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汉麻多肽对Hep3B细胞增殖抑制作用及氨基酸序列分析
1
作者 魏连会 石杰 +1 位作者 李国巍 董艳 《农产品加工》 2025年第1期57-61,67,共6页
采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶法水解汉麻粕获得汉麻多肽,经膜分离技术得到分子质量小于2 ku的多肽组分。采用MTT法检测汉麻多肽对体外培养的人肝癌Hep3B细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜及流式细胞仪观察分析其对肝癌Hep3B细胞... 采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶法水解汉麻粕获得汉麻多肽,经膜分离技术得到分子质量小于2 ku的多肽组分。采用MTT法检测汉麻多肽对体外培养的人肝癌Hep3B细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜及流式细胞仪观察分析其对肝癌Hep3B细胞的形态、细胞凋亡及细胞周期的影响。利用液相色谱质谱技术对抗肝癌Hep3B细胞增殖活性肽组分进行氨基酸序列分析。结果表明,不同质量浓度的汉麻多肽能够抑制人肝癌Hep3B细胞的生长,且抑制率随汉麻多肽质量浓度的增加而升高。随着汉麻多肽质量浓度的增加,贴壁细胞数量逐渐减少,细胞变圆,且部分细胞核出现浓缩。流式细胞术分析结果表明,汉麻多肽主要将Hep3B细胞阻滞在G2/M期,诱导肝癌Hep3B细胞凋亡,进而抑制肝癌细胞增殖。汉麻多肽活性组分中丰度较高的5个峰对应的肽段氨基酸序列为LPSF,NQANQLDQFSR,FEW,GQNDDRNSIIR,DNGRNVFDGELR,汉麻多肽具有抗肝癌细胞增殖作用。 展开更多
关键词 汉麻多肽 hep3b细胞 细胞凋亡 细胞周期
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莪术醇促进XL413诱导的衰老Hep3B细胞凋亡
2
作者 铁松艳 童天昊 +1 位作者 李鑫 曹建中 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第8期1470-1478,共9页
目的探讨莪术醇(curcumol,Cur)对XL413诱导的衰老Hep3B细胞凋亡影响。方法XL413诱导肝癌Hep3B细胞株构建衰老模型,给予Cur干预。CCK-8及Incucyte检测细胞增殖能力。β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况。RT-... 目的探讨莪术醇(curcumol,Cur)对XL413诱导的衰老Hep3B细胞凋亡影响。方法XL413诱导肝癌Hep3B细胞株构建衰老模型,给予Cur干预。CCK-8及Incucyte检测细胞增殖能力。β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况。RT-qPCR检测SASP因子IL-6、IL-8、CXCL10 mRNA表达水平。Western blot检测细胞p16、PI3K、p-PI3K、Akt、p-AKT、Bax和Bcl-2表达水平,并计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及Bcl-2/Bax比值。结果XL413干预后,SA-β-gal蓝染细胞比例及p16蛋白表达较空白组明显升高(P<0.05),提示细胞衰老模型构建成功。CCK-8显示,Cur干预Hep3B细胞24 h、48 h、72 h的IC 50分别是106.40、54.67及31.87μmol·L^(-1)。Incucyte细胞增殖检测显示,XL413干预后细胞增殖速度明显慢于空白组(P<0.05),Cur干预后其增殖速度进一步减慢(P<0.05),细胞蓝染比例明显低于XL413组(P<0.05),且呈浓度依赖性。Cur组细胞凋亡比例明显高于XL413组(P<0.05),且呈浓度依赖性。Cur干预后IL-6、IL-8、CXCL10 mRNA表达水平及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均较XL413组明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。Cur组Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低、Bcl-2/Bax比值减小(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论Cur能够清除XL413诱导的衰老Hep3B细胞,降低其SASP表达,促进其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 莪术醇 XL413 肝癌 hep3b细胞 细胞衰老 细胞凋亡
