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VIGS-HIGS技术协同沉默大丽轮枝菌CYP51基因对烟草抗病能力的影响
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作者 邹润 谢成建 《重庆师范大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期111-118,共8页
宿主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing, HIGS)近些年来被深入研究并应用到植物抗病育种中,然而该技术需要首先在宿主植物中建立针对病原菌目标基因的siRNA。基于通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing, VIGS... 宿主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing, HIGS)近些年来被深入研究并应用到植物抗病育种中,然而该技术需要首先在宿主植物中建立针对病原菌目标基因的siRNA。基于通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing, VIGS)技术能在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中快速产生siRNA的思路,构建了一个可同时沉默转基因本氏烟草16c(后简称16c-NB)GFP基因及大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)CYP51基因的融合片段,并将它插入到VIGS载体TRV2中,以实现在通过观察16c-NB绿色荧光是否消失来快速确认基因沉默效应是否发生的同时,也让16c-NB体内产生大量针对大丽轮枝菌CYP51基因的siRNA。结果显示:16c-NB在转入TRV2:GFP-CYP51载体后体内的GFP基因被沉默,且在接种大丽轮枝菌后的萎蔫病状明显低于作为对照的转入了TRV2:GFP载体的16c-NB,说明通过VIGS技术让16c-NB产生的针对大丽轮枝菌CYP51基因的siRNA明显提高了该物种对大丽轮枝菌的抗性。上述基于VIGS技术建立的TRV2:GFP-目标基因体系为快速筛选抗大丽轮枝菌的HIGS靶基因提供了高效工具。 展开更多
关键词 宿主诱导的基因沉默(higS) 病毒诱导的基因沉默(VIGS) CYP51基因 本氏烟草 大丽轮枝菌
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乳腺癌MCF-7细胞系中CD55^(hig)亚群生物学特性分析 被引量:2
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作者 杨超 崔志超 +1 位作者 刘运江 王士杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期492-496,共5页
目的:确定MCF-7细胞系侧群(SP)部分的CD55高表达(CD55hig)细胞是否具有肿瘤干细胞特性。方法:培养乳腺癌MCF-7细胞系,加入核酸染料Hoechst33342和Verapami,用流式细胞术(FCM)分离SP亚群和MP亚群细胞,以CD55mAb分别标记,测定侧群(SP)和主... 目的:确定MCF-7细胞系侧群(SP)部分的CD55高表达(CD55hig)细胞是否具有肿瘤干细胞特性。方法:培养乳腺癌MCF-7细胞系,加入核酸染料Hoechst33342和Verapami,用流式细胞术(FCM)分离SP亚群和MP亚群细胞,以CD55mAb分别标记,测定侧群(SP)和主群(MP)细胞的CD55平均荧光强度值,再以CD55 mAb标记未分选MCF-7细胞,测定CD55hig细胞所占比例,并分选收集CD55hig细胞,观察细胞形态、贴壁率、克隆形成及细胞周期分布以及裸鼠体内种植等生物学特性。结果:SP细胞CD55的平均荧光强度值为100.85±4.57,MP细胞CD55的平均荧光值为50.51±4.75;MCF-7细胞中CD55hig细胞比例为2.12%;24 h内CD55hig细胞细胞贴壁率低于CD55low细胞,接种24 h后,两者贴壁率无明显差异(P>0.05);接种培养12 h后,CD55hig细胞多为球形呈悬浮状态;CD55hig细胞都具有克隆形成能力,CD55hig细胞在培养1周后克隆形成率为(20.04±1.07)%,低于CD55low细胞(27.14±1.07)%(P<0.01);CD55hig细胞中G0/G1静止期细胞占(85.4±3.37)%,高于CD55low细胞(58.6±2.55)%及MCF-7细胞(70.73±4.21)%,有统计学显著差异(P<0.05)。所有裸鼠种植CD55hig细胞后均成瘤,移植瘤病理检验具有恶性肿瘤细胞的特性。结论:乳腺癌MCF-7细胞中存在少量的CD55hig细胞,CD55hig细胞大多数处于静止期、不贴壁呈悬浮状态和克隆遗传性,CD55hig细胞具有肿瘤干细胞生物学特性。 展开更多
关键词 乳腺癌 肿瘤干细胞 CD55hig细胞 生物学特性
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沉默HIG2促进NK细胞对喉癌细胞杀伤敏感性的机制探讨 被引量:2
