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闽楠PbHSP70基因家族成员的鉴定及表达分析
1
作者 谢始群 黄磊 +1 位作者 欧雪婷 金云峰 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1256-1270,1348,共16页
【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、... 【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、染色体分布、共线性及启动子顺式元件;结合RNA-seq与RT-qPCR技术分析组织特异性与高温胁迫表达特征。【结果】共鉴定56个PbHSP70基因家族成员,编码蛋白多为亲水性不稳定蛋白,主要定位于细胞质,分为DnaK和HSP110/SSE2个亚家族。基因结构保守但内含子数目差异大,成员在8条染色体上不均匀分布。共线性分析发现10对片段重复基因,家族扩张可能主要源于片段复制,Ka/Ks均小于1,表明受到纯化选择。启动子区域富含激素、光响应及非生物胁迫相关元件。表达模式显示该家族具有组织特异性,高温胁迫下12个代表基因均显著诱导表达,其中PbHSP70-40基因响应最为显著。【结论】PbHSP70基因家族在闽楠中进化保守、序列多样,可能积极参与高温胁迫响应过程,PbHSP70-40为关键候选基因,对其深入研究有助于揭示闽楠耐热分子机制。 展开更多
关键词 闽楠 hsp70基因家族 高温胁迫 表达分析
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烟草Hsp70基因家族的鉴定及NtHsp70Chl基因的表达分析 被引量：18
2
作者 陈二龙 范志勇 +5 位作者 王松峰 王德勋 朱凯 孙军伟 苏家恩 宋朝鹏 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期8-16,共9页
为探明烟草热激蛋白70(Hsp70)基因家族的特征及烟叶主脉中NtHsp70Chl基因在烘烤条件下的表达模式,对Hsp70基因家族进行了亚细胞定位、系统进化、基因结构、染色体定位,并对NtHsp70Chl基因进行了烘烤条件下实时荧光定量表达PCR分析。结... 为探明烟草热激蛋白70(Hsp70)基因家族的特征及烟叶主脉中NtHsp70Chl基因在烘烤条件下的表达模式,对Hsp70基因家族进行了亚细胞定位、系统进化、基因结构、染色体定位,并对NtHsp70Chl基因进行了烘烤条件下实时荧光定量表达PCR分析。结果表明,烟草基因组中Hsp70基因家族共有61个成员,蛋白序列长度不等,等电点在4.52~9.75范围内,各成员蛋白分别定位于细胞质、内质网、细胞外基质、叶绿体和线粒体中;烟草Hsp70基因家族分为6组,定位于叶绿体的成员均存在Ⅵ-a亚组;61个NtHsp70基因分布于18条染色体上,经亚细胞定位于叶绿体的基因分别位于6、17和19号染色体上;烟草Hsp70家族中具有10个基因重复和5个旁系同源基因;经RT-q PCR检测分析,定位于烟草叶绿体中的NtHsp70Chl基因对高温诱导的敏感性较弱。本研究为深入研究烟草Hsp70的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 主脉组织 hsp70基因家族 生物信息学 Nthsp70Chl 高温诱导
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铁皮石斛HSP70基因的克隆及冷胁迫表达分析 被引量：23
3
作者 李东宾 高燕会 +1 位作者 斯金平 朱玉球 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第20期3446-3452,共7页
目的:揭示铁皮石斛热激蛋白HSP70基因冷胁迫表达,为耐低温品系选育提供分子生物学基础。方法:根据已获得的HSP70基因片段序列,采用RACE方法从铁皮石斛中克隆到HSP70基因全长cDNA序列。预测其编码蛋白的结构与功能,并运用实时定量PCR进... 目的:揭示铁皮石斛热激蛋白HSP70基因冷胁迫表达,为耐低温品系选育提供分子生物学基础。方法:根据已获得的HSP70基因片段序列,采用RACE方法从铁皮石斛中克隆到HSP70基因全长cDNA序列。预测其编码蛋白的结构与功能,并运用实时定量PCR进行冷胁迫下表达分析。结果:核苷酸序列分析表明该基因全长2 296 bp,包含一完整的1 944 bp的开放阅读框,编码647个氨基酸。氨基酸序列具有典型的HSP70特征并且与其他植物的HSP70有很高的同源性。冷胁迫表达分析说明该基因确实能被低温诱导表达。结论:首次克隆获得受低温诱导表达的铁皮石斛HSP70基因,为进一步研究铁皮石斛健康栽培与抗寒品系的选育奠定基础。 展开更多
