高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)持续感染是诱发宫颈癌的,但其载量与相关分子机制及宫颈癌病变的关系尚未明确。Hipp0-YAP信号通路的关键分子为Hipp0-Yes相关蛋白1(YAP1),其表达异常可导致Hipp0-YAP调节异常...高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)持续感染是诱发宫颈癌的,但其载量与相关分子机制及宫颈癌病变的关系尚未明确。Hipp0-YAP信号通路的关键分子为Hipp0-Yes相关蛋白1(YAP1),其表达异常可导致Hipp0-YAP调节异常,诱导肿瘤形成。为阐明HR-HPV感染在Hipp0-YAP通路调节及宫颈癌发病中的作用,本研究分析了HR-HPV载量与Hipp0-YAP通路及宫颈癌病变的关系。首先检测宫颈癌患者、宫颈上皮内瘤变(CIN)患者及子宫良性病变患者HR-HPV感染及YAP1表达情况,分析HR-HPV载量与YAP1的关系、HRHPV感染和YAP1阳性与CIN分级和宫颈癌患者临床特征的关系;然后以CIN及宫颈癌患者中HR-HPV阴性表达为参照,采用单因素Logistic模型分别分析HR-HPV感染与宫颈癌病变的关系及HR-HPV载量与宫颈癌病变的关系。结果显示,宫颈癌组、CIN组HR-HPV感染率及YAP1阳性率均高于对照组,宫颈癌组HR-HPV感染率及YAP1阳性率高于CIN组(P<0.05),CINⅢ期及CINⅡ期患者HR-HPV感染率、YAP1阳性率均高于CINⅠ期患者(P<0.05),且宫颈癌患者HR-HPV感染率与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移有关,YAP1表达情况与FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05);HR-HPV载量与YAP1表达呈正相关(P<0.05);HR-HPV单一感染和多重感染均可增加CIN患病风险,且多重感染可增加宫颈癌风险;中、高HR-HPV载量可增加宫颈癌患病风险,低、中、高HRHPV载量均可增加CIN患病风险。以上结果表明,HR-HPV载量与YAP1表达呈正相关,高HR-HPV载量可增加宫颈癌病变风险。展开更多
目的设计并验证能够高效切割Hipp11位点的sgRNA,为在Hipp11位点定点敲入外源基因提供工作基础。方法使用预测软件对Hipp11位点的sgRNA进行预测并挑选脱靶效应较低的两个sgRNA。构建相应载体,通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒在体外检测sg...目的设计并验证能够高效切割Hipp11位点的sgRNA,为在Hipp11位点定点敲入外源基因提供工作基础。方法使用预测软件对Hipp11位点的sgRNA进行预测并挑选脱靶效应较低的两个sgRNA。构建相应载体,通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒在体外检测sgRNA的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9 m RNA一并注射受精卵。检测出生后小鼠Hipp11位点切割效率,计算出sgRNA的体内活性。结果两个sgRNA的体外活性分别为19.2%和51.7%,使用体外活性高的2号sgRNA显微注射获得8只新生小鼠,其中62.5%(5/8)的小鼠中检测到Hipp11位点周围发生碱基插入或缺失。结论获得一个能够引导高效切割的Hipp11位点通用型sgRNA,从而为基因CRISPR技术在Hipp11位点定点插入外源基因奠定基础。sgRNA体外活性能够预测sgRNA在体内的切割活性,表明体外活性验证是筛选高活性sgRNA的有效手段。展开更多
文摘高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)持续感染是诱发宫颈癌的,但其载量与相关分子机制及宫颈癌病变的关系尚未明确。Hipp0-YAP信号通路的关键分子为Hipp0-Yes相关蛋白1(YAP1),其表达异常可导致Hipp0-YAP调节异常,诱导肿瘤形成。为阐明HR-HPV感染在Hipp0-YAP通路调节及宫颈癌发病中的作用,本研究分析了HR-HPV载量与Hipp0-YAP通路及宫颈癌病变的关系。首先检测宫颈癌患者、宫颈上皮内瘤变(CIN)患者及子宫良性病变患者HR-HPV感染及YAP1表达情况,分析HR-HPV载量与YAP1的关系、HRHPV感染和YAP1阳性与CIN分级和宫颈癌患者临床特征的关系;然后以CIN及宫颈癌患者中HR-HPV阴性表达为参照,采用单因素Logistic模型分别分析HR-HPV感染与宫颈癌病变的关系及HR-HPV载量与宫颈癌病变的关系。结果显示,宫颈癌组、CIN组HR-HPV感染率及YAP1阳性率均高于对照组,宫颈癌组HR-HPV感染率及YAP1阳性率高于CIN组(P<0.05),CINⅢ期及CINⅡ期患者HR-HPV感染率、YAP1阳性率均高于CINⅠ期患者(P<0.05),且宫颈癌患者HR-HPV感染率与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移有关,YAP1表达情况与FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05);HR-HPV载量与YAP1表达呈正相关(P<0.05);HR-HPV单一感染和多重感染均可增加CIN患病风险,且多重感染可增加宫颈癌风险;中、高HR-HPV载量可增加宫颈癌患病风险,低、中、高HRHPV载量均可增加CIN患病风险。以上结果表明,HR-HPV载量与YAP1表达呈正相关,高HR-HPV载量可增加宫颈癌病变风险。
文摘目的设计并验证能够高效切割Hipp11位点的sgRNA,为在Hipp11位点定点敲入外源基因提供工作基础。方法使用预测软件对Hipp11位点的sgRNA进行预测并挑选脱靶效应较低的两个sgRNA。构建相应载体,通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒在体外检测sgRNA的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9 m RNA一并注射受精卵。检测出生后小鼠Hipp11位点切割效率,计算出sgRNA的体内活性。结果两个sgRNA的体外活性分别为19.2%和51.7%,使用体外活性高的2号sgRNA显微注射获得8只新生小鼠,其中62.5%(5/8)的小鼠中检测到Hipp11位点周围发生碱基插入或缺失。结论获得一个能够引导高效切割的Hipp11位点通用型sgRNA,从而为基因CRISPR技术在Hipp11位点定点插入外源基因奠定基础。sgRNA体外活性能够预测sgRNA在体内的切割活性,表明体外活性验证是筛选高活性sgRNA的有效手段。