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双硫仑联合二价铜离子诱导铜死亡抑制肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭 被引量：2
3
作者 唐敏 黄娟婵 +2 位作者 韦杏雯 罗雪文 赵伟 《中国癌症防治杂志》 CAS 2024年第4期417-423,共7页
目的探讨双硫仑(disulfiram,DSF)联合二价铜离子(Cu^(2+))对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养肝癌Hep3B细胞,分别采用DSF(30 nmol/L)溶液、Cu^(2+)(1μmol/L)溶液和铜螯合剂四硫代钼酸铵(ammonium tetrathiomo... 目的探讨双硫仑(disulfiram,DSF)联合二价铜离子(Cu^(2+))对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养肝癌Hep3B细胞,分别采用DSF(30 nmol/L)溶液、Cu^(2+)(1μmol/L)溶液和铜螯合剂四硫代钼酸铵(ammonium tetrathiomolybdateⅥ,ATTM)(30 nmol/L)溶液单独或联合干预,以二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)(30 nmol/L)作用的细胞为对照组。分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力;采用免疫荧光实验检测细胞中铜死亡相关蛋白二氢硫辛酰胺-S-乙酰转移酶(dihydrolipoamide S-acetyltransferase,DLAT)和铁氧还蛋白1(ferredoxin 1,FDX1)的表达。结果与对照组相比,DSF、Cu^(2+)单独或联合干预后Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭能力均下降(均P<0.05),其中DSF+Cu^(2+)联合干预的细胞增殖、迁移和侵袭能力下降更加显著(均P<0.0001)。在DSF联合Cu^(2+)的基础上加入ATTM后逆转了DSF联合Cu^(2+)对Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,其增殖、迁移以及侵袭能力较DSF+Cu^(2+)组增强(均P<0.05)。与对照组相比,DSF、Cu^(2+)单独干预后铜死亡相关蛋白DLAT和FDX1的荧光强度改变并不明显,但Cu^(2+)联合DSF后DLAT蛋白的荧光强度增加而FDX1蛋白的荧光强度减弱,加入ATTM后则逆转了DLAT和FDX1蛋白的表达趋势。结论DSF联合Cu^(2+)能抑制肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能是通过诱导铜死亡的发生实现。 展开更多
关键词 肝癌 hep3b细胞 双硫仑 铜死亡 增殖 迁移 侵袭
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2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮诱导Hep3B人肝癌细胞凋亡的机制
4
作者 刘晓冬 韩英浩 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期77-83,107,共8页
近年来,紫草萘醌类衍生物因其临床应用受到副作用的限制。为寻找副作用小疗效高的新型抗肿瘤药物,合成了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮,并对其化学结构进行了鉴定。同时研究了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-... 近年来,紫草萘醌类衍生物因其临床应用受到副作用的限制。为寻找副作用小疗效高的新型抗肿瘤药物,合成了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮,并对其化学结构进行了鉴定。同时研究了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮对人肝癌细胞活力、凋亡的影响及其潜在机制。研究结果表明,通过MTT检测其细胞活力,发现2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮显著降低了人肝癌细胞系的细胞活力。蛋白免疫印迹结果表明,该化合物可通过上调Cle-caspase3、Bad和Bax凋亡相关蛋白表达水平来诱导肝癌细胞Hep3B凋亡。为进一步检测2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮诱导Hep3B细胞发生凋亡的原因,使用荧光探针JC-1检测了2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮处理后Hep3B细胞内线粒体膜电位的变化。