关键词 铁皮石斛 hsp70基因 生物信息学分析 冷胁迫表达分析
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罗非鱼感染链球菌后hsp70基因表达研究 被引量：9
4
作者 王瑞 黄艳华 +2 位作者 陈明 梁万文 黄钧 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第4期371-374,共4页
采用实时荧光定量RT-PCR检测吉富罗非鱼感染链球菌后脑和脾脏中热休克蛋白70(hsp70)基因表达情况,并按2-△△CT分析方法、使用7500 Software v2.0.1进行分析。结果表明,罗非鱼感染链球菌48 h内,hsp70 mRNA在脑组织表达变化不明显,而在... 采用实时荧光定量RT-PCR检测吉富罗非鱼感染链球菌后脑和脾脏中热休克蛋白70(hsp70)基因表达情况,并按2-△△CT分析方法、使用7500 Software v2.0.1进行分析。结果表明,罗非鱼感染链球菌48 h内,hsp70 mRNA在脑组织表达变化不明显,而在脾脏中表达升高,攻毒感染24 h后hsp70 mRNA表达量是正常脾脏组织的5.5倍多,说明hsp70在罗非鱼链球菌感染的免疫反应中具有重要作用。研究结果为进一步分析hsp70在罗非鱼感染链球菌过程中所行使的功能奠定基础。 展开更多
关键词 罗非鱼 hsp70基因 链球菌 实时荧光定量RT-PCR 基因表达
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朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因TCHSP70-4的克隆与表达 被引量：6
5
作者 李明 卢文才 +3 位作者 冯宏祖 袁亮 王进军 何林 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1235-1243,共9页
为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长21... 为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长2182bp,包含1959bp的开放阅读框,编码653个氨基酸,理论分子量为70.9kDa,等电点为5.4,含有HSP70家族高度保守的基序。运用real-time PCR分析冷激(4℃)和热激(40℃)1h后TCHSP70-4在朱砂叶螨体内的表达量。结果显示冷激后TCHSP70-4表达量明显下降,而热激后TCHSP70-4表达量却明显上升。这些结果一方面表明该基因属于诱导型HSP70基因,另一方面揭示了朱砂叶螨分别受到冷和热胁迫后体内TCHSP70-4的表达及所起的保护作用是不同的。 展开更多
关键词 朱砂叶螨 热激蛋白 hsp70基因 克隆 表达 温度胁迫 实时定量PCR
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维氏气单胞菌感染对西伯利亚鲟血清指标和hsp70基因表达的影响 被引量：8
6
作者 田照辉 徐绍刚 +3 位作者 朱华 胡红霞 王巍 董颖 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期6-12,共7页
为研究西伯利亚鲟Acipenser baerii在维氏气单胞菌Aeromonas veronii感染过程中的生理免疫反应,进行了维氏气单胞菌攻毒试验,将体质量为(260.2±37.8)g的西伯利亚鲟从背部肌肉注射菌液浓度为2.0×107cfu/mL的维氏气单胞菌,注射... 为研究西伯利亚鲟Acipenser baerii在维氏气单胞菌Aeromonas veronii感染过程中的生理免疫反应,进行了维氏气单胞菌攻毒试验,将体质量为(260.2±37.8)g的西伯利亚鲟从背部肌肉注射菌液浓度为2.0×107cfu/mL的维氏气单胞菌,注射后40h后开始死亡,62h后停止死亡,累积死亡率为46.7%。