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作者 崔矫 韩治国 +3 位作者 艾力根·阿布都热依木 郭小平 谭元元 唐亮 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第9期1476-1481,共6页
目的:探讨缺氧诱导基因2(HIG2)在喉癌细胞逃逸NK细胞免疫杀伤中的作用机制。方法:免疫组织化学法检测喉癌组织和癌旁组织中HIG2的表达;Western blot检测HIG2、NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3)的蛋白表达;Transwell实验检测H... 目的:探讨缺氧诱导基因2(HIG2)在喉癌细胞逃逸NK细胞免疫杀伤中的作用机制。方法:免疫组织化学法检测喉癌组织和癌旁组织中HIG2的表达;Western blot检测HIG2、NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3)的蛋白表达;Transwell实验检测Hep-2细胞的侵袭;流式细胞术检测Hep-2细胞的凋亡、CD3^(-)CD56^(+)的NK细胞纯度、NKG2D受体表达及Hep-2细胞NKG2D配体的表达;乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,NK细胞对Hep-2细胞的杀伤活性。结果:HIG2在喉癌组织中高表达。CD3^(-)CD56^(+)的NK细胞纯度大于90%。沉默HIG2抑制Hep-2细胞侵袭,促进细胞凋亡,提高NKG2D配体的表达,增强NK细胞对Hep-2细胞的杀伤敏感性。NKG2D抗体抑制NK细胞NKG2D受体表达,减弱NK细胞对沉默HIG2的Hep-2细胞的杀伤活性。结论:沉默HIG2可抑制喉癌细胞侵袭,促进细胞凋亡,上调NKG2D配体表达,增强NK细胞对喉癌细胞的杀伤敏感性。 展开更多
关键词 hig2 NK细胞 NKG2D配体 喉癌
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黄曲霉漆酶基因HIGS载体的构建及对花生的转化 被引量:1
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作者 孙全喜 王云云 +5 位作者 王秀贞 唐月异 吴琪 张青云 曹广英 王传堂 《山东农业科学》 2015年第10期8-12,共5页
黄曲霉毒素污染严重影响着花生食品安全。通过常规育种的方式培育抗黄曲霉花生新品种进展缓慢,效果也难如人意。HIGS(Host-Induced Gene Silencing,寄主诱导的转基因沉默)技术是一种新兴的RNA干扰技术,为培育抗病植物提供了可能。但该... 黄曲霉毒素污染严重影响着花生食品安全。通过常规育种的方式培育抗黄曲霉花生新品种进展缓慢,效果也难如人意。HIGS(Host-Induced Gene Silencing,寄主诱导的转基因沉默)技术是一种新兴的RNA干扰技术,为培育抗病植物提供了可能。但该技术在花生上的应用尚未见报道。为创造抗黄曲霉花生新品系,本研究利用该技术构建了两个黄曲霉漆酶基因(Lac1和Lac2)的HIGS载体,并试图将其转化到易感黄曲霉的花生品种粤油20中,获得了转Lac1基因的PCR阳性种子。根据HIGS的原理,黄曲霉侵染后,转基因花生中产生的dsRNA将抑制黄曲霉漆酶基因表达,从而使转基因花生对黄曲霉产生抗性。基于该原理,下一步将对转基因种子是否抗黄曲霉侵染进行鉴定。本研究为利用HIGS技术探索黄曲霉漆酶基因与黄曲霉致病性的关系奠定了基础,为培育抗黄曲霉花生品种提供了一条新思路。 展开更多
关键词 花生 黄曲霉 漆酶基因 寄主诱导的转基因沉默(higS) 遗传转化
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水稻抗稻瘟菌HIGS表达载体的构建及遗传转化 被引量:7
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作者 王梦颖 刘敬 +2 位作者 瞿绍洪 王旭丽 王国梁 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期73-78,114,共7页
水稻是我国主要粮食作物之一,而稻瘟病是影响水稻安全生产的最主要病害之一。为克服抗病基因的抗病性很快消失的弊端,本研究尝试了宿主诱导的基因沉默(HIGS)技术在创制抗稻瘟病水稻新材料上的可行性。HIGS是新发展起来的以RNAi为基础的... 水稻是我国主要粮食作物之一,而稻瘟病是影响水稻安全生产的最主要病害之一。为克服抗病基因的抗病性很快消失的弊端,本研究尝试了宿主诱导的基因沉默(HIGS)技术在创制抗稻瘟病水稻新材料上的可行性。HIGS是新发展起来的以RNAi为基础的抗病技术,即在寄主植物中表达可沉默病原物特定基因的HIGS载体,达到控制病原菌扩展的目的。本研究选取了两个稻瘟菌致病关键基因Nox1和NAC为研究靶标,分别克隆其UTR区和CDS区中的特异区段,利用Gateway技术构建这4个片段HIGS表达载体,再利用农杆菌介导法将各载体分别转化水稻,通过鉴定得到转基因阳性植株,为后续开展该技术在水稻抗稻瘟病方面的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 稻瘟病 higS 遗传转化
