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基于HTRF方法的PGE2释放抑制高通量筛选模型的建立及其在中药活性成分发现中的应用
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作者 白志茹 费洪强 +6 位作者 李娜 曹亮 章晨峰 王团结 丁岗 王振中 萧伟 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期509-513,共5页
前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)是参与炎症、疼痛等多种生理病理机制过程的活性物质。该文在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生PGE2的模型上,利用均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluoresce... 前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)是参与炎症、疼痛等多种生理病理机制过程的活性物质。该文在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生PGE2的模型上,利用均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)方法结合全自动化筛选操作系统,建立检测PGE2含量的高通量模型,选用公司中药物质基础库内的5 121个中药成分为检测样品,用于筛选PGE2抑制剂。该模型选择细胞铺板密度为每孔2 000个细胞;阳性化合物的IC50平均值为(7.3±0.1)μmol;检测板的Z'因子均大于0.5,平均值为0.7;5 121个样品中有228个样品在检测浓度对PEG2产生的抑制率大于50%,23个样品对PEG2产生的抑制作用大于80%。该模型数据稳定性和准确性均达到预期标准,表明筛选结果可靠真实;自动化筛选系统的引入,令该模型具有快速,微量,高效等优势,日平均筛选量达到14 000数据点以上,为抗炎镇痛相关新药发现和中药有效物质成分的前期快速筛选提供了新的模型。 展开更多
关键词 前列腺素E2 htrf 高通量 中药物质基础库
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Study on the expression and mutation of human telomeric repeat binding factor (hTRF1) in 10 malignant hematopoietic cell lines 被引量:1
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作者 SUN Jie +12 位作者 (孙洁) HUANG He(黄河) ZHU Yuan-yuan(朱园园) LAN Jian-ping(蓝建平) LI Jing-yuan(李静远) LAI Xiao-yu(来晓瑜) YU Jian(余建) 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2005年第12期1141-1147,共7页
Objective: Detecting the expression and mutation of human telomeric repeat binding factor (hTRF1) in 10 malignant hematopoietic cell line cells on the base of determining its genomic structure and its four pseudoge... Objective: Detecting the expression and mutation of human telomeric repeat binding factor (hTRF1) in 10 malignant hematopoietic cell line cells on the base of determining its genomic structure and its four pseudogenes to clarify ifhTRF1 mutation is one of the factors of the activation of telomerase. Methods: hTRFlcDNA sequences were obtained from GenBank, its genome structure and pseudogenes were forecasted by BLAST and other biology information programs and then testified by sequencing. Real-time RT-PCR was used to detect the expression of h TRFlmRNA in 10 cell line cells, including myelogenous leukemia cell lines K562, HL-60, U-937, NB4, THP-I, HEL and Dami; lymphoblastic leukemia cell lines 6T-CEM, Jurkat and Raji. Telomerase activities of cells were detected by using telomeric repeat amplification (TRAP)-ELISA protocol. PCR and sequencing were used to detect mutation of each exon ofhTRF1 in 10 cell line cells. Results: hTRF1 gene, mapped to 8q13, was divided into 10 exons and spans 38.6 kb. Four processed