结果表明:40h对照组和53h处理正常鱼组中的血清皮质醇含量最低,与不再出现死亡后的处理组和对照组无显著性差异(P>0.05),与处理患病鱼各组有显著性差异(P<0.05);62h处理组血清超氧化物歧化酶(SOD)活力最低,与40h对照组、53h处理组、53h处理正常鱼组、93h对照组、93h处理组有显著性差异(P<0.05);93h处理组血清丙二醛(MDA)含量最低,与40h处理组、44h处理组、53h处理正常鱼组、62h处理组有显著性差异(P<0.05),其他各组之间无显著性差异(P>0.05);各处理组血清溶菌酶(LZM)活力从44h开始升高,直到62h,各个处理组均显著高于40h的处理组和对照组以及93h和168h的对照组和处理组(P<0.05);实时定量了肝、鳃、脾、肠组织中hsp70基因表达的变化。研究表明:西伯利亚鲟感染维氏气单胞菌后,血清皮质醇含量和溶菌酶活力升高可作为机体免疫状态的参考指标;热休克蛋白hsp70基因的诱导表达较血清指标变化更为灵敏,hsp70基因在鳃组织最先有较高的诱导表达。 展开更多
关键词 西伯利亚鲟 维氏气单胞菌 细菌感染 血清指标 热休克蛋白hsp70基因
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壳聚糖对香鱼溶菌酶活性和hsp70基因表达的影响 被引量：7
7
作者 金思 龚一富 +2 位作者 章丽 张文青 童丽娟 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期11-14,10,共5页
壳聚糖是一种理想的水产动物免疫增强剂和饲料添加剂。为了研究壳聚糖对香鱼非特异性免疫机能的影响,探讨其调节机体免疫功能的机理,以香鱼为研究对象,在基础饲料中分别添加0%、0.5%、1.0%、2.0%和4.0%的壳聚糖,连续投喂35 d后测定香鱼... 壳聚糖是一种理想的水产动物免疫增强剂和饲料添加剂。为了研究壳聚糖对香鱼非特异性免疫机能的影响,探讨其调节机体免疫功能的机理,以香鱼为研究对象,在基础饲料中分别添加0%、0.5%、1.0%、2.0%和4.0%的壳聚糖,连续投喂35 d后测定香鱼肝脏、脾脏和肾脏组织中溶菌酶活性和免疫相关基因hsp70基因表达的影响。结果表明,基础饲料中添加1.0%壳聚糖可使香鱼肝脏、脾脏和肾脏组织中溶菌酶活性显著提高,溶菌酶活性与对照分别提高了0.8倍、3.1倍和5.2倍。定量PCR分析结果表明,添加1.0%壳聚糖可显著促进肝脏、脾脏和肾脏中hsp70基因的表达量,且hsp70基因表达量与溶菌酶活性表现出一定的相关性,表明壳聚糖可通过调节免疫相关基因的表达来调节香鱼的免疫功能。 展开更多
关键词 壳聚糖 香鱼 溶菌酶活性 hsp70基因 非特异性免疫
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高碳水化合物日粮对异育银鲫血浆皮质醇含量和HSP70基因mRNA表达的影响 被引量：5
8
作者 缪凌鸿 戈贤平 +4 位作者 谢骏 刘波 潘良坤 周群兰 陈汝丽 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期819-827,共9页
为了探讨高碳水化合物饲料是否会引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的应激反应,选用体质量为(35.60±1.11)g的异育银鲫168尾,随机分成2组,一组设为对照组(NS),投喂碳水化合物水平为35%的日粮;另一组设为高碳水化合物实验组(H... 为了探讨高碳水化合物饲料是否会引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的应激反应,选用体质量为(35.60±1.11)g的异育银鲫168尾,随机分成2组,一组设为对照组(NS),投喂碳水化合物水平为35%的日粮;另一组设为高碳水化合物实验组(HS),投喂碳水化合物水平为50%的日粮,每组3个重复。在控温的循环水系统中饲养35 d和70 d后,测定异育银鲫血浆皮质醇激素含量及其肝、心脏、脾、肾中HSP70基因mRNA的表达量。结果显示,高碳水化合物实验组35 d时血浆皮质醇激素与对照组相比较显著升高(P<0.05),肝和心脏HSP70基因mRNA表达较对照组明显增强(P<0.05);70 d时血浆皮质醇激素含量升高,且70 d时高碳水化合物组肝、心脏、脾和肾HSP70基因mRNA表达与对照组相比全部增强。各组饲养70 d后,饥饿24 h后重新投喂的0 h、6 h、12 h、24 h、48 h,高碳水化合物实验组(HS)皮质醇含量在6 h、48 h显著高于对照组(P<0.05),在6 h、12 h、48 h肝HSP70基因mRNA表达与对照组相比均增强(P<0.05),说明异育银鲫对50%碳水化合物含量的饲料的耐受性比较差,鱼体产生了应激反应。结果说明,当异育银鲫血清皮质醇激素含量升高时,其肝中HSP70基因mRNA的表达量却降低,反之亦然。本研究旨在为水生动物营养应激及营养免疫的相关研究提供新的思路,为开辟鱼类应激的营养调节提供科学依据。 展开更多
