海产品中副溶血弧菌的LAMP-HNB快速检测技术 被引量：6

1

作者 纪懿芳 胡文忠 +1 位作者 姜爱丽 冯可 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期142-148,共7页

采用环介导等温扩增（loop—mediated isothermal amplification，LAMP）并结合指示剂-羟基萘酚蓝（hydroxy naphthol blue，HNB）的应用，即LAMP—HNB快速检测海产品中副溶血弧菌的新方法进行了研究。首先，针对副溶血弧菌￡胁基因设... 采用环介导等温扩增（loop—mediated isothermal amplification，LAMP）并结合指示剂-羟基萘酚蓝（hydroxy naphthol blue，HNB）的应用，即LAMP—HNB快速检测海产品中副溶血弧菌的新方法进行了研究。首先，针对副溶血弧菌￡胁基因设计特异性引物，并在反应体系中加入1μL HNB（反应浓度150μmol／L）作为反应指示剂，根据反应体系颜色变化判断反应结果，并同时将产物进行凝胶电泳验证结果，通过PCR平行实验对比，实证LAMP—HNB法的反应灵敏度和特异性。结果表明，LAMP-HNB新法与PCR方法的特异性没有差异，但是，LAMP—HNB新法的灵敏度是PCR的10～100倍。经海产品实际检测验证，LAMP—HNB新法与PCR法和国标法的检测结果一致。因此，LAMP—HNB新法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点，更适用于海产品处理现场的检测。 展开更多

关键词 海产品 副溶血弧菌 LAMP—hnb 快速检测

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一步法RT-LAMP-HNB检测兰花建兰花叶病毒和齿舌兰环斑病毒方法的建立 被引量：4

2

作者 徐匆 黄皓 +5 位作者 罗华建 杜见南 黄晓彦 陈彦 梁卫驱 胡珊 《广东农业科学》 CAS 2022年第5期95-101,共7页

【目的】全世界兰花病毒有50余种,建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿舌兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是其中最常见的两种病毒。目前仍没有有效的措施能够控制病毒病,因此建立针对病毒的高效监测、检测方... 【目的】全世界兰花病毒有50余种,建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿舌兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是其中最常见的两种病毒。目前仍没有有效的措施能够控制病毒病,因此建立针对病毒的高效监测、检测方法,对控制兰花病毒感染具有至关重要的意义。【方法】以兰花病毒CymMV和ORSV为试验材料,采用反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)进行病毒RNA的扩增,从而建立CymMV和ORSV的快速检测方法。分别根据两种病毒的cp基因序列保守区设计RT-LAMP引物,在一步法RT-LAMP反应体系中加入羟基萘酚蓝(HNB,终浓度200 μmol/L)作为扩增产物指示剂,不需开盖进行凝胶电泳检测,便可直接根据体系颜色变化判读反应结果。【结果】利用该检测方法能够在2 h测出样品中是否存在CymMV和ORSV病毒RNA,其灵敏度是RT-PCR的10倍。对20株田间样品进行一步法RT-LAMP-HNB检测,根据田间检测结果显示,CymMV检出率为70%,ORSV检出率为55%,与RT-PCR结果保持一致,该法适用于田间样品检测。【结论】建立的一步法RT-LAMP-HNB是一种灵敏、快速、特异、便捷的CymMV和ORSV检测方法,仅需要简单控温设备如水浴锅便可进行核酸扩增,适用于在基层或不便利地区推广使用。 展开更多

关键词 建兰花叶病毒 齿舌兰环斑病毒 反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP) 羟基萘酚蓝(hnb) CP基因