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利用TRV-HIGS技术鉴定核盘菌致病相关的分泌蛋白基因 被引量:4
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作者 远俊虎 丁一娟 +4 位作者 杨文静 闫宝琴 柴亚茹 梅家琴 钱伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期4274-4284,共11页
【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的菌核病是我国油菜种植上的主要问题,严重威胁着菜籽产量及品质。分泌性蛋白在病原菌致病过程中起着重要作用,核盘菌基因组中包含大量编码分泌性蛋白的基因,本研究旨在鉴定并筛选与致... 【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的菌核病是我国油菜种植上的主要问题,严重威胁着菜籽产量及品质。分泌性蛋白在病原菌致病过程中起着重要作用,核盘菌基因组中包含大量编码分泌性蛋白的基因,本研究旨在鉴定并筛选与致病性相关的分泌蛋白基因,揭示核盘菌的致病机理,为菌核病防控提供重要靶标。【方法】采用SMART软件对核盘菌在侵染抗病、感病甘蓝过程中差异表达明显的8个具有信号肽的候选基因进行蛋白质结构域的分析,随后将SMART分析得到的结构域分别于SCOP、Pfam、PDB数据库进行功能注释。利用基因特异性引物进行目的基因特异片段的PCR扩增,构建pTRV2-Gene和pTRV2-GFP载体。随后等量混合含有pTRV1及pTRV2-Gene,pTRV1及pTRV2-GFP载体的重悬菌液。室温静置3 h后,利用针筒浸润法将pTRV2-Gene载体及对照(TRV-GFP)侵染5-6周龄的本氏烟(Nicotiana benthamiana)。侵染植株于黑暗环境中培养48 h后,再置于正常光照条件的环境中生长7 d。将直径6 mm的核盘菌PDA菌丝块接种于侵染9 d后的烟草叶片叶腹的中央,其中带菌面紧贴叶片,随后将接种植株培养48 h后统计病斑面积。提取接种48 h后的病斑及病斑周围组织叶片(距腐烂组织边缘1 cm左右)的RNA,利用特异引物进行目的基因的qRT-PCR,计算目的基因在携带TRV-HIGS载体的烟草植株中的相对表达量。【结果】SMART及结构域注释预测这8个候选基因可能参与了蛋白、核酸或多糖的水解,影响植物的免疫反应,参与核盘菌对药物耐受性的调节及生物素合成。核盘菌接种携带这8个基因的TRV-HIGS载体及对照载体的烟草,48 h后对照植株的病斑面积平均为3.44 cm2,除SS1G07655外,其余7个候选基因的TRV-HIGS植株上的病斑面积相比对照植株均显著减小(P≤0.05),其病斑面积介于1.63-2.61 cm2。qRT-PCR结果显示,这7个致病相关的候选基因在核盘菌侵染烟草过程中的基因表达水平均显著低于对照(P≤0.05)。【结论】利用TRV介导的HIGS技术成功地对核盘菌中8个未知功能的分泌蛋白基因进行了功能鉴定,筛选到7个可能与核盘菌致病性相关的基因,其中对核盘菌致病性影响最大的SS1G03146预测可能参与核盘菌生物素合成,同时SS1G04343及SS1G11912预测可能参与影响植物的免疫反应。 展开更多
关键词 核盘菌 TRV-higS 本氏烟 分泌蛋白 致病性 实时荧光定量PCR
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提高基于专用芯片HIGS-X32A2产品可靠性的实验研究
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作者 刘刚 马牧燕 +1 位作者 仵思笛 张艺伟 《现代计算机》 2021年第2期116-120,共5页
借助自主研发的Release仿真软件,对专用芯片HIGS-X32A2进行预失效验证,获得专用芯片良品率范围表;进而通过芯片封装技术及光电探测器组装技术并结合制程工序的检测测量,监测可能对专用芯片产品性能产生影响的各种因素;从而提高基于专用... 借助自主研发的Release仿真软件,对专用芯片HIGS-X32A2进行预失效验证,获得专用芯片良品率范围表;进而通过芯片封装技术及光电探测器组装技术并结合制程工序的检测测量,监测可能对专用芯片产品性能产生影响的各种因素;从而提高基于专用芯片HIGS-X32A2产品的可靠性。 展开更多
关键词 higS-X32A2专用芯片 制程工艺 光电探测器
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RHO1基因的HIGS表达载体构建及转基因水稻的抗病性分析 被引量:4
8
作者 唐喆 张强 项萍 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第8期39-46,共8页