关键词 异育银鲫 碳水化合物 皮质醇 hsp70基因mRNA表达量
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热应激诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡及其对HSP70基因表达的影响 被引量：7
9
作者 张响英 唐现文 +1 位作者 陈静波 李腾腾 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第8期142-146,共5页
为探讨热应激对乳腺上皮细胞凋亡的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的乳腺上皮细胞分别置于39℃和41℃热处理1 h(以37℃正常培养的细胞为对照),在37℃恢复培养0、6、12 h后收集细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,... 为探讨热应激对乳腺上皮细胞凋亡的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的乳腺上皮细胞分别置于39℃和41℃热处理1 h(以37℃正常培养的细胞为对照),在37℃恢复培养0、6、12 h后收集细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,比色法分析Caspase-3活性,荧光定量PCR检测HSP70基因的表达水平。结果表明,39℃热应激组细胞生长抑制率和死亡率高峰期均发生在热修复6 h,细胞死亡率为15.42%,而41℃热应激组发生在热修复12 h,细胞死亡率高达23.18%;高温处理后,Caspase-3活性呈上升趋势;39℃热应激组在热恢复6 h,HSP70基因表达量显著高于对照组,41℃热应激组在热恢复0、6、12 h,HSP70基因的表达量分别为对照组的3.53倍、5.61倍和2.93倍。综上可知,高温应激激活了Caspase-3活性,从而诱导乳腺上皮细胞凋亡,并随高温强度的增加而作用增强,同时高温诱导了HSP70基因过表达,协助细胞获得热耐受性。 展开更多
关键词 乳腺上皮细胞 热应激 细胞凋亡 hsp70基因
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小麦返白系HSP70基因cDNA克隆及序列分析 被引量：4
10
作者 侯典云 杨萌萌 +3 位作者 李炯 赵杏利 胥华伟 张红晓 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期3874-3880,共7页
小麦返白系是从小麦矮变1号中发现的天然突变体,为了研究其＂白化-复绿＂的分子机制,本研究以返白系FA85为材料,在前期蛋白质组学研究的基础上,采用RT-PCR技术,扩增小麦返白系HSP70基因,命名为TafHSP70（GenBank,登录号为FJ830847）,并... 小麦返白系是从小麦矮变1号中发现的天然突变体,为了研究其＂白化-复绿＂的分子机制,本研究以返白系FA85为材料,在前期蛋白质组学研究的基础上,采用RT-PCR技术,扩增小麦返白系HSP70基因,命名为TafHSP70（GenBank,登录号为FJ830847）,并对其蛋白质结构、序列相似性、系统进化等进行了分析研究。结果表明：小麦返白系TafHSP70的cDNA序列长度为1 272 bp,编码423个氨基酸,TafHSP70蛋白的分子质量为45 137.91 k D,理论等电点为4.94,α-螺旋和无规则卷曲是TafHSP70蛋白的主要组成部分,为弱酸性蛋白。Blastn比对和MEGA5.0软件分析表明,小麦返白系TafHSP70与节节麦的序列相似性最高,达到98%。系统进化树结果也显示,返白系不但与节节麦、二穗短柄草、大麦等禾本科植物聚为一支,而且与非禾本科的油棕、海枣、莲等也具有较高的同源性,说明HSP70具有较高的保守性。本研究有助于深入探讨HSP70的功能以及最终解析返白系的分子机制。 展开更多
