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过表达低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞增殖、炎症反应及血管生成的影响 被引量：19
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作者 蔡晖 石华宗 杨豫湘 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第1期32-35,共4页
目的检测过表达低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HREC)增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法将体外培养HREC转染人工合成的pEGF... 目的检测过表达低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HREC)增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法将体外培养HREC转染人工合成的pEGFP-HIF-1α重组载体,并采用荧光定量PCR检测转染前后HREC中HIF-1α的表达变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot分别检测过表达HIF-1α对HREC增殖、炎症反应及血管生成的影响。结果体外转染pEGFP-HIF-1α可显著增加HREC中HIF-1αmRNA和蛋白表达。过表达HIF-1α可显著促进HREC增殖,HREC转染p EGFP-HIF-1α后24 h、48 h及72 h A值分别为:0. 34±0. 04、0. 57±0. 04、0. 83±0. 05,而HREC转染pEGFP-C1后24 h、48 h及72 h A值分别为:0. 26±0. 03、0. 44±0. 04、0. 61±0. 04,两者相比差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β及IL-6的蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(2. 63±0. 57) ng·L^(-1)、(1. 94±0. 41) ng·L^(-1)、(5. 32±0. 83) ng·L^(-1),而转染p EGFP-C1后HREC中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(1. 20±0. 34) ng·L^(-1)、(0. 66±0. 27) ng·L^(-1)、(1. 89±0. 60) ng·L^(-1),两者相比差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达,转染p EGFP-HIF-1α后细胞VEGF蛋白的表达为6. 72±0. 96,而转染p EGFP-C1后细胞VEGF蛋白的表达为2. 31±0. 47,两者相比差异有统计学意义(P <0. 05)。结论过表达HIF-1α可促进体外培养HREC增殖、炎症反应及血管的生成。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1Α 过表达 人视网膜血管内皮细胞 增殖 炎症反应 血管内皮生长因子
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低氧诱导人视网膜微血管内皮细胞核中乙酰肝素酶对血管内皮生长因子基因转录调控研究 被引量：2
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作者 王敬伟 胡洁 +3 位作者 宋新 冷炫 田景毅 吕林 《中国实用眼科杂志》 CSCD 北大核心 2013年第9期1195-1199,共5页
目的通过观察低氧诱导人视网膜血管内皮细胞（HRECs）胞核中乙酰肝素酶（HPA）和RNA聚合酶II（Pol Ⅱ）的表达分布、两者相互结合及其与血管内皮生长因子（VEGF）基因启动子的作用，探讨在低氧诱导视网膜新生血管形成中HPA对VEGF基因转... 目的通过观察低氧诱导人视网膜血管内皮细胞（HRECs）胞核中乙酰肝素酶（HPA）和RNA聚合酶II（Pol Ⅱ）的表达分布、两者相互结合及其与血管内皮生长因子（VEGF）基因启动子的作用，探讨在低氧诱导视网膜新生血管形成中HPA对VEGF基因转录调控的作用。方法用低氧模型模拟剂Cocl2建立低氧模型（含Cocl2100μmol／L的培养液培养48h）。免疫荧光染色法观察HPA与PolⅡ的表达；免疫沉淀法半定量分析HPA及PolⅡ的相互结合作用；染色质免疫沉淀（ChIP）联合实时定量PCR分析两组细胞中HPA与VEGF基因启动子之间的相互作用。结果（1）免疫荧光染色结果显示低氧诱导组HRECs胞核内HPA荧光和PolII荧光均较正常对照组增强，且低氧诱导组胞核内HPA分布与PolⅡ相吻合。（2）免疫沉淀结果表明在低氧诱导HRECs中HPA及PolⅡ相互结合共同作用，而对照组中HPA及PolⅡ则无结合。（3）ChIP联合实时定量PCR实验结果显示HPA及PolⅡ与VEGF启动子结合的高发生区段主要位于VEGF启动子序列-1165与-984之间，低氧诱导HRECs细胞核内HPA及PolII结合VEGF基因启动子水平均较正常组升高（t=-13．591，P=0．001；t=-3．188，P=0．049）。结论在低氧诱导的HRECs中，核内HPA与VEGF基因启动子直接结合，并参与了VEGF基因转录活性的调控。 展开更多
关键词 人视网膜血管内皮细胞（Human retinal MICROVASCULAR ENDOTHELIAL cells hrecs） 乙酰肝素酶（Heparanase HPA） 血管内皮生长因子（Vascular ENDOTHELIAL growth factor VEGF） 染色质免疫沉淀法（Chromatin IMMUNOPRECIPITATION ChIP）
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