【目的】使用Gateway技术构建稻瘟菌RHO1基因寄主诱导的基因沉默(HIGS)表达载体,将其转化入水稻后,观察稻瘟菌对转基因水稻的致病力。【方法】利用PCR技术从稻瘟菌cDNA扩增RHO1基因,通过Gateway技术构建pBDL03-RHO1载体,电转化进入农杆... 【目的】使用Gateway技术构建稻瘟菌RHO1基因寄主诱导的基因沉默(HIGS)表达载体,将其转化入水稻后,观察稻瘟菌对转基因水稻的致病力。【方法】利用PCR技术从稻瘟菌cDNA扩增RHO1基因,通过Gateway技术构建pBDL03-RHO1载体,电转化进入农杆菌AGL1;以水稻日本晴为材料,通过农杆菌介导的转化方法获得转基因水稻植株,并对其接种稻瘟菌,分析转基因水稻对稻瘟菌抗性。【结果】通过PCR扩增获得了RHO1基因片段,利用BP反应构建了入门载体pDONR 221-RHO1,采用LR反应构建了HIGS表达载体pBDL03-RHO1。通过农杆菌介导的转基因方法将HIGS载体转入了水稻中,并利用mCherry红色荧光观察和PCR扩增验证了转基因植株构建成功。接种试验结果表明,HIGS转基因植株对稻瘟菌的抗性提高。【结论】利用Gateway技术可以简单快速构建HIGS表达载体,表达RHO1的转基因水稻抗病性提高,表明RHO1介导的HIGS在水稻-稻瘟菌互作过程中可以发挥作用。 展开更多
关键词 稻瘟菌 寄主诱导的基因沉默 水稻 抗病性 GATEWAY技术
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HIG2基因的研究进展
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作者 智荣乐 黄英 +1 位作者 高士争 赵素梅 《中国医药科学》 2013年第21期38-40,共3页
低氧可诱导蛋白2(HIG2)基因作为一种新的脂滴蛋白和自分泌生长因子,在细胞生物学和人类疾病中,特别是癌症的研究中,具有重要的意义。随着分子生物学技术的发展,人们对HIG2基因的调控有很多新的认识。本研究对HIG2基因的结构和HIG2基因... 低氧可诱导蛋白2(HIG2)基因作为一种新的脂滴蛋白和自分泌生长因子,在细胞生物学和人类疾病中,特别是癌症的研究中,具有重要的意义。随着分子生物学技术的发展,人们对HIG2基因的调控有很多新的认识。本研究对HIG2基因的结构和HIG2基因在肾细胞癌、细胞淋巴瘤、上皮卵巢癌、透明细胞腺癌及子宫癌的表达及调控进行了综述。 展开更多
关键词 hig2 WNT HIF-1 癌症
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SEC11基因的HIGS表达载体构建及转基因水稻的抗病性分析 被引量:1
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作者 唐喆 王光辉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第12期2572-2579,共8页
【目的】为克服传统抗病水稻材料抗病性易于丧失的缺点。【方法】利用寄主诱导基因沉默(HIGS)技术创制水稻抗稻瘟菌的新材料。【结果】首先,选取稻瘟菌信号肽复合物中的关键亚基SEC11为靶基因,利用Gateway基因重组技术将稻瘟菌SEC11基... 【目的】为克服传统抗病水稻材料抗病性易于丧失的缺点。【方法】利用寄主诱导基因沉默(HIGS)技术创制水稻抗稻瘟菌的新材料。【结果】首先,选取稻瘟菌信号肽复合物中的关键亚基SEC11为靶基因,利用Gateway基因重组技术将稻瘟菌SEC11基因的干扰片段构建到pBDL03载体上获得HIGS表达载体。通过农杆菌介导的转化法,成功将SEC11基因的HIGS载体导入水稻品种日本晴中获得阳性转基因水稻植株。最后,通过水稻叶片喷雾接种试验,证明以稻瘟菌SEC11基因为靶标的HIGS转基因水稻对稻瘟菌具有显著的抗病性。【结论】本研究创制了新的抗稻瘟病水稻材料,将HIGS技术应用于抗稻瘟病分子育种提供了科学依据。 展开更多
关键词 稻瘟病 寄主诱导的基因沉默 水稻 抗病性 GATEWAY技术 SEC11基因
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分泌型mB7-H4-hIg重组融合蛋白定量检测方法的建立和应用
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作者 姜碧 《中国优生与遗传杂志》 2011年第4期26-28,共3页
目的建立双抗体夹心ELISA方法,定量检测重组小鼠共抑制分子B7-H4(mB7-H4)-人IgGα1 Fc段融合蛋白(mB7-H4-hIg)的分泌型表达。方法将表达mB7-H4-hIg的真核表达载体pmB7-H4-Fc转染COS-7细胞,并将该载体注入小鼠体内,制备重组mB7-H4-hIg融... 目的建立双抗体夹心ELISA方法,定量检测重组小鼠共抑制分子B7-H4(mB7-H4)-人IgGα1 Fc段融合蛋白(mB7-H4-hIg)的分泌型表达。方法将表达mB7-H4-hIg的真核表达载体pmB7-H4-Fc转染COS-7细胞,并将该载体注入小鼠体内,制备重组mB7-H4-hIg融合蛋白,以羊抗人IgG为包被抗体,HRP标记的羊抗人lgG为检测抗体,通过配对实验、方阵滴定实验及绘制hlgG浓度与A450的标准曲线,建立定量检测重组mB7-H4-hlg融合蛋白双抗体夹心ELISA法。结果建立了双抗体夹心ELISA方法,检测的线性范围为10~500ng/ml。标准曲线的回归方程为:y=0.0028x+0.0899,R2=0.9762,P<0.05.应用该方法可快速检测体外和体内表达的重组mB7-H4-hlg融合蛋白的分泌量。结论建立了一种可快速定量检测重组mB7-H4-hlg融合蛋白分泌表达的双抗体夹心ELISA法。 展开更多