关键词 小麦返白系 hsp70基因 CDNA克隆 序列分析
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野生花生Hsp70基因家族的全基因组鉴定及生物信息学分析 被引量：6
11
作者 陈湘瑜 徐日荣 +1 位作者 熊发前 唐兆秀 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期572-581,共10页
热激蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)是细胞应对高温和其它胁迫环境时所产生的一类分子伴侣类型应激蛋白。本研究以Arachis duranensis和Arachis ipansis基因组数据库为基础,利用生物信息学方法对Hsp70基因家族进行鉴定分析。结... 热激蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)是细胞应对高温和其它胁迫环境时所产生的一类分子伴侣类型应激蛋白。本研究以Arachis duranensis和Arachis ipansis基因组数据库为基础,利用生物信息学方法对Hsp70基因家族进行鉴定分析。结果表明,A.duranensis含有34个Hsp70基因成员,A.ipansis含有35个Hsp70基因成员,两者的直系同源基因大部分分布于两套染色体相近的位置。Ad Hsp70和Ai Hsp70基因家族根据亚细胞定位结果可分4种类型,各类型的Hsp70基因结构相对保守。根据系统进化分析Hsp70基因家族可分为ClassⅠ(Hsp70)和ClassⅡ(Hsp110)两个亚家族,其中ClassⅠ亚家族进一步分为3个小家族,同时揭示Hsp70基因家族成员产生于单双子叶分化之前。GO分析预测表明,Ad Hsp70和Ai Hsp70基因家族功能类别完全一致,各功能类别数目比例变化相似。本研究结果有助于了解花生属植物Hsp70基因家族功能,以期为深入研究花生逆境生理过程中的分子调控机理提供基础。 展开更多
关键词 野生花生 hsp70基因家族 生物信息学 系统发育 抗高温
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芝麻全基因组Hsp70基因的鉴定与生物信息学分析 被引量：7
12
作者 徐剑文 赵君 +1 位作者 刘剑光 肖松华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期493-502,共10页
利用隐马可链夫模型(HMM)对芝麻全基因组Hsp70基因进行了系统分析,共鉴定出21个Hsp70基因,其中17个属于Dnak基因亚家族,4个属于Hsp110/SSE基因亚家族。根据系统进化树分析和亚细胞定位结果,将芝麻21个Hsp70基因分为6个亚组,其中I亚组3个... 利用隐马可链夫模型(HMM)对芝麻全基因组Hsp70基因进行了系统分析,共鉴定出21个Hsp70基因,其中17个属于Dnak基因亚家族,4个属于Hsp110/SSE基因亚家族。根据系统进化树分析和亚细胞定位结果,将芝麻21个Hsp70基因分为6个亚组,其中I亚组3个,定位于叶绿体;II亚组2个,定位于线粒体;III亚组5个,定位于内质网;IV亚组6个,定位于细胞质基质;V亚组4个,属于Hsp110/SSE基因家族;VI亚组1个。芝麻Hsp70基因启动子区域顺式作用元件功能预测结果显示,Hsp70基因参与芝麻的生长发育和逆境胁迫响应等生理过程。 展开更多
关键词 芝麻 hsp70基因 生物信息学分析
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奶牛HSP70基因多态性与生产性能的关系 被引量：12
13
作者 陈强 李忠浩 王根林 《江西农业学报》 CAS 2007年第7期84-86,共3页
采用PCR-SSCP方法,对娟姗牛和荷斯坦奶牛HSP70基因5′-侧翼区多态性进行了检测。结果初步显示:A基因可能为抗热应激基因,AB型个体的生产性能与BB型个体差异不显著,耐热性能与生产性能的相关性可能不大。
关键词 hsp70基因 热应激 奶牛 多态性
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中国荷斯坦牛HSP70基因3＇-非翻译区多态性与耐热性的关联分析 被引量：4
14
作者 杜方磊 王洪梅 +6 位作者 黄金明 李建斌 仲跻峰 张廷荣 刘剑飞 李秋玲 王长法 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期14-18,共5页
