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基于转录组测序筛选鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失菌的差异表达基因 被引量：5
1
作者 杨阳 杨琦 +6 位作者 董然然 潘永 李晨 刘丽娟 文明 周碧君 王开功 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2578-2584,共7页
旨在鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株转录组测序中分析适应环境变化及细菌分泌通路,筛选相关基因。通过使用实时荧光定量PCR对鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株转录组测序结果进行验证,从而对鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株的细菌趋化性通路、细菌双组... 旨在鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株转录组测序中分析适应环境变化及细菌分泌通路,筛选相关基因。通过使用实时荧光定量PCR对鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株转录组测序结果进行验证,从而对鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株的细菌趋化性通路、细菌双组分通路、细菌分泌通路进行深入分析,筛选相关的重要调控基因。结果显示:在细菌趋化性通路中筛选出yiaD、STM 3138、STM 3216和malE等4个共表达基因;在细菌分泌通路中筛选出spaP、invA、prgH、invE、spaS、invG和ssaV等7个共表达基因;在细菌双组分通路中筛选出ybfM、htrA、pagO、STM 3138、STM 3031、ttrB、hilD、pstS、STM 1530、hilA、pgtC、hydH、pocR、STM 3216、ttrR和fljB等16个共表达基因。在鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株的趋化性通路、细菌双组分通路、细菌分泌通路中筛选出差异表达基因,hfq能够对这些基因进行调控,从而影响如运动性、毒力等相关作用,为沙门菌中的sRNA与hfq后续研究及沙门菌的防治奠定一定基础。 展开更多
关键词 沙门菌 沙门菌hfq基因缺失株 sRNA伴侣蛋白hfq
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大肠杆菌RNA分子伴侣Hfq与DsrA和rpoS作用机制的研究进展 被引量：1
2
作者 王丽君 王维维 +2 位作者 龚庆国 吴季辉 施蕴渝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第7期627-633,共7页
RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然... RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然而,Hfq使用何种机制来促进sRNA和mRNA配对一直有两种并不互斥的模型存在:Hfq远侧和近侧两个表面同时结合sRNA和mRNA,使得两条RNA相互靠近,便于形成碱基配对;Hfq可能结合一条或者两条RNA,改变它们的二级结构或者三级结构,从而促进sRNA-mRNA配对的实现.最近的研究报道,成功在体外捕捉到了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物,测定了AU6A-Hfq-A7三元复合物的晶体结构,并且在大肠杆菌体内证实了三元复合物的形成对于Hfq帮助sRNA DsrA激活mRNA rpoS的翻译是重要的.本文以sRNA DsrA和mRNA rpoS为例综述了蛋白质Hfq与RNA的结合特性,同时也讨论了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物的存在对于研究sRNA介导的调控机制的一些启示. 展开更多
关键词 hfq RNA分子伴侣 SRNA DSRA MRNA RPOS hfq-RNA复合物晶体结构 翻译激活
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肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq表达与纯化 被引量：8
3
作者 孟宪臣 孟霞 +3 位作者 聂佳佳 厚华艳 王勇祥 朱国强 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期1-4,19,共5页