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Ag/HNb3O8纳米片的合成及其光催化性能

3

作者 李欣欣 李鑫月 +1 位作者 邓磊 杨新丽 《物理化学进展》 2023年第2期112-121,共10页

以商业NbCl5为铌源,通过水热法合成HNb3O8纳米片,然后分别采用光沉积和浸渍的方法制备了Ag/HNb3O8-pp (光沉积)和Ag/HNb3O8 (浸渍方法)光催化剂,对合成的两种催化剂进行了详细的表征,并研究其光催化析氢活性。XRD、FT-IR、SEM和TEM的表... 以商业NbCl5为铌源,通过水热法合成HNb3O8纳米片,然后分别采用光沉积和浸渍的方法制备了Ag/HNb3O8-pp (光沉积)和Ag/HNb3O8 (浸渍方法)光催化剂,对合成的两种催化剂进行了详细的表征,并研究其光催化析氢活性。XRD、FT-IR、SEM和TEM的表征结果说明我们成功合成了负载Ag的HNb3O8纳米片催化剂。UV-vis-NIR分析了各催化剂的能带结构。结果表明:由于Ag的引入,Ag/HNb3O8催化剂表现出了较强的LSPR效应,对可见光和近红外光的吸收得到了增强。光催化测试的结果与表征结果一致,浸渍方法制备的Ag/HNb3O8表现出了较强的析氢速率(889.7 μmol∙g−1∙h−1),是纯HNb3O8的31.3倍(28.4 μmol∙g−1∙h−1)。 展开更多

关键词 hnb3O8纳米片 AG 光催化 氢气

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一种分布式Femto用户侧多模HNB设备及其应用 被引量：3

4

作者 王传江 余刚 徐红波 《移动通信》 2017年第22期14-17,共4页

为了解决传统Femto用户侧HNB设备制式单一、容量低的问题,介绍了一款新型分布式Femto用户侧多模HNB设备,通过对该设备的系统组成、网络架构、优势对比和实际运用场景等方面进行分析,该设备采用扁平化和分布式架构,能够有效解决运营商共... 为了解决传统Femto用户侧HNB设备制式单一、容量低的问题,介绍了一款新型分布式Femto用户侧多模HNB设备,通过对该设备的系统组成、网络架构、优势对比和实际运用场景等方面进行分析,该设备采用扁平化和分布式架构,能够有效解决运营商共建共享的问题,并降低施工成本和难度。 展开更多

关键词 FEMTO 多模 hnb 扁平化 分布式 共建共享

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HNB技术研究与组网应用

5

作者 张奎 钱湘莹 《邮电设计技术》 2010年第9期34-38,共5页

简要介绍了HNB系统的主要功能实体及其作用,较详细地阐述了在部署HNB系统过程中需要注意和了解的有关问题,结合设备特点及移动运营商现有网络及管理架构,对HNB系统的商用组网提出了平台部署的建议方案并进行了相关比较。

关键词 家庭基站 家庭基站网关 安全网关 家庭基站管理系统 网元管理系统

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虾类十足目虹彩病毒1(DIV1)LAMP-HNB快检方法的建立

6

作者 王雯琼 葛明峰 +4 位作者 卢先东 刘艳红 斯烈钢 申屠基康 徐胜威 《安徽农业科学》 CAS 2024年第15期192-196,共5页

[目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合... [目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合的LAMP-HNB可视化快速检测方法。[结果]在LAMP反应体系中添加12 mmol/L Mg^(2+)和250μmol/L HNB,65℃恒温条件下反应60 min最佳;DIV1病原质粒最低检出限为102 copies/μL,稳定性和特异性较好,通过带有靶标基因的阳性质粒进行16次重复性试验结果均较为稳定,多种模板扩增试验均未发生假阳性情况,符合试验要求。[结论]该研究建立的LAMP-HNB可视化快速检测方法,适用于上述对虾DIV1的现场快速检测。 展开更多

关键词 南美白对虾 LAMP hnb 十足目虹彩病毒1 快速检测

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油菜茎基溃疡病菌LAMP-HNB检测方法的建立 被引量：4

7

作者 龙阳 马新华 +4 位作者 袁俊杰 卢乃会 杨卓瑜 魏霜 王卫芳 《广东农业科学》 CAS 2017年第10期66-69,175,共5页

油菜茎基溃疡病菌是油菜上最严重的真菌病害之一,是我国重要的检疫性有害生物。因此为防范其危害我国油菜产业生产安全,建立油菜茎基溃疡病菌的快速筛查方法具有重要意义。基于环介导等温扩增法(LAMP),以ITS(内转录间隔区)为靶序列并结... 油菜茎基溃疡病菌是油菜上最严重的真菌病害之一,是我国重要的检疫性有害生物。因此为防范其危害我国油菜产业生产安全,建立油菜茎基溃疡病菌的快速筛查方法具有重要意义。基于环介导等温扩增法(LAMP),以ITS(内转录间隔区)为靶序列并结合指示剂羟基萘酚蓝(HNB)建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的油菜茎基溃疡病菌的快速检测方法,并对其特异性、灵敏性进行评价以及实际样品进行检测。结果显示,该方法在62℃等温条件下仅需80 min即可通过肉眼直接目测试验结果。LAMP-HNB法与标准PCR检测方法对比显示其具有良好的特异性以及更高的灵敏度,利用该方法对10批油菜籽样品进行检测,共检出5批阳性样品,与标准中PCR检测方法结果一致。该方法的建立为油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定提供了新途径。 展开更多

