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利用免疫共沉淀验证HT036与P311间的相互作用 被引量：3
1
作者 袁顺宗 彭旭 +9 位作者 马兵 王庆红 易绍萱 贺伟峰 陈希炜 胡晓红 张小容 周丽娜 罗高兴 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期2400-2402,共3页
目的利用免疫共沉淀技术验证未知蛋白HT036(hypotheticalprotein,HT036)和P311间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的HT036融合蛋白(HA-HT036)的重组载体pCMV-HA-HT036,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的P311融合蛋... 目的利用免疫共沉淀技术验证未知蛋白HT036(hypotheticalprotein,HT036)和P311间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的HT036融合蛋白(HA-HT036)的重组载体pCMV-HA-HT036,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的P311融合蛋白(Myc-P311)的重组真核表达载体pCMV-Myc-p311,单独或者共转染人293细胞,利用免疫共沉淀技术验证HT036与P311间的相互作用。结果构建的重组表达载体pCMV-HA-HT036经双酶切鉴定正确,转染293细胞,抗Myc单克隆抗体沉淀Myc-P311相互作用蛋白复合物后,用抗HA单克隆抗体进行Westernblot检测,可以检测到HA-HT036的表达。结论成功构建了HA-HT036融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中表达后利用免疫共沉淀技术证实HT036与P311之间存在着相互作用。 展开更多
关键词 ht036 P311 载体构建 免疫共沉淀 相互作用
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人HT036蛋白的原核表达及鉴定
2
作者 彭旭 袁顺宗 +7 位作者 王晓娟 甘成军 王庆红 陈烯伟 张小容 胡晓红 罗高兴 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期817-819,共3页
目的原核表达人HT036蛋白并鉴定其正确性。方法采用PCR技术,扩增人HT036蛋白编码序列,克隆至原核表达载体pET30a(+)中,用IPTG诱导表达,免疫印迹鉴定。结果PCR扩增得到了目的DNA片段,克隆至原核表达载体后经酶切与测序鉴定正确,并在大肠... 目的原核表达人HT036蛋白并鉴定其正确性。方法采用PCR技术,扩增人HT036蛋白编码序列,克隆至原核表达载体pET30a(+)中,用IPTG诱导表达,免疫印迹鉴定。结果PCR扩增得到了目的DNA片段,克隆至原核表达载体后经酶切与测序鉴定正确,并在大肠杆菌中获得高效表达,用抗His抗体鉴定融合蛋白表达正确。结论成功构建了重组原核表达载体并正确表达了HT036蛋白。 展开更多
关键词 ht036蛋白 原核表达 增生性瘢痕
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