利用pET原核表达系统和亲和层析表达纯化肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq。首先构建含靶基因hfq的重组表达质粒pET28a(+)-hfq,经PCR及双酶切鉴定构建正确,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因高效表达。SDS-PAGE及Western ... 利用pET原核表达系统和亲和层析表达纯化肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq。首先构建含靶基因hfq的重组表达质粒pET28a(+)-hfq,经PCR及双酶切鉴定构建正确,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因高效表达。SDS-PAGE及Western blot结果表明:Hfq在大肠杆菌中成功表达,蛋白分子质量约为16.6ku,且主要存在于上清中,以可溶形式表达。进一步对表达产物进行Ni 2+亲和层析纯化,获得纯度较高的融合蛋白,为研究Hfq蛋白与sRNA的相互作用以及sRNA的调控机制提供基础。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 hfq蛋白 SRNA 表达 纯化
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sRNA伴侣蛋白Hfq敲除条件下沙门菌的转录组分析 被引量：6
4
作者 李晨 王开功 +3 位作者 周碧君 文明 刘丽娟 杨琦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期461-469,共9页
为探明沙门菌(Salmonella)在sRNA伴侣蛋白Hfq敲除条件下转录组变化情况。本试验采用HiSeq测序平台对沙门菌LT2菌株及其Hfq敲除株进行高通量测序,通过DESeq2差异分析方法筛选敲除sRNA伴侣蛋白Hfq条件下的差异表达基因,对其进行生物信息... 为探明沙门菌(Salmonella)在sRNA伴侣蛋白Hfq敲除条件下转录组变化情况。本试验采用HiSeq测序平台对沙门菌LT2菌株及其Hfq敲除株进行高通量测序,通过DESeq2差异分析方法筛选敲除sRNA伴侣蛋白Hfq条件下的差异表达基因,对其进行生物信息学GO功能显著性富集分析和Pathway显著性富集分析。结果显示,对照组和试验组分别得到12 753 534条、8 254 308条Clean Reads。通过DESeq2差异分析获得差异基因1 055个,其中表达上调基因516个,表达下调基因539个。GO功能显著性富集分析表明显著差异表达基因主要富集在钴胺素代谢过程、钴胺素生物合成过程、碳水化合物代谢过程等生物过程中。Pathway显著性富集分析表明显著差异表达基因富集到细菌趋化性、丙酸代谢和碳代谢等11个信号通路中。结果表明,本试验应用RNA-seq技术丰富了sRNA伴侣蛋白Hfq调控基因数量,筛选出20个受伴侣蛋白Hfq调控的显著差异表达基因,其中4个基因功能及编码蛋白未知,注释了差异表达基因的生物学功能及信号通路,推断Hfq在细菌对数期主要通过影响营养提供和趋化性等途径,继而影响细菌的正常生理活动,为Hfq协同sRNA的调控机理研究及sRNA靶基因的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 沙门菌 sRNA伴侣蛋白hfq 转录组测序
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肠炎沙门氏菌hfq缺失株的构建和对fliC基因的调控分析 被引量：2
5
作者 孟霞 孟宪臣 +4 位作者 朱春红 王亨 王金秋 聂佳佳 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期720-724,共5页
Hfq是一种介导细菌非编码小RNA(sRNA)与其靶标mRNA结合的伴侣蛋白,可协助多种sRNA在转录后水平调控基因表达。本研究通过λ噬菌体的Red同源重组系统构建了肠炎沙门氏菌hfq缺失突变株SE50336△hfq。利用荧光定量PCR技术分析了hfq突变株... Hfq是一种介导细菌非编码小RNA(sRNA)与其靶标mRNA结合的伴侣蛋白,可协助多种sRNA在转录后水平调控基因表达。本研究通过λ噬菌体的Red同源重组系统构建了肠炎沙门氏菌hfq缺失突变株SE50336△hfq。利用荧光定量PCR技术分析了hfq突变株中鞭毛主要结构蛋白fliC的表达情况。结果表明与野生株相比,hfq突变株fliC的表达量明显下降,只有野生株的3.7%。细菌运动性试验表明突变株在半固体培养基上的运动能力减弱。以上结果表明Hfq蛋白可调节鞭毛结构蛋白FliC的表达,造成FliC蛋白表达量明显下降,鞭毛的合成受到抑制,从而导致肠炎沙门氏菌的运动能力减弱。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 hfq FLIC 运动性
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7XXX系铝合金HFQ温成形界面换热系数实验研究 被引量：2
6
作者 盈亮 高天涵 +2 位作者 蒋迪 侯文彬 胡平 《中国有色金属学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第4期662-669,共8页
基于自主设计的圆台模具淬火实验平台,研究高强度7075-T6铝合金在HFQ温成形过程中的瞬态传热规律。通过Beck非线性估算法(Beck反算法)获得界面换热系数(IHTC)在不同因素下(包括合模压强与表面粗糙度)随温度变化的瞬态换热规律,并分析各... 基于自主设计的圆台模具淬火实验平台,研究高强度7075-T6铝合金在HFQ温成形过程中的瞬态传热规律。通过Beck非线性估算法(Beck反算法)获得界面换热系数(IHTC)在不同因素下(包括合模压强与表面粗糙度)随温度变化的瞬态换热规律,并分析各因素对IHTC的影响机理。结果表明:Beck反算法在计算瞬态换热系数时具有较高的计算精度。7075-T6铝合金与模具界面的瞬态换热系数随压强增大而增大,当压强增大到80 MPa时,瞬态平均换热系数IHTC趋近于3375 W/(m^2?K)。进一步,表面粗糙度也会影响7075-T6铝合金温成形过程的IHTC,当粗糙度大于0.57μm并小于0.836μm时,IHTC随粗糙度的增大而明显减小,当粗糙度小于0.57μm或大于0.836μm时,IHTC值均随粗糙度的增大而缓慢减小。 展开更多