结果发现,与对照组相比,药物处理组线粒体膜电位显著下降,绿色荧光增强,红色荧光减弱,说明2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮能通过线粒体损伤来诱导Hep3B细胞凋亡。由于2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮显著诱导Hep3B细胞凋亡。因此,2-(4-甲氧基-苯巯基)-5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮具有良好的抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 2-(4-甲氧基-苯巯基)-5 8-二甲氧基萘-1 4-二酮 hep3b细胞系 细胞活力 细胞凋亡
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齐墩果酸对肝癌细胞Hep3B增殖和凋亡的作用研究 被引量：14
5
作者 黄开顺 朱链链 +4 位作者 刘丹 邹黎 雷琪 葛蹼 陈志琼 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期531-534,共4页
目的研究齐墩果酸对人肝癌细胞株Hep3B增殖和凋亡的影响及其与细胞内钙离子浓度{[Ca2+]i}关系。方法将浓度分别为40、80、100μg/ml齐墩果酸作用于肝癌Hep3B细胞24 h以后,DAPI染色,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞形态变化;以11组不... 目的研究齐墩果酸对人肝癌细胞株Hep3B增殖和凋亡的影响及其与细胞内钙离子浓度{[Ca2+]i}关系。方法将浓度分别为40、80、100μg/ml齐墩果酸作用于肝癌Hep3B细胞24 h以后,DAPI染色,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞形态变化;以11组不同浓度齐墩果酸(5～400μg/ml)作用Hep3B细胞24 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hep3B细胞增殖情况;分别以不同浓度齐墩果酸(80、100、150μg/ml)作用Hep3B细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期变化、细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度;对钙离子荧光强度与细胞凋亡率进行相关性分析。结果各处理组Hep3B细胞出现凋亡;不同浓度齐墩果酸能够抑制肝癌细胞Hep3B增殖,且在5～100μg/ml范围内呈剂量依赖性,药物作用细胞24、48 h的IC50分别为86.04、93.29μg/ml;各处理组细胞周期在G2/M期产生阻滞、[Ca2+]i较对照组显著增加(P<0.05),细胞凋亡率和[Ca2+]i增加与药物浓度呈依赖关系;钙离子荧光强度与细胞凋亡率之间存在线形相关性(P<0.05)。结论齐墩果酸能够抑制肝癌Hep3B细胞株增殖,可能通过上调[Ca2+]i诱导其凋亡。 展开更多
关键词 齐墩果酸 肝癌细胞hep3b 细胞周期 细胞凋亡 细胞内钙离子浓度
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藏族药翼首草正丁醇部位提取物体外抑制人肝癌Hep3B细胞增殖和侵袭转移 被引量：13
6
作者 郭晨旭 吴迎春 +4 位作者 朱元章 田丽莉 陆怡 韩聪 朱国福 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期100-105,共6页
目的：本研究旨在体外筛选出藏族药翼首草正丁醇部位提取物（YSC-ZDC）抑制人肝癌Hep3B细胞侵袭转移的有效萃取部位,并对其抗肿瘤作用机制进行初步探讨。方法：取对数生长期Hep3B细胞,调整细胞密度为4×10^4/m L（MTT法）或2.5×... 目的：本研究旨在体外筛选出藏族药翼首草正丁醇部位提取物（YSC-ZDC）抑制人肝癌Hep3B细胞侵袭转移的有效萃取部位,并对其抗肿瘤作用机制进行初步探讨。方法：取对数生长期Hep3B细胞,调整细胞密度为4×10^4/m L（MTT法）或2.5×105/m L（Western blot,heochst 33258实验）,1×10^5/m L（划痕实验）,5×10^4/m L（Transwell实验）,培养24,48,72 h后分别加入不同质量浓度的药物（50,100,200 mg·L^-1）,分组设3-4个复孔。通过MTT法检测YSC-ZDC对于Hep3B细胞增殖的影响,形态观察该药对Hep3B细胞凋亡的影响。划痕实验和Transwell小室检测YSC-ZDC对Hep3B细胞侵袭、迁移的影响;Western blot检测侵袭转移相关信号通路分子表达的变化。结果：YSC-ZDC 50,100,200 mg·L^-1作用于Hep3B细胞24,48,72 h后可明显抑制其增长。50,100,200 mg·L^-1YSC-ZDC作用于Hep3B细胞24 h后可明显抑制其侵袭和迁移;YSC-ZDC可明显影响上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-钙黏素,N-钙黏素（E-cadherin,N-cadherin）和纤维连接蛋白（FN）的表达（P〈0.05）。结论：YSC-ZDC能显著抑制Hep3B细胞的增殖和侵袭转移,并诱导Hep3B细胞凋亡,其作用机制可能与EMT有关。 展开更多