关键词 重组融合蛋白 ELISA 免疫球蛋白恒定片段
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大丽轮枝菌木糖苷酶基因的鉴定及基于HIGS技术的功能分析 被引量:2
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作者 张小雪 孙天歌 +4 位作者 张迎春 陈丽华 张新宇 李艳军 孙杰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第15期3219-3231,共13页
【目的】从大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)中鉴定木糖苷酶基因,研究其与大丽轮枝菌致病力的关系,为解析大丽轮枝菌致病分子机制提供理论依据,同时为制定更好的棉花黄萎病防治策略提供科学依据。【方法】利用生物信息学方法从大丽轮... 【目的】从大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)中鉴定木糖苷酶基因,研究其与大丽轮枝菌致病力的关系,为解析大丽轮枝菌致病分子机制提供理论依据,同时为制定更好的棉花黄萎病防治策略提供科学依据。【方法】利用生物信息学方法从大丽轮枝菌基因组数据库中鉴定全部木糖苷酶基因,并对基因编码蛋白的结构域、基因的染色体定位及进化关系等进行分析。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测木糖苷酶基因在不同抗/感棉花品种根系分泌物培养0、6、12、24和48 h大丽轮枝菌中的表达量。利用寄主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing,HIGS)技术对木糖苷酶基因VdxyL3在大丽轮枝菌侵染过程中的功能进行初步分析。将VdxyL3的目标片段转化棉花,采用伤根法接种大丽轮枝菌Vd991,观察转化植株的表型,调查病情指数,同时利用qRT-PCR技术对植株中真菌生物量和VdxyL3的表达量进行检测。【结果】利用生物信息学方法从大丽轮枝菌中查找出13个木糖苷酶基因(VdxyL1—VdxyL13),其编码序列长度介于1461—2544 bp,蛋白质分子量介于38.78—90.97 kD,理论等电点介于4.67—5.89。结构域和进化树分析发现13个木糖苷酶基因中包括9个糖苷水解酶43家族成员、1个3家族成员和3个31家族成员。染色体定位分析发现13个基因分布在6条染色体上,未形成基因簇。qRT-PCR结果发现选取的6个基因均受到根系分泌物的诱导,在一种或多种根系分泌物中培养6 h或12 h后,表达量均明显升高,然后降低。其中VdxyL3受海岛棉根系分泌物诱导后表达量明显升高,表明该基因的表达明显受海岛棉根系分泌物的诱导。HIGS研究结果表明,接菌14 d和21 d后转化VdxyL3基因干扰片段的棉花发病明显较重,其病情指数(33.3和83.9)明显高于空载体对照(21.7和66.1)。qRT-PCR分析发现转化VdxyL3基因干扰片段的棉花植株茎中VdxyL3的表达量明显低于空载体对照,真菌生物量显著多于对照。【结论】利用HIGS技术将VdxyL3基因沉默后,棉株的抗病性明显降低,表明VdxyL3在大丽轮枝菌致病及宿主-病原体互作过程中可能发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 棉花 大丽轮枝菌 黄萎病 VdxyL3 木糖苷酶 寄主诱导的基因沉默
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HIGS-SsCCS转基因拟南芥的菌核病抗性鉴定 被引量:6
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作者 柴亚茹 丁一娟 +4 位作者 周思钰 杨文静 闫宝琴 远俊虎 钱伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期761-770,共10页
【目的】菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的一类真菌病害,核盘菌寄主范围广泛,严重危害多种作物的品质。本研究利用寄主诱导基因沉默(HIGS)的方法在寄主中诱导核盘菌致病相关基因的沉默从而增强寄主的菌核病抗性,为菌... 【目的】菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的一类真菌病害,核盘菌寄主范围广泛,严重危害多种作物的品质。本研究利用寄主诱导基因沉默(HIGS)的方法在寄主中诱导核盘菌致病相关基因的沉默从而增强寄主的菌核病抗性,为菌核病抗病育种提供新的思路。