pseudogenes ofhTRF1 located on chromosome 13, 18, 21 and X respectively, was named as ψhTRFI-13, ψhTRFI-18, ψhTRF1-21 and ψhTRFI-X respectively. All cell line cells showed positive telomerase activity. The expression of hTRF1 was significantly lower in malignant hematopoietic cell lines cells (0.0338, 0.0108-0.0749) than in normal mononuclear cells (0.0493, 0.0369-0.128) (P=0.004). But no significant mutation was found in all exons of hTRF1 in 10 cell line cells. Four variants were found in part ofintron 1, 2 and 8 ofhTRF1. Their infection on gene function is unknown and needs further studies. Conclusion: hTRF1 mutation is probably not one of the main factors for telomerase activation in malignant hematopoietic disease. 展开更多
关键词 Human telomeric repeat binding factor htrf1) EXPRESSION MUTATION Genome Processed pseudogene
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腔内泌尿外科热疗的新进展 被引量:2
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作者 章咏裳 《临床泌尿外科杂志》 北大核心 1996年第6期327-329,共3页
腔内泌尿外科热疗的新进展章咏裳数年来,腔内泌尿外科热疗发展很快,不断有新的设备和技术出现,现介绍当前文献资料中腔内泌尿外科热疗在临床应用较多的新技术。1经尿道前列腺气化(TUVP)此项技术使用经尿道前列腺电切术(TU... 腔内泌尿外科热疗的新进展章咏裳数年来,腔内泌尿外科热疗发展很快,不断有新的设备和技术出现,现介绍当前文献资料中腔内泌尿外科热疗在临床应用较多的新技术。1经尿道前列腺气化(TUVP)此项技术使用经尿道前列腺电切术(TURP)的全部器械,只是将电切环袢换... 展开更多
关键词 腔内泌尿外科 热疗法 泌尿外科 TUVP htrf TUNA
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3种mRNA疫苗dsRNA残留量检测方法的比较 被引量:2
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作者 刘晶晶 李玉华 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1941-1946,共6页
目的:对mRNA疫苗dsRNA残留量的常用检测方法均相时间分辨荧光法(homogeneous time resolved fluorescence,HTRF法)、酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法)和斑点杂交法(Dot Blot法)进行比较研究,为mRNA疫苗质量控制... 目的:对mRNA疫苗dsRNA残留量的常用检测方法均相时间分辨荧光法(homogeneous time resolved fluorescence,HTRF法)、酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法)和斑点杂交法(Dot Blot法)进行比较研究,为mRNA疫苗质量控制提供技术支撑。方法:分别根据HTRF法、ELISA法和Dot Blot法特点,配制相应浓度标准品,通过建立标准曲线,计算样品dsRNA浓度,考察3种方法的适用性、准确度、精密度、定量限和曲线拟合关系。结果:HTRF法检测dsRNA残留量的回收率为110.7%,重复性的RSD为5.6%,中间精密度的RSD≤19.0%,在1.56~100.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9993);ELISA法检测dsRNA残留量的回收率为103.2%,重复性的RSD为19.5%,中间精密度的RSD≤11.7%,在7.81~500.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9998);Dot Blot法检测dsRNA残留量的回收率为101.5%,重复性的RSD为18.5%,中间精密度的RSD≤42.2%,在800.00~80000.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9992)。HTRF法和ELISA法的准确度和精密度良好,HTRF法可检测较低浓度的dsRNA残留量。结论:3种方法均可有效检测mRNA疫苗中的dsRNA残留量。 展开更多
关键词 mRNA疫苗 dsRNA残留量检测 均相时间分辨荧光法 酶联免疫法 斑点杂交法
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基于mCRTH2受体细胞筛选模型的建立
5
作者 冯雷 陈红岩 《齐齐哈尔医学院学报》 2015年第24期3596-3598,共3页