用PCR-SSCP和测序技术研究了541头中国荷斯坦奶牛热休克蛋白70(HSP70)基因的3'-非翻译区的多态性,并研究了多态性对奶牛产奶性状和耐热性状的影响。设计引物扩增片段大小549 bp,通过PCR-SSCP技术发现参与试验的奶牛出现了3个复等位... 用PCR-SSCP和测序技术研究了541头中国荷斯坦奶牛热休克蛋白70(HSP70)基因的3'-非翻译区的多态性,并研究了多态性对奶牛产奶性状和耐热性状的影响。设计引物扩增片段大小549 bp,通过PCR-SSCP技术发现参与试验的奶牛出现了3个复等位基因:A、B和C,6种基因型:AA、AB、AC、BB、BC和CC基因型。测序发现复等位基因是由3个新的突变引起的,第6 400、6 600和6 601位碱基分别发生了G/C、C/T和G/A突变。χ2适合性检验表明,该群体在这三个位点的突变没有达到Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.01)。中国荷斯坦牛BB基因型个体红细胞钾含量和产奶量下降率显著低于其他基因型个体(P<0.05),表明BB型的中国荷斯坦牛耐热性能优于其他类型。BB基因型个体305 d产奶量高于其他5种基因型的个体,进一步说明BB基因型可能在选育高产抗热应激奶牛中得到应用。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 hsp70基因 多态性 热应激 PCR-SSCP
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人食管癌及宫颈癌组织中HSP70基因的表达 被引量：3
15
作者 赵桢 王晓涛 +1 位作者 陈兰英 陈建南 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期109-110,共2页
目的　了解HSP70基因在不同癌组织中的表达情况。方法　采用人的HSP70基因探针P1 7与从人食管癌及宫颈癌组织中提取的RNA进行Northernblot。结果　食管癌和宫颈癌组织中出现的杂交信号均比正常组织强。结论　HSP70基因在癌组织中有高表... 目的　了解HSP70基因在不同癌组织中的表达情况。方法　采用人的HSP70基因探针P1 7与从人食管癌及宫颈癌组织中提取的RNA进行Northernblot。结果　食管癌和宫颈癌组织中出现的杂交信号均比正常组织强。结论　HSP70基因在癌组织中有高表达。HSP70可能在癌变过程中起着重要的作用。 展开更多
关键词 宫颈癌组织 hsp70基因 人食管癌 癌组织中 表达 正常组织 癌变过程 杂交信号 探针 RNA
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嗜热四膜虫五个hsp70基因的表达分析 被引量：3
16
作者 冯立芳 畅悦 +1 位作者 袁冬霞 缪炜 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期267-276,共10页
鉴定得到嗜热四膜虫13个含有完整保守结构域的hsp70基因,对其中5个高度相似且无内含子的hsp70基因进行表达分析。在37、39和41℃热激条件下,实时荧光定量PCR结果表明,hsp70-2基因对热激响应最敏感。在四膜虫生长、饥饿和接合生殖这3种... 鉴定得到嗜热四膜虫13个含有完整保守结构域的hsp70基因,对其中5个高度相似且无内含子的hsp70基因进行表达分析。在37、39和41℃热激条件下,实时荧光定量PCR结果表明,hsp70-2基因对热激响应最敏感。在四膜虫生长、饥饿和接合生殖这3种生理或发育状态下,Microarray结果显示,hsp70-4基因恒定且高表达;在热激条件下,hsp70-4基因的表达水平随着温度的升高而略微增加,证实hsp70-4基因为热休克相关蛋白hsc70基因;克隆的hsp70-4基因全长2208bp,开放阅读框长1959bp,编码653个氨基酸。Microarray结果提示,hsp70-3可能参与四膜虫饥饿早期(0～12h)的耐受和接合生殖后期(6～10h)的新大小核形成,老大核凋亡等事件;hsp70-5可能参与四膜虫饥饿晚期(12～15h)的耐受和接合生殖早期(0～6h)的小核减数分裂、小核交换和原核(pronuclear)融合事件。Blast2GO分析表明,与hsp70-3和hsp70-5共表达的基因分别参与不同的生物学过程,进一步反映了hsp70-3和hsp70-5这两个基因在功能上是存在差异的。 展开更多