【方法】铜锌超氧化物歧化酶是一种重要的抗氧化剂,以核盘菌铜锌超氧化物歧化酶铜伴侣基因(copper chaperone for copper/zinc superoxide dismutase,SsCCS)为靶基因,通过生物信息学分析该基因的结构特点,并利用MEGA6.0软件构建系统发育树;通过分别比对拟南芥及核盘菌基因组,选择特异的干扰片段进行扩增;采用农杆菌介导的浸花序法,将HIGS载体转入拟南芥Col-0,通过DNA鉴定以及标记筛选出稳定的HIGS-CCS转基因拟南芥;选取4—5周龄的HIGS-CCS转基因拟南芥植株叶片接种核盘菌野生菌株1980,于接种24 h后统计病斑面积,分析转基因株系的菌核病抗性;通过qRT-PCR分析核盘菌侵染转基因植株过程中SsCCS的表达情况;同时在接种6、12、24 h后利用DAB染色的方法检测转基因植株与核盘菌互作过程中H2O2的积累。【结果】生物信息学分析结果表明,SsCCS(SS1G_00102)全长为1010 bp,编码序列长759 bp,共编码253个氨基酸,该蛋白分子质量为27176.96 Da,等电点(PI)为5.04,与灰霉病菌BcCCS(EDN25358)亲缘关系最近,氨基酸同源性达到87%,与拟南芥AtCCS(AT1G12520.1)亲缘关系较远;通过与核盘菌以及拟南芥基因组比对,选择314 bp特异干扰片段,成功构建SsCCS的HIGS表达载体,转化拟南芥。T1及T2代转基因拟南芥接种核盘菌24 h后的病斑面积均小于野生型拟南芥。从T2代中获得3个稳定表达的T3代HIGS-CCS转基因拟南芥株系:HIGS-CCS-5、HIGS-CCS-8、HIGS-CCS-13;与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥在接种核盘菌24 h后,病斑面积显著减小46%—61%;qRT-PCR结果显示核盘菌在侵染转基因植株过程中,SsCCS的表达量显著低于侵染野生型拟南芥。DAB染色结果表明,在侵染过程中,转基因拟南芥植株中H2O2的积累明显少于野生型拟南芥,ROS水平降低。【结论】利用HIGS方法在拟南芥中干扰核盘菌SsCCS的表达能够显著提高拟南芥的抗病性,研究结果为油菜等农作物菌核病抗病改良提供了参考。 展开更多
关键词 拟南芥 寄主诱导的基因沉默 核盘菌 SsCCS 抗病性 菌核病
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VIGS结合HIGS诱导的烟草对斜纹夜蛾与棉铃虫的抗性比较
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作者 农知旺 谢锋华 +3 位作者 陈宇辰 吴娟 郭珍珍 竺锡武 《湖南农业科学》 2022年第12期1-6,共6页
为探索防控斜纹夜蛾和棉铃虫的新途径,比较研究了病毒诱导表达昆虫NDUFV2(NV2)基因片段的烟草植株对斜纹夜蛾与棉铃虫的抗性。以含SliNV2370或HaNV2370基因片段的CMV或TRV重组质粒-农杆菌,采用质粒-农杆菌浸润法接种本氏烟植株,将RT-PC... 为探索防控斜纹夜蛾和棉铃虫的新途径,比较研究了病毒诱导表达昆虫NDUFV2(NV2)基因片段的烟草植株对斜纹夜蛾与棉铃虫的抗性。以含SliNV2370或HaNV2370基因片段的CMV或TRV重组质粒-农杆菌,采用质粒-农杆菌浸润法接种本氏烟植株,将RT-PCR检测接种成功的本氏烟植株用于斜纹夜蛾或棉铃虫抗性试验,并采用RT-qPCR分析斜纹夜蛾和棉铃虫NV2基因表达量。结果表明:通过CMV载体或TRV载体表达SliNV2370基因片段的本氏烟植株都未能显著增强对斜纹夜蛾的抗性;斜纹夜蛾SliNV2基因表达量下降了19%左右,但沉默SliNV2基因的效果都没有达到差异表达基因的水平。CMV载体或TRV载体表达HaNV2370基因片段的本氏烟植株,都能显著增强对棉铃虫的抗性,分别提高36.5%和31.5%。棉铃虫HaNV2基因表达量分别下降了72.5%和78.7%,沉默HaNV2基因的效果都达到了差异表达基因的水平。说明通过CMV载体或TRV载体表达NDUFV2(NV2)基因片段的本氏烟植株未能显著增强对斜纹夜蛾的抗性,但能显著增强对棉铃虫的抗性。 展开更多
关键词 VIGS higS 斜纹夜蛾 棉铃虫 本氏烟 抗性 NDUFV2(NV2)
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抗粒细胞单克隆抗体与HIG在炎症模型鼠体内生物分布的对比
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作者 王平 张光明 +1 位作者 刘永昌 林祥通 《核技术》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期398-402,共5页
通过对抗人粒细胞单克隆抗体 (McAb)及人丙种球蛋白 (HIG)在炎症模型鼠体内生物分布的对比性研究 ,比较两种炎症显像剂在炎症模型鼠体内生物分布的差异。结果表明McAb和HIG在肝、脾和骨髓均浓聚较高放射性 ,但McAb组浓聚量明显高于HIG... 通过对抗人粒细胞单克隆抗体 (McAb)及人丙种球蛋白 (HIG)在炎症模型鼠体内生物分布的对比性研究 ,比较两种炎症显像剂在炎症模型鼠体内生物分布的差异。结果表明McAb和HIG在肝、脾和骨髓均浓聚较高放射性 ,但McAb组浓聚量明显高于HIG组 ,差异显著 (P <0 .0 1) ;McAb组肺、胃肠及肌肉的放射性明显低于HIG组 ;McAb组外周血放射性明显低于HIG组 ,且消退迅速 ;两组肾脏均有较高放射性浓聚。注射抗体后 6h及 9h ,两组炎症肢体 (靶 )与对侧健肢 (非靶 )的 %ID值的比值 (T NT)差异不显著 ,但 2 4hMcAb组T NT明显高于HIG组 ,差异显著 (P <0 .0 5)。McAb可使炎症肢体炎症部位明显显影 ,但早期优越性并不比HIG明显 ,延迟显像时McAb比HIG优越 ;McAb对肺。 展开更多