关键词 油菜 茎基溃疡病菌 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝 检疫

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FADV-4环介导等温扩增-HNB可视化检测方法的建立和应用 被引量：5

8

作者 姜朕元 赵艳 +6 位作者 王婷 张静 周海洋 李佳康 黄雪琳 黄勇 韩新锋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第24期65-69,76,175,共7页

为了建立简便、快速的FADV-4环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法,试验以FADV-4高度保守的基因序列hexon基因为靶基因设计了6条引物,对反应体系的Mg^2+浓度、Bst DNA聚合酶用量、反应温度、反应持续时间进行优化,考察了优化体系的灵敏... 为了建立简便、快速的FADV-4环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法,试验以FADV-4高度保守的基因序列hexon基因为靶基因设计了6条引物,对反应体系的Mg^2+浓度、Bst DNA聚合酶用量、反应温度、反应持续时间进行优化,考察了优化体系的灵敏度及特异性。同时用建立的FADV-4 LAMP及LAMP-HNB可视化的检测方法对临床模拟样品进行检测。结果表明:当Mg^2+浓度为6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为320 U/mL、反应温度为65℃、反应时间为60 min、HNB使用浓度为120μmol/L时反应最优。LAMP最低DNA检测浓度为1.46 pg/μL,灵敏度是PCR的100倍,临床模拟样品LAMP、LAMP-HNB检测结果与普通PCR检测结果完全符合。说明所建立的FADV-4 LAMP-HNB可视化检测方法适用于临床的快速诊断。 展开更多

关键词 Ⅰ群禽腺病毒血清4型 六邻体蛋白基因 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝 可视化 检测

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TG-FTIR联用研究HnB烟草基质在400℃以下的热解特性和气相产物 被引量：17

9

作者 艾明欢 杨菁 +1 位作者 沈轶 赵文涛 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期8-14,共7页

【目的】明确加热不燃烧(HnB)烟草基质热解特性和气相产物释放情况。【方法】采用热重-红外联用分析仪(TGFTIR),在100 mL/min的空气流量和20℃/min的升温速率条件下,测试了甘油含量0~30%的烟草基质的热失重、气态产物组成随温度(30℃~40... 【目的】明确加热不燃烧(HnB)烟草基质热解特性和气相产物释放情况。【方法】采用热重-红外联用分析仪(TGFTIR),在100 mL/min的空气流量和20℃/min的升温速率条件下,测试了甘油含量0~30%的烟草基质的热失重、气态产物组成随温度(30℃~400℃)的变化规律。【结果】①烟草基质主要的失重阶段处于130℃~360℃之间,该温度区间的失重速率极大值点有2个,1个处于200℃~235℃之间,另1个处于297℃~310℃之间。②烟草基质甘油含量在20%~30%时,150℃即释放出易挥发小分子,如:烟碱、碳水化合物、酚类和有机酸类、烷烃和烯烃类化合物等;甘油含量在0~10%时,200℃以上这些物质才会出现。③在4个失重阶段的失重速率极大值点附近温度下(100℃、200℃、300℃和400℃),甘油含量对受热释放物中各类成分的比例产生了影响。【结论】上述规律可以为加热不燃烧卷烟的温度设计和烟草基质的甘油含量选择提供参考。 展开更多

关键词 TG-FTIR 烟草基质 加热不燃烧烟草制品 受热释放物

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HNB—4型(B_(117)型)中变催化剂

10

作者 陈开泰 《氮肥技术》 1990年第1期51-54,共4页

我厂是1969年由化工部定点生产CO中温变换催化剂的厂家。近几年来,中变催化剂的发展速度很快。特别是全国第三次变换使用技术交流会推广了低温型变换催化剂,使合成氨工业取得了明显的节能降耗的效果。1982年在化工部化肥工业研究所的帮... 我厂是1969年由化工部定点生产CO中温变换催化剂的厂家。近几年来,中变催化剂的发展速度很快。特别是全国第三次变换使用技术交流会推广了低温型变换催化剂,使合成氨工业取得了明显的节能降耗的效果。1982年在化工部化肥工业研究所的帮助下, 展开更多