关键词 7075-T6铝合金 hfq温成形 界面换热系数 Beck反算法 工艺因素
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布鲁菌Hfq蛋白研究进展 被引量：2
7
作者 董浩 牛慧 +3 位作者 彭小薇 王晓英 孙雨 宋晓晖 《动物医学进展》 北大核心 2016年第1期93-95,共3页
布鲁菌病(布病)是一种严重的人兽共患病。作为布病的病原,布鲁菌能够耐受宿主体内的各种杀菌机制并持续的生存。当布鲁菌侵入宿主体内后,必须适应抗体免疫的环境,而这依赖于布鲁菌对自身基因表达的巧妙调控。Hfq蛋白是一个RNA伴侣分子,... 布鲁菌病(布病)是一种严重的人兽共患病。作为布病的病原,布鲁菌能够耐受宿主体内的各种杀菌机制并持续的生存。当布鲁菌侵入宿主体内后,必须适应抗体免疫的环境,而这依赖于布鲁菌对自身基因表达的巧妙调控。Hfq蛋白是一个RNA伴侣分子,对于介导sRNA的转录后调控发挥着重要的作用。在多种细菌中,对Hfq蛋白的功能都进行了深入的研究,目前已经发现该蛋白与细菌基因的表达调控、细菌对多种应激环境的适应能力以及致病菌的毒力均有着密切的关系。论文对Hfq蛋白的结构,对sRNA的调控功能,特别是布鲁菌Hfq蛋白调控功能的研究现状及在布病疫苗研发中的应用进行系统的介绍,为布鲁菌基因的表达调控和布病防控技术的研究提供参考。 展开更多
关键词 布鲁菌 hfq蛋白 SRNA
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利用自杀载体构建布鲁氏菌hfq表位标记菌株 被引量：1
8
作者 崔明全 徐杰 +12 位作者 张婷婷 王同坤 尚伟 陈泽良 袁静 杜昕颖 汪舟佳 柯跃华 钟志军 苑锡铜 黄留玉 彭广能 王玉飞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期75-80,共6页
目的:建立一种利用自杀载体构建布鲁氏菌hfq表位标记菌株的方法。方法:在hfq的反向引物带上FLAG或HIS标签序列,以布鲁氏菌Brucella melitensis 16M为模板扩增出3'端带有标签的hfq标记盒。将其直接与布鲁氏菌的自杀载体pMD18-T vecto... 目的:建立一种利用自杀载体构建布鲁氏菌hfq表位标记菌株的方法。方法:在hfq的反向引物带上FLAG或HIS标签序列,以布鲁氏菌Brucella melitensis 16M为模板扩增出3'端带有标签的hfq标记盒。将其直接与布鲁氏菌的自杀载体pMD18-T vector连接,获得带有标签的标记载体,将载体转入布鲁氏菌感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得表位标签与目的基因C末端融合的重组子。利用RT-PCR和Western blot分析C末端融合了表位标签的目的蛋白的转录和表达的情况。结果:获得了布鲁氏菌的表位标记菌株16M-T-HfqFLAG和16M-T-HfqHIS。RT-PCR实验结果表明带有标签的hfq基因可以转录,Western blot实验结果证实利用针对FLAG或HIS标签的抗体能够检测到Hfq蛋白的表达。结论:利用自杀载体可以快速构建布鲁氏菌的表位标记菌株,这不仅为Hfq的功能研究奠定了基础,也为布鲁氏菌的基因功能研究提供了一个有价值的研究手段。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 自杀载体 表位标记 hfq
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大肠杆菌hfq和rne-710基因的双质粒无痕敲除技术 被引量：1
9
作者 王净 吕瑞辰 +1 位作者 韩延平 杨瑞馥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期602-612,共11页
基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并... 基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并连接至辅助质粒,缺失hfq和rne-710的片段经重组分别替换壮观霉素抗性盒,得到无痕敲除株Δhfq和Δrne-710。双质粒无痕敲除和融合PCR方法相结合为大片段基因缺失开辟了新的途径。 展开更多
关键词 大肠杆菌 hfq rne-710 双质粒无痕敲除 融合PCR Ⅰ-Sce Ⅰ内切酶
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细菌RNA结合蛋白Hfq研究进展 被引量：3
10
作者 郭英飞 袁玖云 +1 位作者 王玉飞 崔明全 《解放军预防医学杂志》 CAS 2015年第5期584-586,共3页
Hfq蛋白是细菌中重要的转录后调控子,参与调节细菌的生长、代谢、压力环境适应能力等多种生命活动,影响细菌的多种生理代谢过程。在致病菌中,Hfq蛋白与细菌的毒力密切相关。Hfq主要通过结合RNA来影响其稳定性,或者是通过辅助非编码小RNA... Hfq蛋白是细菌中重要的转录后调控子,参与调节细菌的生长、代谢、压力环境适应能力等多种生命活动,影响细菌的多种生理代谢过程。在致病菌中,Hfq蛋白与细菌的毒力密切相关。Hfq主要通过结合RNA来影响其稳定性,或者是通过辅助非编码小RNA(sRNA)与mRNA结合来调节靶基因的表达。文章对Hfq在致病菌中的作用及寻找Hfq靶标RNA的研究方法进行了综述,以期为Hfq的功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 hfq RNA结合蛋白 转录后调控 细菌毒力