关键词 抗粒细胞单克隆抗体 炎症 人丙种球蛋白 放射免疫显像 放射性同位素标记 生物分布
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小麦条锈菌产孢基因PsCON6的克隆及功能验证
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作者 刘贝贝 沈煜洋 +5 位作者 邓菲菲 陈江华 李进 李广阔 高海峰 李月 《华北农学报》 北大核心 2025年第4期185-193,共9页
小麦条锈病是由小麦条锈菌引起的重大病害,严重威胁我国粮食安全。夏孢子是条锈菌繁殖、传播和侵染的关键介质,但其产孢相关基因的调控机制尚不清楚。筛选并验证小麦条锈菌侵染前期高表达的候选基因PsCON6的功能,为解析其致病机制提供... 小麦条锈病是由小麦条锈菌引起的重大病害,严重威胁我国粮食安全。夏孢子是条锈菌繁殖、传播和侵染的关键介质,但其产孢相关基因的调控机制尚不清楚。筛选并验证小麦条锈菌侵染前期高表达的候选基因PsCON6的功能,为解析其致病机制提供新线索。通过同源克隆从小麦条锈菌中获取PsCON6基因,利用qRT-PCR分析其在侵染前期的表达模式。通过生物信息学技术分析预测PsCON6蛋白的氨基酸序列、保守结构域及理化性质。通过寄主介导的基因沉默(BSMV-HIGS)技术瞬时沉默PsCON6,检测寄主活性氧面积、病原菌菌丝长度与面积及病原菌生物量。通过瞬时表达确定PsCON6蛋白的亚细胞定位。PsCON6在小麦条锈菌侵染前期显著高表达,其编码的蛋白含2个conidiation-specific protein 6保守结构域,由83个氨基酸组成。HIGS沉默PsCON6后,寄主活性氧水平显著升高,病原菌菌丝长度和面积显著减少,但孢子量未受显著影响。亚细胞定位表明,PsCON6定位于细胞膜。结果表明,PsCON6可能参与调控小麦条锈菌的菌丝生长过程,但对夏孢子形成无直接影响,其功能可能存在冗余,为揭示条锈菌致病机制提供了新靶点,并为后续深入解析其分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦条锈菌 PsCON6 higS 产孢基因
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构建高质量发展的国土空间开发保护新格局
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作者 王垚 李爱民 《齐鲁学刊》 北大核心 2025年第2期123-134,共12页
在实现全面建成小康社会目标之后,中国已经迈入社会主义现代化建设的新征程。但长期以来,中国人口、经济、资源环境等国土空间分布失衡问题未能受到足够重视,已经对实现社会主义现代化目标形成掣肘。在新发展理念的指引下,新征程阶段的... 在实现全面建成小康社会目标之后,中国已经迈入社会主义现代化建设的新征程。但长期以来,中国人口、经济、资源环境等国土空间分布失衡问题未能受到足够重视,已经对实现社会主义现代化目标形成掣肘。在新发展理念的指引下,新征程阶段的国土空间开发应以“全域高质量发展、整体生态保护与局部重点开发有机结合”为特征,以完善主体功能区战略、加强空间分工与合作、开拓高质量发展动力源、提升重要功能区的保障能力为主要思路,逐步确定“四横四纵”城市化地区、农产品主产区和生态功能区三大功能区。同时,为支撑创新驱动、制造业强国、对外开放、能源安全等国家重大发展战略,还需要重点布局科技创新高地、现代制造业基地、多层次对外开放聚集区、能源安全保障基地等功能区。在此基础上,新征程阶段的国土空间开发应以强化国土空间用途管制、完善区际利益补偿机制、实施分类管理的差别化国土空间政策、明确中央与地方责任和分工为施策重点。 展开更多
关键词 高质量发展 国土空间 开发保护 新格局
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农业产业集聚对农业经济高质量发展的影响——基于技术进步和规模经济的实证 被引量:1
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作者 孙庆雨 《商业观察》 2025年第6期57-59,88,共4页
为探讨农业产业集聚对农业经济高质量发展的影响机制,采用多元回归模型和中介效应分析,使用S省统计年鉴和农业生产数据,研究农业产业集聚程度、技术进步水平、规模经济效应对农业经济高质量发展的影响。控制变量包括劳动力投入、土地利... 为探讨农业产业集聚对农业经济高质量发展的影响机制,采用多元回归模型和中介效应分析,使用S省统计年鉴和农业生产数据,研究农业产业集聚程度、技术进步水平、规模经济效应对农业经济高质量发展的影响。控制变量包括劳动力投入、土地利用率、水资源利用效率、农业机械化水平、农业科技投入和气候条件,并通过区域异质性检验和稳健性检验验证结果的可靠性。结果表明,农业产业集聚显著促进了农业经济高质量发展,集聚效应通过优化资源配置和提升生产效率,促进技术创新和规模经济。技术进步和规模经济效应作为中介变量起关键作用。东部区域集聚效应最显著,中部次之,西部较弱,显示出区域差异。不同时间段的稳健性检验结果验证了研究结论的可靠性。得出结论,农业产业集聚通过提升技术含量和创新能力、实现规模经济效应,显著推动农业经济高质量发展。 展开更多