目的利用检测细胞内cAMP水平的方法,建立了鼠源CRTH2受体的细胞膜模型。方法将鼠源CRTH2的ORF区域克隆到真核表达载体pcDNA3.1-Hygro(+)。将此重组质粒转染CHO细胞,利用抗生素筛选和cAMP功能检测的方法得到了稳定高表达CRTH2的重组细胞... 目的利用检测细胞内cAMP水平的方法,建立了鼠源CRTH2受体的细胞膜模型。方法将鼠源CRTH2的ORF区域克隆到真核表达载体pcDNA3.1-Hygro(+)。将此重组质粒转染CHO细胞,利用抗生素筛选和cAMP功能检测的方法得到了稳定高表达CRTH2的重组细胞株。结果选用该受体特异性的刺激剂PGD2进行功能验证,得到的EC50为25nM。并对该细胞株进行了0到15代的功能检测。检测结果稳定一致。结论本实验成功构建了一个基于cAMP功能检测的鼠源CRTH2细胞模型。 展开更多
关键词 mCRTH2受体 c AMP htrf实验方法 细胞模型
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人转运蛋白SR2的原核表达及其与HIV-1整合酶体外相互作用的检测
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作者 许晓双 张大为 孔韧 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期38-41,共4页
人转运蛋白SR2(TRN-SR2)与HIV-1整合酶(IN)相互作用是抗HIV治疗的有效靶点,寻找和设计该靶点的高效抑制剂具有重要的临床意义和广阔的应用前景。因此为了开展以TRN-SR2与HIV-1IN相互作用为靶点的抑制剂筛选研究,以pGEX-2T为载体的重组质... 人转运蛋白SR2(TRN-SR2)与HIV-1整合酶(IN)相互作用是抗HIV治疗的有效靶点,寻找和设计该靶点的高效抑制剂具有重要的临床意义和广阔的应用前景。因此为了开展以TRN-SR2与HIV-1IN相互作用为靶点的抑制剂筛选研究,以pGEX-2T为载体的重组质粒pGST-TRN-SR2在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行原核表达,并利用亲和层析纯化得到浓度为0.80mg/mL的重组TRN-SR2蛋白;然后采用生物膜干涉技术(BLI)进行体外检测重组TRN-SR2蛋白与HIV-1IN的相互作用和结合情况。结果表明,重组TRN-SR2蛋白与HIV-1IN相互结合信号明显升高,且测得平衡解离常数KD值为45.2nmol/L。最后利用均相时间分辨荧光技术(HTRF)和交叉滴定实验确定了TRN-SR2与HIV-1IN在该靶点抑制剂筛选实验体系中的最适反应浓度分别为20和40nmol/L。以上研究结果说明原核表达的重组TRN-SR2蛋白的活性较好且与HIV-1IN体外相互作用明显,同时在筛选实验体系中TRN-SR2与HIV-1IN最适浓度的确定也为后续抑制剂的筛选提供了相应的研究基础。 展开更多
关键词 HIV-1整合酶 TRN-SR2 蛋白-蛋白相互作用 BLI htrf
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以GLP-1受体为靶点的药物筛选模型的建立及功能鉴定 被引量:5
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作者 黎思彤 郑雪萍 +4 位作者 杨学敏 聂涛 陈健文 刘培庆 李民 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期285-289,共5页
目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,... 目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,经G418压力筛选后获得稳定表达GLP-1R-GFP的293A细胞株,然后通过GFP荧光信号和Western blot检测GLP-1R-GFP融合蛋白在该细胞中的表达与分布;最后利用GLP-1类似物利拉鲁肽刺激细胞,均相时间分辨荧光法检测细胞内cAMP含量变化。结果成功构建了GLP-1R-GFP-293A稳转细胞株,GLP-1RGFP蛋白主要分布在细胞膜表面,该细胞对GLP-1类似物利拉鲁肽具有高灵敏度和产生cAMP的特异性反应。结论利用所构建的细胞模型,可对小分子和GLP-1类似物进行体外活性分析,为筛选GLP-1受体激动剂奠定了模型基础。 展开更多
关键词 CAMP GLP-1受体 细胞模型 融合蛋白 均相时间分辨荧光法 糖尿病
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肌醇需求酶1(IRE1)激酶抑制剂高通量筛选模型的建立
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作者 张坤智 苏明波 周宇波 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期103-113,共11页
运用昆虫蛋白表达体系成功表达纯化得到高纯度的内质网单次跨膜蛋白肌醇需求酶1(IRE1)细胞质区域段,并建立基于均相时间分辨荧光(HTRF,Homogeneous Time-resolved Fluorescence)原理的激酶活性检测体系,优化激酶抑制剂的高通量筛选模型... 运用昆虫蛋白表达体系成功表达纯化得到高纯度的内质网单次跨膜蛋白肌醇需求酶1(IRE1)细胞质区域段,并建立基于均相时间分辨荧光(HTRF,Homogeneous Time-resolved Fluorescence)原理的激酶活性检测体系,优化激酶抑制剂的高通量筛选模型.该模型Z′因子等于0.58,CV值等于7.5%,符合高通量筛选要求,表明高通量筛选模型建立成功.本工作为进一步发现IRE1激酶抑制剂及其后续研究工作奠定坚实基础. 展开更多
关键词 肌醇需求酶-1 激酶抑制剂 昆虫表达 均相时间分辨荧光 高通量筛选
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铕螯合剂对甲胎蛋白单克隆抗体标记的研究
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作者 孙延文 谢文兵 +3 位作者 刘秀霞 常宇 潘利华 于庭 《中国实验诊断学》 2018年第1期114-117,共4页