关键词 催化剂生产 hnb 中温变换催化剂 低温活性 型变换 合成氨工业 化肥工业 助催化作用 催化剂性能 变换反应

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一种改进隐朴素贝叶斯算法的研究 被引量：9

11

作者 李晶辉 张小刚 +1 位作者 陈华 胡义函 《小型微型计算机系统》 CSCD 北大核心 2013年第7期1654-1658,共5页

朴素贝叶斯分类器(NB)由于结构简单,计算高效而被广泛应用,但它不能充分利用属性间的依赖关系,有一定的局限性.因此,隐朴素贝叶斯分类器(HNB)通过为每个属性引入一个隐藏父节点,将各个属性之间的依赖关系都综合其中,使属性间的依赖关系... 朴素贝叶斯分类器(NB)由于结构简单,计算高效而被广泛应用,但它不能充分利用属性间的依赖关系,有一定的局限性.因此,隐朴素贝叶斯分类器(HNB)通过为每个属性引入一个隐藏父节点,将各个属性之间的依赖关系都综合其中,使属性间的依赖关系得到了利用.但隐朴素贝叶斯分类器忽略了属性对与该属性的依赖关系,故在此基础上提出一种改进算法--双隐朴素贝叶斯算法(DHNB),使属性对与该属性的依赖关系得到了充分的利用,并提出一种新型的阈值定义法,使得选取的阈值让分类精度与时间复杂度的比值为最大,缓解了算法时间复杂度和分类精度之间的矛盾.然后将改进的算法在UCI数据集上进行仿真试验,结果表明其分类性能优于HNB和NB,该方法具有较好的适用性. 展开更多

关键词 朴素贝叶斯(NB) 隐朴素贝叶斯(hnb) 双隐朴素贝叶斯(Dhnb) 阈值 分类精度

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基于环介导等温扩增技术检测橡树疫霉菌 被引量：21

12

作者 戴婷婷 陆辰晨 +2 位作者 沈浩 王源超 郑小波 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期23-28,共6页

应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌(Phytophthora ramorum)检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉菌的分子检测存在无法区分近似种的问题,笔者... 应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌(Phytophthora ramorum)检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉菌的分子检测存在无法区分近似种的问题,笔者在橡树疫霉菌的基因组研究中,发现了PrA3aPro类转座子序列。生物信息学分析表明,该序列非常适合作为大豆疫霉分子检测的靶标。利用LAMP技术,以PrA3aPro为靶序列,设计LAMP特异性引物,建立LAMP反应体系与条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明:整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,然后经3种方法验证扩增结果:1)浊度仪验证浊度变化;2)琼脂糖凝胶电泳验证;3)在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定。特异性试验中,在橡树疫霉菌株中能够产生浊度曲线,扩增到梯形条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而在其他疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象。在灵敏度试验中,PrA3aPro-LAMP技术最低检测限为1 ng.μL-1。该方法的建立为橡树疫霉菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。 展开更多

关键词 橡树疫霉菌 环介导等温扩增 PrA3aPro 羟基萘酚蓝(hnb)

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大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增可视化检测方法的建立 被引量：10

13

作者 吕恒 张锦海 +4 位作者 陈凤娟 谭维国 顾海涛 王平 王长军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第4期289-292,309,共5页

目的建立肠出血性大肠埃希菌O157︰H7环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。方法针对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157︰H7编码脂多糖rfbE基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,结合L... 目的建立肠出血性大肠埃希菌O157︰H7环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。方法针对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157︰H7编码脂多糖rfbE基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,评价LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP法对O157︰H7rfbE基因的最低检出限约为100copy/反应管,检测肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均为阴性。体系的扩增效率较高,可在40min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157︰H7LAMP检测方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,适用于EHEC O157︰H7的快速检测。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157 H7 可视化检测 环介导等温扩增(LAMP) 羟基萘酚蓝(hnb)

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环介导等温扩增技术(LAMP)检测人星状病毒方法的建立及其在再生水检测中的应用 被引量：6

14

作者 杨丽 何晓青 +4 位作者 韦玉梅 朱轶 程莉 王子健 黄文 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2011年第6期600-606,共7页