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单核细胞增生李斯特菌sRNA伴侣分子hfq的基因克隆、表达及纯化
11
作者 彭叶龙 乔军 +6 位作者 孟庆玲 谢堃 陈诚 刘田莉 马玉 才学鹏 陈创夫 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期80-84,共5页
为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因,并纯化重组蛋白,通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因,将扩增产物克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a(+)中,成功... 为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因,并纯化重组蛋白,通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因,将扩增产物克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a(+)中,成功构建pET-32a(+)-hfq原核表达载体。然后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG进行诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析,并采用Ni-NTA纯化目的蛋白。结果显示:克隆的hfq基因全长234 bp,编码77个氨基酸,通过SDS-PAGE可以检测到27 kDa的蛋白特异性条带;并从上清中纯化得到了Hfq融合蛋白。为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 hfq基因 sRNA伴侣分子 克隆 表达 纯化
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分子伴侣hfq基因缺失对单核细胞增生李斯特菌毒力及生物被膜生成的影响 被引量：7
12
作者 卢海亭 乔军 +5 位作者 孟庆玲 彭叶龙 陈诚 刘田莉 才学鹏 陈创夫 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期94-98,共5页
为了解非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)分子伴侣蛋白Hfq在LM毒力中发挥的调控作用,在构建LM-Δhfq缺失株的基础上,通过动物攻毒试验检测野毒株LM-SB5与缺失株LM-Δhfq对昆明系小鼠的LD50,肝、脾载菌量及对肝、脾、肾的病理损伤;通过溶... 为了解非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)分子伴侣蛋白Hfq在LM毒力中发挥的调控作用,在构建LM-Δhfq缺失株的基础上,通过动物攻毒试验检测野毒株LM-SB5与缺失株LM-Δhfq对昆明系小鼠的LD50,肝、脾载菌量及对肝、脾、肾的病理损伤;通过溶血试验检测二者的溶血活性;通过结晶紫染色的方法检测二者的生物被膜生成能力。以分析hfq基因缺失对LM毒力及生物被膜生成的影响。结果显示,与LM-SB5相比,LM-Δhfq对小鼠的LD50升高了6.067倍,毒力显著降低;肝、脾载菌量在第2,4,5天显著下降(P<0.05),在第3天下降极显著(P<0.01);对肝、脾、肾的病理损伤也有所减弱,LM-Δhfq较LM-SB5溶血能力下降了2倍,生物被膜生成能力在24 h时显著降低(P<0.05)。研究结果证实,Hfq蛋白对LM的毒力及生物被膜生成能力具有重要调控作用。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 非编码RNA hfq基因 毒力
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副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株的构建与鉴定 被引量：6
13
作者 任梅渗 王印 +4 位作者 杨泽晓 姚学萍 曾相杰 冷依伊 张鹏飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期203-209,共7页