关键词 翼首草 hep3b细胞 侵袭 转移 上皮-间质转化
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舒芬太尼抑制肝癌Hep3B细胞活性及促进凋亡作用 被引量：6
7
作者 高巍 张晓琪 +3 位作者 景桂霞 宋平义 南克俊 沙保勇 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期479-482,共4页
目的探讨舒芬太尼对肝癌Hep3B细胞活性的影响及相关机制。方法以Hep3B肝癌细胞为研究对象,经不同浓度(0.01、0.1、1、5、10、15μmol/L)舒芬太尼处理后,MTT法观察细胞活性的改变,流式细胞仪及AnnexinV/PI双标记染色检测Hep3B细胞周期及... 目的探讨舒芬太尼对肝癌Hep3B细胞活性的影响及相关机制。方法以Hep3B肝癌细胞为研究对象,经不同浓度(0.01、0.1、1、5、10、15μmol/L)舒芬太尼处理后,MTT法观察细胞活性的改变,流式细胞仪及AnnexinV/PI双标记染色检测Hep3B细胞周期及凋亡的变化,Western blot检测survivin及caspase-3蛋白的表达。结果随着舒芬太尼浓度的增加,肝癌细胞活性降低,细胞周期停滞在G0/G1期,细胞凋亡增多,survivin蛋白表达量降低,caspase-3蛋白表达量升高。结论舒芬太尼能通过改变肝癌细胞的细胞周期,促进细胞凋亡,改变survivin和caspase-3蛋白的表达,抑制Hep3B细胞的活性。 展开更多
关键词 舒芬太尼 肝癌hep3b细胞 细胞活性 凋亡 SURVIVIN CASPASE-3
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不同浓度槲皮素对人肝癌细胞株Hep3B、Huh7细胞凋亡的影响 被引量：14
8
作者 陈兆勋 高彦宇 李冀 《中医杂志》 CSCD 北大核心 2015年第12期1051-1053,共3页
目的观察不同浓度槲皮素对人肝癌细胞株Hep3B、Huh7凋亡的影响。方法将人肝癌细胞株Hep3B、Huh7分别种植于96孔板中,每孔2×105个细胞,设6个复孔,放入37℃、5%CO2培养箱中培养至贴壁生长。加入不同浓度槲皮素(0、10、50、100μM)干... 目的观察不同浓度槲皮素对人肝癌细胞株Hep3B、Huh7凋亡的影响。方法将人肝癌细胞株Hep3B、Huh7分别种植于96孔板中,每孔2×105个细胞,设6个复孔,放入37℃、5%CO2培养箱中培养至贴壁生长。加入不同浓度槲皮素(0、10、50、100μM)干预,48 h后用胰蛋白酶收集细胞,利用流式细胞仪分析不同浓度槲皮素干预下Hep3B、Huh7细胞周期分布情况。结果槲皮素浓度为10、50、100μM时,Hep3B和Huh7在Pre-G0期随浓度增加所占百分比升高,并且以100μM时所占百分比最高(P<0.01),而在不同浓度槲皮素干预下的G1期、S期和G2/M期时Hep3B和Huh7所占百分比显著降低(P<0.01)。结论槲皮素可诱导人肝癌细胞株Hep3B、Huh7的凋亡,并且以浓度为100μM时效果最好。 展开更多
关键词 槲皮素 肝癌 hep3b HUH7 细胞凋亡 细胞周期
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汉防己碱对肝癌Hep3b细胞生长的双向作用 被引量：5
9
作者 蒋心惠 黄开顺 +2 位作者 滕永真 何百成 周岐新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期1281-1284,共4页
