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HSPC016基因重组工程菌发酵研究 被引量:5
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作者 邹锋 郝飞 +4 位作者 宋志强 易勇 郝进 钟华 叶庆佾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期904-906,共3页
目的 研究人毛乳头细胞HSPC0 16基因重组工程菌的发酵工艺。方法 采用德国B Brau公司C 10型5L发酵罐批次发酵,通过对能影响工程菌生长和目的蛋白表达的条件如不同培养基、不同葡萄糖浓度、营养物补充、pH及溶氧调节等进行优化,确定合... 目的 研究人毛乳头细胞HSPC0 16基因重组工程菌的发酵工艺。方法 采用德国B Brau公司C 10型5L发酵罐批次发酵,通过对能影响工程菌生长和目的蛋白表达的条件如不同培养基、不同葡萄糖浓度、营养物补充、pH及溶氧调节等进行优化,确定合适的培养条件和发酵工艺。结果 在优化条件下,菌体单产可达45 g/L ,目的蛋白表达量约占总蛋白的18%。结论 此发酵工艺可以提高人毛乳头细胞HSPC0 16/pET 2 8a(+ )基因重组工程菌的收获和目的蛋白表达。 展开更多
关键词 人毛乳头细胞 hspc016基因 发酵 大肠杆菌
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毛乳头细胞HSPC016基因亚型全长cDNA的克隆及功能分析
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作者 王继文 宋志强 +3 位作者 邓永键 杨希川 麦跃 郝飞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期498-501,共4页
目的 从人毛乳头细胞(DPC)内克隆DPC凝集性生长相关基因HSPC016的全长cDNA,分析HSPC016基因的结构与功能,探讨其对DPC生长分化的调节作用。方法 使用RACE技术从DPC内克隆HSPC016基因全长cDNA,通过生物信息学手段分析其染色体定位、蛋... 目的 从人毛乳头细胞(DPC)内克隆DPC凝集性生长相关基因HSPC016的全长cDNA,分析HSPC016基因的结构与功能,探讨其对DPC生长分化的调节作用。方法 使用RACE技术从DPC内克隆HSPC016基因全长cDNA,通过生物信息学手段分析其染色体定位、蛋白序列、结构域,预测其生物功能。结果 获得两条全长cDNA序列,分别为400bp和493bp,均为HSPC016基因亚型。其染色体定位为3q21 31,是一种进化保守基因。HSPC016蛋白大小为64aa,存在于细胞核内的概率为56 7%,结构域属于PD053992家族,与核内转录调控因子T2FA的功能域同源。结论 HSPC016是一种转录调控基因,其蛋白产物可能作为转录复合体的一个亚单位,在DPC生长分化过程中通过调节其他基因的转录而发挥调控作用。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 基因 hspc016 转录调节
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人毛乳头细胞HSPC016基因在毕赤酵母中的表达和鉴定
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作者 邹锋 郝飞 +4 位作者 宋志强 易勇 杨希川 杨斌 叶庆佾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第14期1481-1483,共3页
目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的真核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定。方法用PCR从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至酵母表达载体pPIC9K质粒,经酶切鉴定后转化毕赤酵母菌GS115,G418-YPD平板... 目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的真核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定。方法用PCR从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至酵母表达载体pPIC9K质粒,经酶切鉴定后转化毕赤酵母菌GS115,G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导表达后进行Westernblot检测和目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定。结果用PCR成功扩增出目的基因;pPIC9K/HSPC016转化GS115用G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白相对分子量约为7·2×103,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约18%;Westernblot检测具有良好的免疫反应性;N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。结论HSPC016基因能通过酵母表达载体pPIC9K及宿主菌GS115进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因在真核细胞水平表达的生物学意义奠定了基础。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 hspc016基因 毕赤酵母 真核表达
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人毛乳头细胞HSPC016基因在大肠杆菌中的表达和鉴定
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作者 邹锋 郝飞 +4 位作者 宋志强 易勇 郝进 钟华 叶庆佾 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期212-215,共4页
目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的原核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定。方法采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至pMD18-T载体,双酶切回收纯化目的片段后连接至同样酶切回收的表达... 目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的原核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定。方法采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至pMD18-T载体,双酶切回收纯化目的片段后连接至同样酶切回收的表达载体pET-28a(+)质粒中。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,UVP图像扫描分析并对目的蛋白进行N-端氨基酸测序鉴定。结果采用PCR技术成功地从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,序列分析显示HSPC016基因ORF由195bp组成并与GenBank公布序列完全一致。原核表达载体pET-28a(+)/HSPC016转化工程菌E.coliBL21并经诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白Mr约为7200,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约20%。N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。结论HSPC016基因能通过原核载体pET-28a(+)及工程菌E.coliBL21进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因表达的生物学意义奠定了基础。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 hspc016基因 原核表达
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HSPC016的表达、纯化与生物学活性分析
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作者 邹锋 郝飞 +4 位作者 易勇 邹全明 宋志强 杨希川 叶庆佾 《中国麻风皮肤病杂志》 2007年第9期766-768,共3页
