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增Hsp16.3基因两侧分子量分别为663 bp和684 bp的两个DNA片段,并将这两个目的片段分别插入p KO载体上相应的位点。通过硫酸卡那霉素筛选,利用双酶切以及测序的方法,获得阳性重组质粒p KO-Hsp16.3。将阳性重组质粒p KO-Hsp16.3电转入BCG感受态细胞中,经过硫酸卡那霉素和蔗糖两次筛选,得到BCG Hsp16.3基因突变株。将筛选培养的BCG Hsp16.3突变株用于小鼠巨噬细胞的感染实验,并通过Western Blot和细胞免疫荧光技术对自噬相关蛋白的表达水平的变化进行观察及分析。成功获得重组质粒p KO-Hsp16.3的阳性克隆;电转化该重组质粒,并经过硫酸卡那霉素筛选和蔗糖反筛选,成功得到BCG Hsp16.3基因突变株。通过Western Blot以及免疫荧光分析发现,BCG Hsp16.3基因的突变株促进了小鼠巨噬细胞自噬的发生。 展开更多
关键词 热休克蛋白16..3 卡介苗 自噬 同源重组
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