为构建副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株,以副猪嗜血杆菌S2261基因组为模板扩增Hfq基因的上、下游同源臂,用融合PCR的方法融合拼接两条同源臂。以Eco RⅠ+HindⅢ分别对融合片段与p K18mobSac B质粒进行双酶切并用T4 DNA连接酶连接以构建同源... 为构建副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株,以副猪嗜血杆菌S2261基因组为模板扩增Hfq基因的上、下游同源臂,用融合PCR的方法融合拼接两条同源臂。以Eco RⅠ+HindⅢ分别对融合片段与p K18mobSac B质粒进行双酶切并用T4 DNA连接酶连接以构建同源重组质粒p K18mob Sac B-Hfq-ud。以大肠杆菌S17-1-pir作为供体菌,副猪嗜血杆菌S2261作为受体菌,通过接合转移法成功构建了副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株。绘制了S2261野生株与Hfq缺失株的生长曲线以及测定了LD50,结果显示,相比于S2261野生株,Hfq缺失株在对数期的生长速度下降;S2261野生株与Hfq缺失株的LD50分别为2.9×108与3.16×1010CFU,这说明相比野生株,Hfq缺失株导致小鼠半数死亡所需的剂量显著升高,相对的其毒力则明显下降。药敏试验结果显示,Hfq缺失株对氧氟沙星和诺氟沙星的敏感性明显增加。以上结果说明在副猪嗜血杆菌中,Hfq基因对该菌的生长速度、毒力以及药物敏感性具有调控作用。这为副猪嗜血杆菌Hfq基因功能以及该菌相关的疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 hfq基因 基因缺失 接合转移
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ncRNA伴侣分子hfq基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境适应能力的影响 被引量：3
14
作者 卢海亭 乔军 +6 位作者 孟庆玲 彭叶龙 陈诚 刘田莉 谢堃 才学鹏 陈创夫 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1174-1178,共5页
Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌(LM)的生命活动.利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重组穿梭质粒,电转化至新疆野毒株LM-SB5感受态细胞后在42... Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌(LM)的生命活动.利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重组穿梭质粒,电转化至新疆野毒株LM-SB5感受态细胞后在42℃和氯霉素压力下进行同源重组,筛选LM-SB5 hfq基因缺失株,并分析hfq基因缺失株在不同温度、pH、高盐、乙醇、H_2O_2、Triton X-100胁迫环境下的适应能力.结果成功构建得到一株遗传性稳定的LM hfq基因缺失株LM-Δhfq;LM-Δhfq对5%NaCl、3.5%乙醇、0.1%H_2O_2的适应能力显著降低,对30℃、37℃、42℃、pH 4、pH 9及Triton X-100的适应能力没有显著变化,表明Hfq参与了LM对高盐、乙醇、H_2O_2胁迫环境的适应过程.本研究为进一步揭示Hfq蛋白在参与ncRNA调控细菌生命活动的机制奠定了基础. 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 非编码RNA hfq基因 同源重组 分子伴侣
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大黄鱼来源波罗的海希瓦氏菌SB-19的hfq基因功能分析 被引量：4
15
作者 江京洋 韦旭航 +2 位作者 朱军莉 吴敏 冯立芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第8期135-141,共7页
为分析大黄鱼来源波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)中分子伴侣Hfq的功能,对具有强致腐能力的波罗的海希瓦氏菌SB-19中hfq基因进行敲除,比较野生株(wide type,WT)和敲除株(knock out,KO)在生长速率、群体感应、抗逆境以及对灭菌鱼... 为分析大黄鱼来源波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)中分子伴侣Hfq的功能,对具有强致腐能力的波罗的海希瓦氏菌SB-19中hfq基因进行敲除,比较野生株(wide type,WT)和敲除株(knock out,KO)在生长速率、群体感应、抗逆境以及对灭菌鱼汁致腐效果的差异。结果表明:波罗的海希瓦氏菌SB-19中存在1个hfq基因,其基因表达水平随着细胞密度的增加而升高;在30℃培养条件下,WT株和KO株的生长速率接近,但在4℃培养条件下,与WT株相比,KO株的生长出现明显迟滞且稳定期的细胞密度较低;WT株与KO株分泌信号分子的能力相近,但KO株表现出较低的生物被膜形成能力和胞外蛋白酶活性,而且接种KO株的灭菌鱼汁也产生较少的挥发性盐基氮和三甲胺;此外,KO株对盐分、营养、重金属、消毒剂等胁迫条件更为敏感。上述结果表明Hfq参与波罗的海希瓦氏菌SB-19株的多种代谢调控,影响细菌的生长、群体感应、致腐能力、抗逆境能力等,即Hfq是一种全局性调控因子,整体调节波罗的海希瓦氏菌SB-19的诸多生理活动。本实验为波罗的海希瓦氏菌的基础生物学研究和海产品中微生物的致腐机制提供理论基础。 展开更多
关键词 大黄鱼 波罗的海希瓦氏菌 hfq 致腐 功能分析
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类鼻疽伯克霍尔德菌sRNA伴侣蛋白Hfq的表达与纯化 被引量：5
16
作者 陈垂这 吴文东 +5 位作者 瞿先华 叶锋钦 韩雨旋 董素芳 覃西 夏乾峰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期349-353,共5页
