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结核分枝杆菌Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响 被引量：4
1
作者 刘云霞 董伟杰 +7 位作者 庹清章 刘丹霞 李微 张春军 张辉 吴芳 章乐 张万江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第5期597-600,共4页
为研究结核分枝杆菌Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响。分别用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(H37Rv)、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗(BCG)和卡介苗Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)感染RA... 为研究结核分枝杆菌Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响。分别用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(H37Rv)、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗(BCG)和卡介苗Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)感染RAW264.7巨噬细胞株,使用流式细胞技术于感染1、3、6及12h检测各组感染巨噬细胞的凋亡率,并分析其变化。结果显示,巨噬细胞感染结核分枝杆菌后凋亡率升高,其中在感染1、3、12h,BCG组与H37Rv组比较差异具有统计学意义(P<0.05);在感染1、3h,△BCG组与△H37Rv组比较差异具有统计学意义(P<0.05);在感染3、6、12h,△H37Rv组与H37Rv组比较差异具有统计学意义(P<0.05),△BCG组与BCG组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。由此可知,结核分枝杆菌Hsp16.3可抑制感染巨噬细胞的凋亡。 展开更多
关键词 H37RV △H37Rv BCG ABCG hsp16 3 巨噬细胞 凋亡
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结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的基因克隆及生物信息学分析 被引量：1
2
作者 徐芳 姚楠 +5 位作者 田玺泽 董江涛 吴芳 章乐 吴江东 张万江 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期6-11,共6页
目的构建结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3原核表达载体,获得Hsp16.3蛋白,并应用生物信息学软件,分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3(Hsp16.3)的多种蛋白质性质,以及获取该基因的相关信息。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA... 目的构建结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3原核表达载体,获得Hsp16.3蛋白,并应用生物信息学软件,分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3(Hsp16.3)的多种蛋白质性质,以及获取该基因的相关信息。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增Hsp16.3基因,PET28a为载体,构建重组质粒PET28a-Hsp16.3并表达,利用Pmtparam、Protseale、HMMTOP、TMHMM、GOR4、ProtFun等软件预测和分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3的氨基酸组成、理论等电点、结构域、活性位点、疏水性、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构及系统进化分析。结果成功构建了Hsp16.3原核表达载体PET28a-Hsp16.3,并在宿主菌BL21(DE3)中表达。推测结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3白分子式为C716H1131N197O225S4,分子量为16227.2,理论等电点为5.00。该蛋白氨基酸序列中含有α-螺旋(Alpha helix)46处,延伸链(Extended strand)25处,无规则卷曲(Random coil)73处及5个磷酸化位点;4个O-糖基化位点;1个前肽裂解预测位点。结论 Hsp16.3基因克隆入宿主菌中并成功表达;该蛋白推测是一个亲水性不稳定蛋白,无跨膜区,可能参与重要的能量代谢及免疫反应。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 克隆 hsp16 3 生物信息学
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结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化 被引量：3
3
作者 赵小杰 黄晓艳 +9 位作者 庹清章 董江涛 田玺择 刘云霞 董伟杰 刘丹霞 李微 吴芳 章乐 张万江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第1期54-60,共7页
探讨结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化。用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测不同时期感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡... 探讨结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化。用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测不同时期感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率,比较结核分枝杆菌Hsp16.3基因缺失突变株与正常株感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的时相性变化。激光共聚焦显微镜检测结果显示:结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗菌株(BCG)以及卡介苗株Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)均被小鼠肺泡巨噬细胞大量吞噬。流式细胞技术检测结果显示:小鼠感染△H37Rv菌株后,巨噬细胞的凋亡率逐渐上升,至感染7d时达到高峰,随后逐渐降低,1～7d内,各时间段△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率均显著高于H37Rv感染组,9～11d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率反而低于H37Rv菌株组,但13～15d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率又呈现出比H37Rv感染组高的现象,差异均有统计学意义(P<0.05)。△BCG组凋亡率1～7d内呈现明显下降趋势,7d后巨噬细胞凋亡率变化趋于平稳,且1～5d内,△BCG组凋亡率显著高于BCG组(P<0.05),7～15d内,△BCG组与BCG组巨噬细胞凋亡率无明显差异。结果表明:与结核分枝杆菌H37Rv株野生株相比,结核分枝杆菌H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株在感染的早期和晚期对小鼠肺泡巨噬细胞有更强的致凋亡作用,而这种致凋亡作用与结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因的缺失相关,说明在结核分枝杆菌感染的早期和晚期,结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的表达能够抑制宿主巨噬细胞的凋亡。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 hsp16 3 缺失突变 巨噬细胞 凋亡
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粉尘螨HSP16-1原核表达体系构建与温度应激响应功能鉴定 被引量：1
4
作者 牛栋玲 赵亚娥 +2 位作者 张宛钰 郭宏松 胡丽 《热带病与寄生虫学》 CAS 2021年第2期64-69,81,共7页
目的建立原核表达体系,在蛋白水平确认粉尘螨HSP16-1蛋白的温度应激响应功能。方法基于前期RNA-seq获得的粉尘螨HSP16-1基因序列,设计特异性引物,PCR扩增克隆测序;利用生物信息学软件,分析理化性质,预测亚细胞定位和三维结构;通过构建p ... 目的建立原核表达体系,在蛋白水平确认粉尘螨HSP16-1蛋白的温度应激响应功能。方法基于前期RNA-seq获得的粉尘螨HSP16-1基因序列,设计特异性引物,PCR扩增克隆测序;利用生物信息学软件,分析理化性质,预测亚细胞定位和三维结构;通过构建p ET32a/HSP16-1原核表达质粒,转化大肠杆菌感受态细胞BL21;采用1 mmol/L IPTG在16、28和37℃三个温度诱导HSP16-1重组蛋白表达,分别在2、4、6和8 h取样进行SDS-PAGE分析;绘制热胁迫和冷胁迫下重组菌与空载菌生长曲线。结果测序获得粉尘螨HSP16-1完整CDS为462 bp,编码153个氨基酸;BLAST比对显示粉尘螨与近缘物种屋尘螨核苷酸和氨基酸序列相似度分别为84.63%和87.58%;亚细胞定位在细胞核;保守区预测含有α晶体HSP23超家族保守区。菌落PCR及双酶切鉴定p ET32a/HSP16-1重组质粒构建成功。SDS-PAGE分析显示,HSP16-1蛋白被成功诱导表达,37℃诱导6 h是最佳诱导条件。细菌生长曲线显示,p ET32a/HSP16-1重组菌在热胁迫下的生长均优于p ET32a空载菌,而冷胁迫下则相反,空载菌生长要优于重组菌。结论粉尘螨HSP16-1蛋白仅在热胁迫下发挥应激响应功能,而在冷胁迫未表现出相似的功能。 展开更多
关键词 粉尘螨 hsp16-1 原核表达 温度应激响应 功能鉴定
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