目的:测定大肠杆菌中造血干细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)016融合蛋白的表达,纯化及其生物学活性。方法:采用PCR技术从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出目的基因HSPC016重组到质粒pET-22b(+)中,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达... 目的:测定大肠杆菌中造血干细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)016融合蛋白的表达,纯化及其生物学活性。方法:采用PCR技术从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出目的基因HSPC016重组到质粒pET-22b(+)中,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍离子亲和层析和分子筛法纯化;用胰蛋白酶消化对数期生长的第3代和第9代DPC,细胞记数法记录生长曲线。结果:原核表达载体pET-22b(+)/HSPC016在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白表达率约28%,纯化后纯度达95%以上;经重组蛋白处理的DPC增殖活跃;细胞记数结果初步证实HSPC016重组蛋白能促进第9代DPC的增殖及其DNA合成,对第3代DPC无明显作用。结论:HSPC016基因在大肠杆菌中得到了高效表达;HSPC016重组蛋白具有促进高传代DPC增殖的作用。 展开更多
关键词 hspc016重组蛋白 细胞记数 生物学活性
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Cloning and bioinformatic analysis of HSPC016 gene in dermal papilla cells
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作者 王继文 宋志强 +1 位作者 邓永键 郝飞 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2006年第1期7-12,共6页
Objective: To clone the full-length cDNA sequence of HSPC016 gene, an aggregative growth related gene in dermal papilla cells (DPC), and analyze its characteristics and predict its biological function. Methods: Ra... Objective: To clone the full-length cDNA sequence of HSPC016 gene, an aggregative growth related gene in dermal papilla cells (DPC), and analyze its characteristics and predict its biological function. Methods: Rapid amplification of cDNA ends (RACE) technology was entailed to amplify the 5' and 3' sequences of HSPC016. The amplified fragments were TA-cloned, sequenced and spliced together to obtain the full-length cDNA. Its chromosome localization, domain and possible function were analyzed by bioinformatic methods. Results.. Two isoforms, 400 bp and 493 bp, were obtained. The gene was mapped on chromosome 3q21. 31, and was conservative on evolution. HSPC016, a 64aa protein, belongs to PD053992 protein family and its functional domain was homologous to T2FA gene. Conclusion: PISPC016 may be related to transcriptional regulation and its protein product may act as a subunit of a transcriptional complex and play a role on DPC growth and differentiation through facilitating or suppressing other genes' transcription within the nucleus. 展开更多
关键词 dermal papilla cells hspc016 transcriptional regulation
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用酵母双杂交技术筛选与HSPC016相互作用的蛋白
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作者 宋志强 孙丽华 郝飞 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期44-46,共3页
目的 采用酵母双杂交技术筛选毛乳头细胞中与造血干细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)分化相关基因HSPC016相互作用的蛋白,了解其参与调控毛乳头细胞凝集性生长的分子机制.方法 应用酵母双杂交系统,将构建的pGBKT7-HSPC... 目的 采用酵母双杂交技术筛选毛乳头细胞中与造血干细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)分化相关基因HSPC016相互作用的蛋白,了解其参与调控毛乳头细胞凝集性生长的分子机制.方法 应用酵母双杂交系统,将构建的pGBKT7-HSPC016诱饵质粒与含原代人毛乳头细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,筛选与HSPC016相互作用的蛋白,通过回复性杂交试验验证其可靠性,并对阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 筛选出4个与HSPC016有相互作用的蛋白,包括转录因子叉头框蛋白O1(forkhead box O1,FOXO1)、丝裂原活化蛋白激酶11、磷酸次黄苷酸激酶3调节亚单位3(PIK3R3)、肝X受体,它们均与细胞内能量代谢、转录调节相关.结论 HSPC016可能通过参与细胞内活性氧水平调节,并与细胞内参与能量和转录调节的相关信号分子相互作用,调节毛乳头细胞的凝集性生长状态. 展开更多
关键词 毛乳头细胞 hspc016 双杂交系统技术 细胞集合
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毛乳头细胞凝聚性生长差异表达基因的筛选及HSPC016全长克隆的生物信息学分析 被引量:3
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作者 王继文 宋志强 +2 位作者 杨希川 麦跃 郝飞 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第18期1513-1517,共5页
目的 筛选与毛乳头细胞 (DPC)凝聚性生长相关的基因表达 ,全长克隆凝聚性生长相关基因HSPC0 16并进行生物信息学分析。方法 应用抑制性消减杂交技术 ,构建DPC凝聚性生长与非凝聚性生长的cDNA消减文库 ,克隆鉴定凝聚性生长特异表达基... 目的 筛选与毛乳头细胞 (DPC)凝聚性生长相关的基因表达 ,全长克隆凝聚性生长相关基因HSPC0 16并进行生物信息学分析。方法 应用抑制性消减杂交技术 ,构建DPC凝聚性生长与非凝聚性生长的cDNA消减文库 ,克隆鉴定凝聚性生长特异表达基因。应用RACE技术 ,克隆DPC凝聚性状态下HSPC0 16全长表达序列 ,使用生物信息学手段分析其染色体定位、蛋白序列、结构域及功能。结果 成功构建了DPC凝聚性生长差异表达cDNA文库 ,筛选出DPC与细胞同源凝集、生长调控、分化发育及信号转导相关的基因 ,其中包括HSPC0 16。HSPC0 16全长cDNA为 4 0 0bp ,染色体定位于 3q2 1 31;HSPC0 16蛋白为 6 4aa,结构域属于PD0 5 3992家族 ,与T2FA基因功能域同源。结论DPC凝聚性生长的差异表达cDNA文库为进一步筛选并克隆DPC凝聚性生长相关基因奠定了基础 ,也为宏观分析多基因协同参与DPC生长调控和功能发挥提供了依据。HSPC0 展开更多
关键词 HSPC 生物信息学分析 毛乳头细胞 克隆 基因 筛选 表达 生长差异 DPC 染色体定位
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