目的探究自合成铕螯合剂对甲胎蛋白单克隆抗体的标记方法。方法经EDC和NHS活化的铕螯合剂偶联甲胎蛋白单克隆抗体,通过透析收集标记抗体,检测荧光强度和免疫活性,计算回收率和标记率。结果标记抗体荧光强度高,免疫活性无明显变化,回收率... 目的探究自合成铕螯合剂对甲胎蛋白单克隆抗体的标记方法。方法经EDC和NHS活化的铕螯合剂偶联甲胎蛋白单克隆抗体,通过透析收集标记抗体,检测荧光强度和免疫活性,计算回收率和标记率。结果标记抗体荧光强度高,免疫活性无明显变化,回收率为94%,标记率为15。结论自合成的铕螯合剂可用于甲胎蛋白单克隆抗体的标记,标记效果理想,可进一步建立均相时间分辨荧光免疫分析方法。 展开更多
关键词 铕螯合剂 免疫标记 甲胎蛋白 均相时间分辨荧光免疫分析
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HIV-1衣壳蛋白抑制剂体外筛选方法研究进展
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作者 张大为 许晓双 常珊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期473-477,共5页
HIV-1的感染高度依赖其圆锥形的"富勒烯"型衣壳。衣壳由大约1 500个衣壳蛋白组装而成。近年来,衣壳蛋白已成为设计和筛选抗HIV-1药物的理想靶点。目前,文献已报道了多种基于不同原理的HIV-1衣壳蛋白抑制剂的筛选方法,该文将... HIV-1的感染高度依赖其圆锥形的"富勒烯"型衣壳。衣壳由大约1 500个衣壳蛋白组装而成。近年来,衣壳蛋白已成为设计和筛选抗HIV-1药物的理想靶点。目前,文献已报道了多种基于不同原理的HIV-1衣壳蛋白抑制剂的筛选方法,该文将对这些体外筛选方法进行综述。 展开更多
关键词 HIV-1 衣壳蛋白抑制剂 邻近闪烁分析 均相时间分辨荧光 放大化学发光临近均相检测 噬菌体展示 双分子荧光互补 假病毒 虚拟筛选
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Hesitant Trapezoid Fuzzy Hamacher Aggregation Operators and Their Application to Multiple Attribute Decision Making 被引量:2
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作者 Qian YU Jun CAO +2 位作者 Ling TAN Yubing ZHAI Jiongyan LIU 《Journal of Systems Science and Information》 CSCD 2020年第6期524-548,共25页
In this paper,we investigate the multiple attribute decision making(MADM)problems in which the attribute values take the form of hesitant trapezoid fuzzy information.Firstly,inspired by the idea of hesitant fuzzy sets... In this paper,we investigate the multiple attribute decision making(MADM)problems in which the attribute values take the form of hesitant trapezoid fuzzy information.Firstly,inspired by the idea of hesitant fuzzy sets and trapezoid fuzzy numbers,the definition of hesitant trapezoid fuzzy set and some operational laws of hesitant trapezoid fuzzy elements are proposed.Then some hesitant trapezoid fuzzy aggregation operators based on Hamacher operation are developed,such as the hesitant trapezoid fuzzy Hamacher weighted average(HTr FHWA)operator,the hesitant trapezoid fuzzy Hamacher weighted geometric(HTr FHWG)operator,the hesitant trapezoid fuzzy Hamacher Choquet average(HTr FHCA),the hesitant trapezoid fuzzy Hamacher Choquet geometric(HTr FHCG),etc.Furthermore,an approach based on the hesitant trapezoid fuzzy Hamacher weighted average(HTr FHWA)operator and the hesitant trapezoid fuzzy Hamacher weighted geometric(HTr FHWG)operator is proposed for MADM problems under hesitant trapezoid fuzzy environment.Finally,a numerical example for supplier selection is given to illustrate the application of the proposed approach. 展开更多
关键词 multiple attribute decision making(MADM) hesitant trapezoid fuzzy set(htrfS) Hamacher operation Choquet integral
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