目的构建重组原核表达质粒,对类鼻疽伯克霍尔德菌分子伴侣Hfq蛋白进行高效表达和纯化。方法 PCR扩增类鼻疽伯克霍尔德菌hfq基因并克隆至pMD19-T克隆载体中,测序验证后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切pM D19T-hfq与pET30a(+),将目的基因片段插入含... 目的构建重组原核表达质粒,对类鼻疽伯克霍尔德菌分子伴侣Hfq蛋白进行高效表达和纯化。方法 PCR扩增类鼻疽伯克霍尔德菌hfq基因并克隆至pMD19-T克隆载体中,测序验证后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切pM D19T-hfq与pET30a(+),将目的基因片段插入含His标签序列的原核表达载体PET30a(+)中,构建重组表达质粒pET30a(+)-hfq,并转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因表达,采用SDS-PAGE与Western blot对表达蛋白进行鉴定,通过Ni 2+螯合柱对目的蛋白进行纯化。结果 PCR扩增出正确的hfq基因片段,大小为237bp,与预期值相符。亚克隆质粒与原核表达质粒载体连接后进行双酶切鉴定,重组质粒pET30a(+)-hfq构建正确。重组质粒转化DE3后经IPTG诱导5h,从细菌裂解液中检测到Hfq融合蛋白,分子质量单位(Mr)约为9.4×103。通过Ni 2+螯合柱纯化,获得单一SDS-PAGE条带的目的蛋白。结论 hfq基因原核表达质粒构建成功,Hfq在大肠埃希菌中成功表达,得到Ni 2+柱层析获得的高纯度的sRNA伴侣蛋白Hfq,为进一步筛选与该蛋白有相互作用的sRNA及sRNA功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 SRNA hfq蛋白 原核表达
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不同碳源对溶藻弧菌黏附相关表型的影响初探及Hfq对其的调控 被引量：4
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作者 邓益琴 赵哲 +1 位作者 刘松林 陈偿 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期99-107,共9页
为探讨不同碳源对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)黏附相关表型的影响及Hfq对其的调控作用,研究了D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-海藻糖和D-果糖对溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq缺失株及回补株的运动性、菌落形态、鞭毛、胞外多糖及生物膜合成的影... 为探讨不同碳源对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)黏附相关表型的影响及Hfq对其的调控作用,研究了D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-海藻糖和D-果糖对溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq缺失株及回补株的运动性、菌落形态、鞭毛、胞外多糖及生物膜合成的影响。研究结果显示,4种碳源均使溶藻弧菌群集运动(swarmming)显著增强(P<0.001),并受Hfq正调控;游动性(swimming)显著减弱(P<0.01),但不受Hfq调控;菌落变得褶皱,并受Hfq负调控;4种碳源不影响溶藻弧菌鞭毛及胞外多糖合成,但D-果糖使其生物膜合成减少,并受Hfq负调控。实验分析表明:4种碳源可能通过调控溶藻弧菌黏性阻力及能量代谢来调控其运动性;并可能通过调控胞外多糖分子结构及理化性质影响其菌落形态;另外,D-果糖在调控生物膜形成过程中具有重要作用;因此,添加不同碳源会影响溶藻弧菌黏附相关表型,可能影响其致病性,但具体调控机制需进一步研究。 展开更多
关键词 碳源 溶藻弧菌 hfq 黏附相关表型
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Hfq对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)毒力的调控分析 被引量：3
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作者 邓益琴 赵晶晶 +2 位作者 刘松林 赵哲 陈偿 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期604-611,共8页
