目的重组表达棘阿米巴热休克蛋白20(Heat shock protein 20,HSP20),并对HSP20作为疫苗候选分子的免疫活性进行验证。方法以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,PCR扩增HSP20基因,构建pET-22b-HSP20原核表达载体,并将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21...目的重组表达棘阿米巴热休克蛋白20(Heat shock protein 20,HSP20),并对HSP20作为疫苗候选分子的免疫活性进行验证。方法以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,PCR扩增HSP20基因,构建pET-22b-HSP20原核表达载体,并将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21;采用1mmol/L IPTG诱导重组HSP20蛋白(Recombinant heat shock protein 20,rHSP20)表达,并进行可溶性分析。采用His亲和层析法纯化r-HSP20,并免疫家兔制备兔多克隆抗体;采用ELISA试剂盒检测多克隆抗体IgG1及IgG2a分型;Western blot鉴定r-HSP20的免疫反应性。结果经PCR扩增得到579bp的目的基因片段,与预期大小一致;经菌落PCR及双酶切证明成功构建pET22b-HSP20原核表达载体;经可溶性分析r-HSP20主要存在于重组菌超声破碎上清中;经SDS-PAGE鉴定柱层析300mmol/L咪唑洗脱的蛋白为高纯度r-HSP20;用该蛋白免疫获得的兔多克隆抗体效价为1∶12800,其抗体亚型IgG1及IgG2a含量分别为183.8mg/ml和21.4mg/ml;Western blot鉴定r-HSP20能被兔多克隆抗体识别。结论成功构建pET-22b-HSP20原核表达载体,获得高纯度r-HSP20蛋白。抗体分型检测证明r-HSP20具有高效诱导体液免疫应答和细胞免疫应答的免疫原性,并具有良好的免疫反应性。展开更多
Hsp20 (heat shock protein 20)基因家族在植物生长发育和胁迫响应中发挥着重要的作用。为探究大麻(Cannabis sativa L.) Hsp20 (CsHsp20)基因的功能,本研究在全基因组和转录组水平上采用生物信息学手段对CsHsp20基因家族进行系统性研...Hsp20 (heat shock protein 20)基因家族在植物生长发育和胁迫响应中发挥着重要的作用。为探究大麻(Cannabis sativa L.) Hsp20 (CsHsp20)基因的功能,本研究在全基因组和转录组水平上采用生物信息学手段对CsHsp20基因家族进行系统性研究。结果表明,在大麻中鉴定到35个CsHsp20基因家族成员(CsHsp20-1~CsHsp20-35),分布在9条染色体上,属于10个亚家族,同一亚家族成员之间蛋白基序分布相似。多种激素和胁迫响应顺式作用元件存在于CsHsp20基因的启动子区,表明其可参与植物的生长发育和多种胁迫响应。蛋白互作分析表明CsHsp20蛋白与Hsp家族其他成员之间存在互作关系且受转录因子Hop和HSFA2的调控。转录组数据表明在大麻的不同组织器官及不同发育时期中CsHsp20基因家族成员表达水平存在差异,主要在火麻仁及其成熟期高表达,表明CsHsp20家族成员可调控火麻仁的生长发育。本研究为CsHsp20基因家族功能研究和火麻仁基原植物的定向培育奠定了基础。展开更多
热激蛋白20(heat shock protein 20,Hsp20)是植物响应非生物胁迫时广泛合成的一类功能蛋白质,参与植物的抗逆过程。借助拟南芥基因组数据库,利用生物信息学方法分析Hsp20基因家族。HMMER搜索和蛋白质的理化性质分析表明,拟南芥至少含有3...热激蛋白20(heat shock protein 20,Hsp20)是植物响应非生物胁迫时广泛合成的一类功能蛋白质,参与植物的抗逆过程。借助拟南芥基因组数据库,利用生物信息学方法分析Hsp20基因家族。HMMER搜索和蛋白质的理化性质分析表明,拟南芥至少含有30个Hsp20基因,其编码蛋白的分子质量为14.6~41.4 kD,且均含有α-晶状体蛋白结构域。系统发育分析表明,在30个拟南芥Hsp20成员中,22个归属于12个不同的亚家族,其余8个归于未知分类,可能为Hsp20类蛋白质(Hsp20-like)。共线性分析表明,片段复制与串联复制是Hsp20成员的主要扩增事件,大部分Hsp20不含或只含1个内含子。MEME分析结果表明,基序1、2、9是Hsp20共有的保守基序。转录组分析提示,15个Hsp20的表达水平在干旱和(或)盐胁迫后出现了上调,该结果得到了qRT-PCR实验的验证。以上结果为人们进一步探究Hsp20基因的生物学功能提供了理论依据。展开更多
文摘Hsp20 (heat shock protein 20)基因家族在植物生长发育和胁迫响应中发挥着重要的作用。为探究大麻(Cannabis sativa L.) Hsp20 (CsHsp20)基因的功能,本研究在全基因组和转录组水平上采用生物信息学手段对CsHsp20基因家族进行系统性研究。结果表明,在大麻中鉴定到35个CsHsp20基因家族成员(CsHsp20-1~CsHsp20-35),分布在9条染色体上,属于10个亚家族,同一亚家族成员之间蛋白基序分布相似。多种激素和胁迫响应顺式作用元件存在于CsHsp20基因的启动子区,表明其可参与植物的生长发育和多种胁迫响应。蛋白互作分析表明CsHsp20蛋白与Hsp家族其他成员之间存在互作关系且受转录因子Hop和HSFA2的调控。转录组数据表明在大麻的不同组织器官及不同发育时期中CsHsp20基因家族成员表达水平存在差异,主要在火麻仁及其成熟期高表达,表明CsHsp20家族成员可调控火麻仁的生长发育。本研究为CsHsp20基因家族功能研究和火麻仁基原植物的定向培育奠定了基础。
文摘热激蛋白20(heat shock protein 20,Hsp20)是植物响应非生物胁迫时广泛合成的一类功能蛋白质,参与植物的抗逆过程。借助拟南芥基因组数据库,利用生物信息学方法分析Hsp20基因家族。HMMER搜索和蛋白质的理化性质分析表明,拟南芥至少含有30个Hsp20基因,其编码蛋白的分子质量为14.6~41.4 kD,且均含有α-晶状体蛋白结构域。系统发育分析表明,在30个拟南芥Hsp20成员中,22个归属于12个不同的亚家族,其余8个归于未知分类,可能为Hsp20类蛋白质(Hsp20-like)。共线性分析表明,片段复制与串联复制是Hsp20成员的主要扩增事件,大部分Hsp20不含或只含1个内含子。MEME分析结果表明,基序1、2、9是Hsp20共有的保守基序。转录组分析提示,15个Hsp20的表达水平在干旱和(或)盐胁迫后出现了上调,该结果得到了qRT-PCR实验的验证。以上结果为人们进一步探究Hsp20基因的生物学功能提供了理论依据。