为快速高效地检测人星状病毒,建立了一种新的试验方法——环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification technology,LAMP),并对人星状病毒LAMP反应条件进行了优化。结果表明,镁离子终浓度为4mmol·L-1、甜菜碱终浓度... 为快速高效地检测人星状病毒,建立了一种新的试验方法——环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification technology,LAMP),并对人星状病毒LAMP反应条件进行了优化。结果表明,镁离子终浓度为4mmol·L-1、甜菜碱终浓度为1mol·L-1的25μL体系下65℃反应90min为其最佳反应条件。对扩增终产物进一步进行酶切分析得到的条带大小与预期的结果(84和135bp)吻合,以人星状病毒、轮状病毒及诺如病毒为模板进行特异性测试亦没有发生交叉反应。将人星状病毒质粒等倍稀释后分别用LAMP及聚合酶链式反应(PCR)检测其灵敏度,结果表明,LAMP与PCR的灵敏度分别达到5.04copies·μL-1和50.4copies·μL-1。用改良的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)及逆转录PCR(RT-PCR)检测12个再生水水样,其中人星状病毒检出率为分别为41.7%(5/12)和33.3%(4/12)。以上结果证明,LAMP是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的检测手段,在人星状病毒的快速检测方面具有一定的开发潜力。 展开更多

关键词 人星状病毒 环介导等温扩增技术(LAMP) hnb 焦磷酸镁 再生水

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利用环介导等温扩增技术检测黑白轮枝菌 被引量：6

15

作者 田擎 曾丹丹 +3 位作者 李彬 张海峰 王源超 郑小波 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期582-588,共7页

[目的]黑白轮枝菌(Verticillium albo-atrum)能够危害苜蓿等多种作物,是我国重要的检疫性病原真菌。我们基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立基于颜色判定的简单、快速和灵敏的黑白轮枝菌检测方... [目的]黑白轮枝菌(Verticillium albo-atrum)能够危害苜蓿等多种作物,是我国重要的检疫性病原真菌。我们基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立基于颜色判定的简单、快速和灵敏的黑白轮枝菌检测方法。[方法]基于LAMP技术,通过比对分析黑白轮枝菌与其相似种不同靶标序列间的差异,选取Tub(β-tublin,编码β-微管蛋白)基因作为靶标基因,设计并筛选了4条特异性强、灵敏度高的LAMP引物和1条环引物,在此基础上建立了检测黑白轮枝菌的LAMP体系,并进行特异性、灵敏度试验及田间发病组织的检测。该方法在62℃等温条件下进行核酸扩增反应70 min,扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝),反应后根据染料颜色变化判定扩增结果。[结果]特异性试验中,仅黑白轮枝菌菌株DNA扩增后呈天蓝色的阳性反应,而在其他真菌的供试菌株中均呈紫色的阴性反应。该方法的最低检测限为1 pg·μL^(-1)。Tub-LAMP技术能够检测出发病苜蓿植物组织中的目标菌,在采自新疆的7份疑似样本中检测到3份阳性。在土壤中人工添加孢子的试验中,Tub-LAMP技术能够从每0.25 g土壤含有10个孢子和每10 g苜蓿种子含有50个孢子中检测出该病菌。[结论]该方法的建立为黑白轮枝菌的检疫及其所致病害的诊断提供了新的技术。 展开更多

关键词 黑白轮枝菌 环介导等温扩增 Tub基因 羟基萘酚蓝(hnb)

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环介导等温扩增技术检测大丽轮枝菌 被引量：6

16

作者 田擎 张海峰 +4 位作者 曾丹丹 姚艳 任林荣 王源超 郑小波 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期721-729,共9页

本研究基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),通过比对分析大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)与其相近种不同靶标序列间的差异,选取G pd(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,甘油醛-3-磷酸脱氢... 本研究基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),通过比对分析大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)与其相近种不同靶标序列间的差异,选取G pd(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因作为靶标基因,设计并筛选了四条特异性强、灵敏度高的LAMP引物和两条环引物,建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的大丽轮枝菌的检测方法,并进行了特异性、灵敏度实验及田间发病组织的检测。该方法在62℃等温条件下进行核酸扩增反应70 min,扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝),反应后根据染料颜色变化判定扩增结果。特异性试验中,仅含有大丽轮枝菌菌株DNA的反应管扩增后呈天蓝色的阳性反应,而其他供试菌株均呈紫色的阴性反应。该方法的最低检测限为100 pg·μL^(-1),在土壤中检测的灵敏度为10个孢子/0.25g土壤。该技术能够检测出棉花发病组织中的目标菌,对采自江苏和山东的24份疑似病害样本进行检测,11份为阳性。该方法的建立为大丽轮枝菌的检测及其所致病害的诊断提供了新的技术。 展开更多