为探讨分子伴侣Hfq对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)毒力的调控作用,本文分析了溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq突变株及回补株各项与毒力相关的生理生化指标。研究结果显示:在半固体和固体LBS平板中,缺失株游动和涌动能力显著降低(P<0.001... 为探讨分子伴侣Hfq对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)毒力的调控作用,本文分析了溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq突变株及回补株各项与毒力相关的生理生化指标。研究结果显示:在半固体和固体LBS平板中,缺失株游动和涌动能力显著降低(P<0.001);hfq缺失株生物膜合成速度及合成量降低,但解离速度增加;在限铁环境下,缺失株生长有所减弱;缺失株胞外蛋白酶分泌增强(P<0.01);同野生株和突变株相比,缺失株对小鼠成肌细胞系C2C12细胞几乎不致死,且其对石斑鱼的半数致死量提高3个数量级。实验结果表明:Hfq对溶藻弧菌毒力具有重要调控作用,并通过调控其运动、生物膜形成、铁代谢、胞外蛋白酶分泌等生理生化过程从而调控其毒力。本研究可为溶藻弧菌病害暴发的防治提供重要理论依据。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 hfq 毒力
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Hfq对伤寒沙门菌高渗应激早期基因表达的调节 被引量：2
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作者 谢新民 李安平 +4 位作者 杜鸿 茅凌翔 罗哲 王敏 黄新祥 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第1期1-5,共5页
目的:探查伤寒沙门菌hfq基因在高渗应激早期对其他基因表达的影响。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株;利用伤寒沙门菌全基因组芯片技术,比较伤寒沙门菌野生株和hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期的基... 目的:探查伤寒沙门菌hfq基因在高渗应激早期对其他基因表达的影响。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株;利用伤寒沙门菌全基因组芯片技术,比较伤寒沙门菌野生株和hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期的基因表达谱差异,并选择部分表达差异基因进行实时定量PCR验证。结果:伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株制备成功;基因表达谱比较分析结果表明伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期有62个基因表达上调,有32个基因表达下调。实时定量PCR结果与芯片分析一致。结论:Hfq作为一个调节因子在伤寒沙门菌高渗应激早期对基因表达起重要调节作用。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 hfq 高渗应激 基因芯片分析
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鹅源鼠伤寒沙门菌crp、hfq基因缺失株的构建及生物学特性分析 被引量：5
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作者 李仕楷 刘佳琪 +6 位作者 李荣旭 苏文楠 陈亦杏 郑炜鸿 朱婉君 陈济铛 张济培 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期17-24,共8页
为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定... 为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定。通过细菌培养,对各菌株生物学特性进行比较;通过PCR鉴定各菌株的遗传稳定性;采用K-B纸片扩散法检测各菌株的药物敏感性;将各菌株纯培养物经腹腔注射4周龄小鼠,测定各菌株对小鼠的毒力,并观察感染后小鼠的临床症状及各组织剖检病变与组织病理变化。PCR和测序结果表明,正确构建各基因缺失株和相应回补株。生物学特性试验结果显示,与亲本株相比,A29Δcrp菌落直径极显著变小(P<0.001),不产酸、不产生H_(2)S,菌体极显著变短(P<0.001);A29Δhfq菌落边缘不整齐,不产生H_(2)S,菌体极显著变长(P<0.001),表明crp、hfq基因影响细菌的菌落形态、生化特性和形态特征。菌株遗传稳定试验结果显示,菌株传至60代时,基因缺失株仍能够稳定缺失。药敏试验结果显示,与亲本株比较,A29Δcrp对氨基糖苷类、碳青霉烯类、环丙沙星、甲氧苄啶、阿奇霉素等药物的敏感性降低,对四环素类药物的敏感性增强,A29Δhfq对除青霉素类、头孢唑啉以外的12种药物的敏感性增强。小鼠毒力试验结果显示,与亲本株的LD_(50)(2.479×10^(4)cfu)相比,A29Δcrp的LD_(50)(5.379×10^(5) cfu)和A29Δhfq的LD_(50)(5.012×106 cfu)均明显上升。各菌株感染小鼠后的临床症状及各组织剖检病变基本一致;组织病理变化观察显示,与亲本株相比,A29Δcrp组小鼠肝组织可见多量大小不一的坏死灶,脾组织红髓面积增大、白髓面积减小,A29Δhfq对小鼠脾脏、肝脏及脑组织损伤均较小。本研究为探究鼠伤寒沙门菌crp和hfq基因功能奠定了基础,同时也为进一步研发鹅沙门菌病疫苗提供了参考依据。 展开更多
关键词 鹅源鼠伤寒沙门菌 基因敲除 crp基因 hfq基因 生物学特性
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