关键词 嗜热四膜虫 hsp70基因 实时荧光定量PCR MICROARRAY RACE 表达分析
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牛环形泰勒虫HSP70基因的克隆表达、特性分析及互作蛋白网络构建 被引量：5
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作者 樊新丽 宋瑞其 +5 位作者 呼尔查 李敏 翟雪洁 郝蕴伟 巴音查汗 张杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期1-11,共11页
为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分... 为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分析HSP70基因编码蛋白的氨基酸组成、基本理化性质、亲疏水性、跨膜区结构、信号肽、可能的磷酸化位点、亚细胞定位及蛋白的二级结构和三级结构;对重组蛋白HSP70进行蛋白互作网络分析;构建原核表达载体pET28a-HSP70,筛选诱导表达条件,镍柱纯化重组蛋白及检测反应原性。结果显示,牛环形泰勒虫HSP70蛋白序列与小泰勒虫的序列同源性较高,蛋白分子质量为42 ku,理论等电点(pI)为5.61,属于酸性亲水性蛋白,无跨膜区及信号肽;蛋白功能预测结果显示,HSP70包含32个可能的磷酸化位点,亚细胞定位分析显示该蛋白主要分布于细胞质。蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占39.18%、8.51%、30.41%和21.91%。蛋白互作网络构建结果显示,与HSP70相互作用的蛋白主要为HSP90家族成员,另外还有伴侣蛋白GrpE同系物,预示着HSP70可能在细胞内与HSP90形成复合体发挥作用。本试验成功构建原核表达载体,获得了大小约为48 ku的融合蛋白,以0.6 mmol/L IPTG于37℃诱导5 h,蛋白表达较好;点状印迹及Western blotting结果表明,表达产物可被自然感染的牛环形泰勒虫阳性血清识别,具有良好的反应原性。本试验结果为进一步探讨牛环形泰勒虫HSP70功能机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛环形泰勒虫 hsp70基因 原核表达 反应原性 生物信息学分析
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HSP70基因多态性对矮小型黄羽肉鸡热耐受性的影响 被引量：3
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作者 孔丽娜 甘建伉 +3 位作者 张德祥 张细权 张文武 罗庆斌 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期80-88,共9页
采用PCR产物直接测序和PCR-RFLP检测的方法,选取HSP70基因的C.-69A>G、C.+258A>G、C.+276C>G、C.+909C>A、C.+1044A>G、C.+1437C>T和C.+1476C>T 7个多态位点,分别在15和35℃条件下对矮小型黄羽肉鸡纯系母鸡进行与... 采用PCR产物直接测序和PCR-RFLP检测的方法,选取HSP70基因的C.-69A>G、C.+258A>G、C.+276C>G、C.+909C>A、C.+1044A>G、C.+1437C>T和C.+1476C>T 7个多态位点,分别在15和35℃条件下对矮小型黄羽肉鸡纯系母鸡进行与热耐受性相关的部分生理与免疫指标的关联分析。结果表明:热应激状态下(35℃),C.+276C>G位点与CD3+T细胞含量显著相关(P<0.05),GG基因型个体的CD3+T细胞含量极显著高于CC基因型个体(P<0.01)、显著高于CG基因型个体(P<0.05);C.+1437C>T位点与CD4+T细胞含量极显著相关(P<0.01),CC基因型个体CD4+T细胞含量极显著低于CT和TT基因型个体(P<0.01)。C.+1476C>T位点的CT基因型个体H/L值显著低于CC基因型个体(P<0.05)。常温状态下(15℃),C.-69A>G位点的GG基因型个体CD4+T细胞含量显著高于AG基因型个体(P<0.05);C.