目的考察汉防己碱(tetrandrine,Tet)对肝癌Hep3b和Hep3b/5-Fu细胞生长的影响。方法采用体外细胞培养,结合流式细胞术、MTT和Western blot方法研究Tet(0.33～1.0μg/ml)对肝癌Hep3b及Hep3b/5-Fu细胞生长的作用特点。结果 Tet在0.33～1.0... 目的考察汉防己碱(tetrandrine,Tet)对肝癌Hep3b和Hep3b/5-Fu细胞生长的影响。方法采用体外细胞培养,结合流式细胞术、MTT和Western blot方法研究Tet(0.33～1.0μg/ml)对肝癌Hep3b及Hep3b/5-Fu细胞生长的作用特点。结果 Tet在0.33～1.0μg/ml时呈浓度依赖性降低Hep3b细胞存活率;0.5和1.0μg/ml显著提高5-Fu对Hep3b细胞的IC50,但降低5-Fu对Hep3b/5-Fu细胞的IC50;0.33μg/ml的Tet明显增加cDDP对Hep3b/5-Fu细胞的IC50,而0.5和1.0μg/ml显著降低cDDP对Hep3b/5-Fu细胞的IC50(P<0.01)。1.0μg/ml的Tet作用48 h后使Hep3b细胞中的P-gp和MRP1表达明显上调(P<0.05)。Tet单用对Hep3b细胞生长有一定抑制作用,高浓度Tet逆转Hep3b/5-Fu细胞对5-Fu耐药和增强cDDP对Hep3b/5-Fu细胞生长的抑制作用,但低浓度分别促进Hep3b细胞和Hep3b/5-FU细胞对5-Fu和cDDP耐药。结论 Tet对Hep3b和Hep3b/5-Fu细胞生长呈浓度相关的双向作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关。 展开更多
关键词 汉防己碱 肝癌hep3b细胞 逆转耐药性 促进耐药
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丙型肝炎病毒NS4B蛋白调控Hep3B细胞非折叠蛋白质反应研究 被引量：3
10
作者 张艳妮 张庆华 +3 位作者 陈瑶 刘好桔 刘志文 孔令保 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期165-169,共5页
研究表达的丙型肝炎病毒(HCV)NS4B对Hep3B细胞非折叠蛋白质反应的影响。NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染Hep3B细胞,G418筛选和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内XBP1 mRNA剪接,Western blot鉴... 研究表达的丙型肝炎病毒(HCV)NS4B对Hep3B细胞非折叠蛋白质反应的影响。NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染Hep3B细胞,G418筛选和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内XBP1 mRNA剪接,Western blot鉴定ATF6蛋白切割,荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78和XBP1启动子活性。G418筛选和Western Blot鉴定证实获得稳定表达NS4B的Hep3B细胞;在该细胞内,XBP1 mRNA剪接、ATF6切割、XBP1和Grp78启动子激活均被检测到。NS4B在Hep3B的稳定表达诱导了非折叠蛋白质反应。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS4B hep3b 非折叠蛋白质反应
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HCAP1两种基因型对肝癌细胞系Hep3B基因表达的影响 被引量：3
11
作者 王俊茹 覃文新 +4 位作者 何祥火 潘勇 胡建 万大方 顾健人 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1173-1181,共9页
背景与目的:HCAP1(HCC-associatedprotein1)基因是我们室克隆的一个新基因,HCAP1基因有N和M两种基因型,本研究旨在探讨HCAP1N和HCAP1M基因型对肝癌细胞基因表达的影响。方法:用脂质体转染试剂,将HCAP1M与HCAP1N分别转染Hep3B-Tet-on肝... 背景与目的:HCAP1(HCC-associatedprotein1)基因是我们室克隆的一个新基因,HCAP1基因有N和M两种基因型,本研究旨在探讨HCAP1N和HCAP1M基因型对肝癌细胞基因表达的影响。方法:用脂质体转染试剂,将HCAP1M与HCAP1N分别转染Hep3B-Tet-on肝细胞性肝癌细胞株;为了获得高诱导表达HCAP1N或HCAP1M的细胞株,通过Westernblot方法筛选被转染的细胞。然后,通过人cDNAarray膜片杂交技术分析HCAP1N或HCAP1M诱导表达前后的细胞基因表达谱。杂交结果用复日Smartview2001图像分析软件进行分析比较。结果:建立了HCAP1N和HCAP1M过表达前后的差异基因表达谱。结果表明HCAP1M过表达引起参与细胞增殖的基因表达上调(如c-erbB2受体和转录因子DP2),以及起凋亡作用基因(caspase9)及DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达下调;而HCAP1N过表达引起抑制细胞生长基因(如snoN和WAF1)和DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达上调,以及抗凋亡基因(HSPs)的表达下调。结论:HCAP1M基因过表达可能促进细胞过度增殖,HCAP1N过表达可能抑制细胞生长。 展开更多
