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HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
被引量:
1
1
作者
贾建安
周波
+9 位作者
钱宝华
蒋少华
陈秋莉
潘欣
赵平
任浩
温宗梅
邓松华
卢洪洲
潘卫
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2006年第2期108-112,共5页
目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DN...
目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序。将HIV-1PRDNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定。结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致。所构建的HIV-1PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14000的HIV-1PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74mg/ml。ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应。结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1PR蛋白具有免疫学特性。
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关键词
人免疫缺陷病毒
蛋白酶
基因表达
大肠杆菌
HIV-1
hxb2
暂未订购
题名
HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
被引量:
1
1
作者
贾建安
周波
钱宝华
蒋少华
陈秋莉
潘欣
赵平
任浩
温宗梅
邓松华
卢洪洲
潘卫
机构
第二军医大学微生物学教研室
安徽医科大学病理学教研室
上海长海医院输血科
上海市公共卫生中心
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2006年第2期108-112,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30472050)
上海市科技攻关计划(05dz19317).
文摘
目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序。将HIV-1PRDNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定。结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致。所构建的HIV-1PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14000的HIV-1PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74mg/ml。ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应。结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1PR蛋白具有免疫学特性。
关键词
人免疫缺陷病毒
蛋白酶
基因表达
大肠杆菌
HIV-1
hxb2
Keywords
HIV
Protease
Gene expression
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
暂未订购
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
贾建安
周波
钱宝华
蒋少华
陈秋莉
潘欣
赵平
任浩
温宗梅
邓松华
卢洪洲
潘卫
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2006
1
暂未订购
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