+1044A>G位点与CD4+T细胞含量显著相关(P<0.05),AG基因型个体CD4+T细胞含量显著高于AA基因型个体(P<0.05);C.+1437C>T位点与CD3+T细胞含量、皮质酮值显著相关(P<0.05),CC基因型个体的CD3+T细胞含量和皮质酮值都显著高于CT和TT基因型个体(P<0.05)。与常温状态相比,各位点同一基因型在热应激状态下T3水平、H/L值和CD4+T细胞含量都显著升高,皮质酮含量和CD3+T细胞含量都显著下降。C.-69A>G、C.+276C>G、C.+1044A>G、C.+1437C>T和C.+1476C>T 5个位点与部分生理、免疫指标显著相关。其中C.+1437C>T位点与多个生理、免疫指标都有显著或极显著相关,表明该位点对矮小型黄羽肉鸡的热耐受性具有潜在的遗传效应。 展开更多
关键词 鸡 hsp70基因 单核甘酸多态性 生理指标 免疫指标
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谢氏宽漠王HSP70基因cDNA片段的克隆及热激条件下的表达 被引量：4
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作者 唐婷 柳峰松 任国栋 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期365-371,共7页
谢氏宽漠王Mantichorula semenowi Reitter是一种沙漠指示性甲虫。本研究由该种甲虫体内克隆到两种不同的HSP70基因片段,分别为MsHSP70和MsHSC70。同源性发现表明这两个基因片段与已报道的其他昆虫的热休克蛋白核苷酸序列高度同源。半定... 谢氏宽漠王Mantichorula semenowi Reitter是一种沙漠指示性甲虫。本研究由该种甲虫体内克隆到两种不同的HSP70基因片段,分别为MsHSP70和MsHSC70。同源性发现表明这两个基因片段与已报道的其他昆虫的热休克蛋白核苷酸序列高度同源。半定量RT-PCR分析显示：经42℃热激1h后立即诱导MsHSP70表达至最高峰;在恢复到室温的1～4h内MsHSP70表达量逐渐降低,但仍然高于未热激对照组。而MsHSC70在42℃热激1h后表达受到抑制,但在恢复2h和4h时有少量的表达,分别仅为未热激对照组的0.25和0.28倍。结果提示MsHSP70和MsHSC70在保护细胞方面具有不同的作用。本实验结果为谢氏宽漠王在极端的沙漠环境胁迫下的抗逆适应性研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 谢氏宽漠王 hsp70基因 CDNA克隆 半定量RT-PCR 热激 热休克蛋白
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两种缘毛类纤毛虫胞质Hsp70基因序列的克隆及其系统发育分析 被引量：3
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作者 傅诚杰 缪炜 +1 位作者 沈韫芬 万明亮 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期298-303,共6页
克隆得到 2种缘毛类纤毛虫———钟形钟虫 (Vorticellacampanula)和螅状独缩虫 (Carchesiumpolyp inum)的胞质Hsp70基因部分序列 ,长度均为 4 38bp ,编码 14 6个氨基酸。以细菌为外类群 ,利用最大似然法和邻接法构建包括其他 5种纤毛虫... 克隆得到 2种缘毛类纤毛虫———钟形钟虫 (Vorticellacampanula)和螅状独缩虫 (Carchesiumpolyp inum)的胞质Hsp70基因部分序列 ,长度均为 4 38bp ,编码 14 6个氨基酸。以细菌为外类群 ,利用最大似然法和邻接法构建包括其他 5种纤毛虫在内的共 2 6个物种的Hsp70基因氨基酸序列系统发育树 ,其拓扑结构显示 :V campanula和C polypinum聚在一起 ,并与另 2种寡膜纲的嗜热四膜虫 (Tetrahymenathermophila)及草履虫(Parameciumtetraurelia)聚为姊妹枝 ,提示了缘毛类纤毛虫为单系 ,且隶属于寡膜纲的系统发育地位。 展开更多
关键词 缘毛类纤毛虫 胞质 hsp70基因 克隆 系统发育
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