关键词 HCAP1 基因型 肝癌细胞系 hep3b基因 表达
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丙型肝炎病毒NS5B在Hep3B细胞的表达及活性分析 被引量：2
12
作者 孔令保 刘志文 +2 位作者 吴晓玉 刘好桔 王园秀 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期54-56,共3页
目的丙型肝炎病毒NS5B基因转染人肝癌细胞系Hep3B细胞,检测NS5B的表达与细胞内RNA聚合酶活性。方法使用脂质体把包含全长丙型肝炎病毒NS5B基因的重组载体pcDNA-5B转染到Hep3B细胞。RT-PCR和Wes-tern blot鉴定NS5B基因的表达,荧光素酶检... 目的丙型肝炎病毒NS5B基因转染人肝癌细胞系Hep3B细胞,检测NS5B的表达与细胞内RNA聚合酶活性。方法使用脂质体把包含全长丙型肝炎病毒NS5B基因的重组载体pcDNA-5B转染到Hep3B细胞。RT-PCR和Wes-tern blot鉴定NS5B基因的表达,荧光素酶检测NS5B的细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结果RT-PCR和Westernblot发现转染NS5B基因的Hep3B细胞产生NS5B mRNA和NS5B蛋白,荧光素酶分析表明Hep3B细胞表达的NS5B蛋白具有细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论人肝癌细胞系Hep3B细胞可以成功表达NS5B基因,且表达的NS5B蛋白具备细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS5B hep3b细胞 活性
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大黄素在体外诱导人肝癌Hep3b细胞凋亡的作用及机制 被引量：10
13
作者 倪华 王钦 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2017年第14期3434-3436,共3页
目的了解大黄素在体外诱导人肝癌Hep3b细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度大黄素对人肝癌Hep3b细胞的抑制作用,不加大黄素作为对照组;采用流式细胞仪检测大黄素作用后的Hep3b细胞的增殖周期,计算细胞增殖指数(PI);Wester... 目的了解大黄素在体外诱导人肝癌Hep3b细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度大黄素对人肝癌Hep3b细胞的抑制作用,不加大黄素作为对照组;采用流式细胞仪检测大黄素作用后的Hep3b细胞的增殖周期,计算细胞增殖指数(PI);Western印迹法检测Hep3b细胞凋亡相关蛋白AKT、Bcl-2、p-AKT和酶切caspase-3的相对表达量。结果 1、5、25、125μmol/L大黄素作用24 h后的OD值均低于对照组(t=1.694、6.129、13.400、34.739,P均<0.05);随着大黄素浓度的升高,它对Hep3b细胞的抑制率呈上升趋势;作用24 h时,大黄素对Hep3b细胞的半抑制浓度(IC50)为21.08μmol/L。25、125μmol/L大黄素作用24、36 h后,Hep3b细胞的G_0/G_1期比例增高(P<0.05),S期比例、PI降低(P<0.05),因而表现出浓度、时间依赖性。大黄素作用时间增加后,抑制细胞凋亡的Bcl-2(24 h:t=2.610;36 h:t=5.713)、p-AKT蛋白(12 h:t=2.075,24 h:t=5.157;36 h:t=12.926)的表达量呈下降趋势(P均<0.05),促进细胞凋亡的酶切caspase-3蛋白的表达量呈上升趋势(6、12、24、36 h:t=2.487、3.327、5.276、8.137,P均<0.05)。结论大黄素在体外通过诱导细胞凋亡而抑制人肝癌Hep3b细胞的增殖,大黄素是通过AKT信号途径诱导Hep3b细胞凋亡。 展开更多
关键词 大黄素 人肝癌hep3b细胞 肝癌 抑制率 细胞凋亡
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p53转染对肝癌细胞系Hep3B的作用 被引量：1
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作者 韩雨生 梁力建 +1 位作者 黄洁夫 刘予川 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第6期652-656,共5页
