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题名白念珠菌HOF1基因高表达菌株的构建及其功能鉴定
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作者
姚双燕
冯金荣
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机构
南通大学医学院病原生物学系
江苏省南通卫生高等职业技术学校医学技术系
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出处
《南通大学学报（医学版）》
2020年第5期401-405,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(82072261)。
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文摘
目的:构建白念珠菌HOF1基因高表达菌株,探索HOF1基因高表达对细胞应答遗传毒性试剂胁迫和调控形态发生的作用。方法:采用瞬时CRISPR/Cas9系统,分别于体外扩增Cas9基因、单链向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)以及带MET3启动子的修复DNA(repair DNA)片段,转化白念珠菌野生型菌株SN148,于SD-Ura-Met-Cys选择培养基筛选转化子,通过菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证基因型,以构建HOF1基因高表达菌株;利用平板表型实验检测HOF1高表达对遗传毒性试剂胁迫的表型,通过4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色结合荧光显微镜等观察细胞形态。结果:PCR检测发现HOF1基因自身启动子被MET3启动子成功替换后,通过检测引物能扩增出约3.2 kb的单一条带;HOF1基因高表达导致细胞对遗传毒性试剂甲基磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS)和羟基脲(hydroxyurea,HU)敏感,并促进细胞分裂,表现为出芽细胞比例减少。结论:利用CRISPR/Cas9系统快速构建了白念珠菌HOF1纯合子高表达菌株,发现HOF1参与细胞的DNA损伤应答和形态调控。
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关键词
白念珠菌
CRISPR/Cas9
hof1基因
高表达
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Keywords
Candida albicans
CRISPR/Cas9
hof1 gene
over-expression
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分类号
R949.32
[医药卫生—药剂学]
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