关键词 大丽轮枝菌 环介导等温扩增 G硼 羟基萘酚蓝(hnb)

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新型布尼亚病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立 被引量：6

17

作者 吕恒 钟璟浩 +2 位作者 张锦海 王平 王长军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第3期225-228,共4页

目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立新型布尼亚病毒(SFTSV)可视化快速检测方法。方法针对新型布尼亚病毒的S片段基因设计LAMP引物建立LAMP方法。反应体系内加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应扩增指示剂,根据LAMP浊度仪扩增结果优化反... 目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立新型布尼亚病毒(SFTSV)可视化快速检测方法。方法针对新型布尼亚病毒的S片段基因设计LAMP引物建立LAMP方法。反应体系内加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应扩增指示剂,根据LAMP浊度仪扩增结果优化反应条件,根据HNB颜色变化进行结果判定,评估LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP方法最低检出限为10拷贝/反应管;方法的特异性高,仅SFTSV反应管颜色由紫罗兰变为天蓝色,而汉坦病毒、新疆出血热、Q热、马尔堡、埃博拉病毒及阴性对照反应管均未发生变色反应;LAMP反应的最佳温度为63℃,其扩增效率高于常规PCR,试验过程仅需30min。结论建立的可视化SFTSV LAMP检测方法具有特异性强,灵敏性高,实验设备要求简单等优点,可用于SFTSV的快速检测。 展开更多

关键词 新型布尼亚病毒(SFTSV) 可视化检测 环介导等温扩增(LAMP) 羟基萘酚蓝(hnb)

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溪蟹卫氏并殖吸虫环介导等温扩增检测方法的建立

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作者 杨荣笙 刘道华 +4 位作者 汪奇志 金郁 杨少萌 汪天平 操治国 《中国热带医学》 北大核心 2025年第5期552-556,共5页

目的建立一种快速、灵敏和高效的溪蟹体内卫氏并殖吸虫囊蚴环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为并殖吸虫的现场快速检测提供有力工具。方法2022年9月至2023年12月,在卫氏并殖吸虫流行区安徽省休宁... 目的建立一种快速、灵敏和高效的溪蟹体内卫氏并殖吸虫囊蚴环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为并殖吸虫的现场快速检测提供有力工具。方法2022年9月至2023年12月,在卫氏并殖吸虫流行区安徽省休宁县采集溪蟹,以卫氏并殖吸虫核糖体DNA第二内部转录间隔区(second internal transcribed spacer,ITS2)基因序列为靶序列设计LAMP特异性引物,并选择一种新型显色剂羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue solution,HNB)与传统显色剂钙黄绿素比较,建立溪蟹卫氏并殖吸虫囊蚴LAMP检测方法;同时与PCR法比较,评价该方法的特异度、灵敏度和现场应用效果。结果建立LAMP反应体系可特异性扩增卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫DNA,最低可测出1个卫氏并殖吸虫囊蚴,与日本血吸虫、弓形虫、华支睾吸虫、十二指肠钩虫及美洲钩虫无交叉反应。HNB显色剂法与其LAMP实时浊度仪法的最低核酸浓度检出限为1.92×10^(-13) g,而钙黄绿素显色剂法及其LAMP实时浊度仪法以及PCR法为1.92×10^(-12) g。采用沉淀镜检法、LAMP法(HNB、钙黄绿素)和PCR法同时检测现场捕获的40只溪蟹,沉淀镜检法检出阳性率为22.5%(9/40),LAMP法和PCR法检出阳性率均为27.5%(11/40)。其中,有2份镜检阴性样品采用LAMP法和PCR法检测均为阳性,3种方法检测结果差异无统计学意义(χ^(2)=0.348,P>0.05)。HNB与钙黄绿素的一致性检验Kappa值为1。结论本研究成功建立一种溪蟹卫氏并殖吸虫LAMP检测方法,为流行区淡水蟹并殖吸虫病监测工作提供了简易高效的分子学检测手段。 展开更多

关键词 并殖吸虫 并殖吸虫囊蚴 溪蟹 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝

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