关键词 农业产业集聚 农业经济 高质量发展
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小鼠可溶性CD83对树突状细胞表达共刺激分子和共刺激活性的影响 被引量:5
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作者 徐军发 黄保军 +5 位作者 熊平 冯玮 徐勇 方敏 郑芳 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期792-796,共5页
目的:研究可溶性小鼠CD83(mCD83)对树突状细胞(DC)表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法:克隆mCD83基因,构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg,并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELIS... 目的:研究可溶性小鼠CD83(mCD83)对树突状细胞(DC)表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法:克隆mCD83基因,构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg,并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELISA、Western blot和RT-PCR技术检测mCD83-hIg融合基因在COS-7细胞中的表达。用mCD83-hIg处理小鼠DC细胞系(DC2.4)采用流式细胞术检测DC细胞周期、细胞凋亡和共刺激分子CD80、CD86的表达影响;采用混合白细胞培养试验,检测mCD83-hIg对DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的影响。结果:酶切和序列测定鉴定显示构建的真核表达载体完全正确;mCD83-hIg对DC2.4细胞周期和细胞凋亡无影响,但可下调DC2.4表面共刺激分子CD80和CD86的表达;mCD83-hIg处理过的DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的能力显著下降。结论:mCD83-hIg可抑制DC表达共刺激分子并下调DC共刺激活性,从而抑制同种异基因T细胞增殖和产生细胞因子。 展开更多
关键词 mCD83-hig 树突状细胞 DC2.4 共刺激分子 共刺激作用 混合白细胞培养 T细胞增殖 IL-2 IFN-γ
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Rho蛋白家族在丛枝菌根真菌与植物共生关系建立中的功能分析 被引量:1
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作者 韩亚超 赵斌 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期828-837,共10页
Rho家族蛋白是一类含有GTPase结构域的高度保守蛋白的总称,它是真核生物中Ras超家族主要成员之一。通过同源比对以及RACE等技术从丛枝菌根真菌(Rhizophagus irregularis)DAOM197198中分离到了3个Rho家族小G蛋白。通过与其他真菌Rho蛋白... Rho家族蛋白是一类含有GTPase结构域的高度保守蛋白的总称,它是真核生物中Ras超家族主要成员之一。通过同源比对以及RACE等技术从丛枝菌根真菌(Rhizophagus irregularis)DAOM197198中分离到了3个Rho家族小G蛋白。通过与其他真菌Rho蛋白家族成员进行系统进化分析,结果表明,所分离到的Ri CDC42,RiRac1,RiRho1属于高度保守的Rho蛋白家族成员;利用实时荧光定量PCR方法对这3个基因在前共生阶段和共生阶段的表达模式进行分析,结果发现RiRho1在萌发孢子中的表达量最高,而在共生时期表达下调,RiRac1和Ri CDC42基因在共生时期的表达量比共生前期高。此外,本研究还利用酵母CDC42,Rho1温度敏感性突变株,稻瘟病菌ΔMg CDC42突变株以及HIGS技术对Rhizophagus irregularis Rho蛋白家族成员进行进一步研究。结果显示,RiRho1与Ri CDC42基因能够互补酵母Rho1与CDC42温度敏感型表型;对Ri CDC42与RiRac1进行HIGS时,Rhizophagus irregularis丛枝发生明显的降解;Ri CDC42基因能够互补稻瘟病菌ΔMg CDC42突变体部分表型,但不同的是互补菌株不产黑色素。由此推测Rho蛋白家族成员可能在丛枝菌根真菌共生关系建立的过程中具有重要的作用。 展开更多
关键词 Rho蛋白家族 菌根共生体 Rhizophagus irregularis higS
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