目的 :研究野生型和突变型 p5 3基因cDNA转染对肝癌细胞系Hep3B的作用。 方法 :通过采用脂质体介导转染技术 ,将野生型、突变型 p5 3的真核表达重组质粒和空载体质粒分别导入一种p5 3和Rb基因缺失的肝癌细胞系Hep3B。 结果 :经G418筛选... 目的 :研究野生型和突变型 p5 3基因cDNA转染对肝癌细胞系Hep3B的作用。 方法 :通过采用脂质体介导转染技术 ,将野生型、突变型 p5 3的真核表达重组质粒和空载体质粒分别导入一种p5 3和Rb基因缺失的肝癌细胞系Hep3B。 结果 :经G418筛选获得稳定的整合了野生型 p5 3的克隆 (wide typep5 3 ,wt p5 3 )、突变型 p5 3克隆 (trans doninantnegativep5 3 ,TDNp5 3 )和空载体克隆 (pNeo)。经Northern和Western印迹鉴定 ,wt p5 3、TDNP5 3细胞表达 p5 3 ;wt p5 3细胞的p2 1waf1 /cip1 蛋白表达水平升高。wt p5 3细胞生长较TDNP5 3、pNeo细胞缓慢 ,但不出现凋亡。采用 0 .2 μg/ml阿霉素诱导这三组转染细胞 ,wt p5 3细胞出现明显的凋亡。 结论 :转染野生型p5 3的Hep3B细胞的p5 3基因具有转录活性 。 展开更多
关键词 肝细胞癌 P53基因 基因转染 hep3b 细胞凋亡
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葡萄籽提取物原花青素通过LncRNA NBR2/miR-650调节EMT抑制肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭的分子机制 被引量：5
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作者 雷洁琼 田迎霞 +1 位作者 李正果 王兴东 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期4307-4312,共6页
目的探讨葡萄籽提取物原花青素是否通过长链非编码RNA(LncRNA)NBR2/微小RNA(miR)-650并调节上皮间充质转化(EMT)来影响肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移和侵袭。方法将肝癌细胞Hep3B分为NC组(未处理),低、中、高剂量组(给予25、50、100μg/ml... 目的探讨葡萄籽提取物原花青素是否通过长链非编码RNA(LncRNA)NBR2/微小RNA(miR)-650并调节上皮间充质转化(EMT)来影响肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移和侵袭。方法将肝癌细胞Hep3B分为NC组(未处理),低、中、高剂量组(给予25、50、100μg/ml葡萄籽提取物原花青素),si-NC组,si-LncRNA NBR2组,si-NC+高剂量组、si-LncRNA NBR2+高剂量组,anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,anti-miR-650+si-LncRNA NBR2+高剂量组。采用Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、EMT过程E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK)-8、Transwell法和定量RT-PCR(qRT-PCR)分析细胞增殖、迁移、侵袭与LncRNA NBR2、miR-650的表达。双荧光素酶活性检测LncRNA NBR2和miR-650的靶向结合。结果低、中、高剂量组葡萄籽提取物原花青素作用的肝癌细胞Hep3B CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量、增殖能力、迁移数量、侵袭数量、miR-650表达量均低于NC组,LncRNA NBR2表达量高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组葡萄籽提取物原花青素作用的肝癌细胞Hep3B细胞中E-Cadherin蛋白表达量高于NC组,N-Cadherin、Vimentin蛋白表达量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-LncRNA NBR2组的肝癌细胞Hep3B细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量、增殖能力、迁移和侵袭数量均比si-NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。si-LncRNA NBR2+高剂量组肝癌细胞Hep3B细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达量、增殖能力、迁移和侵袭数量均高于si-NC+高剂量组,E-Cadherin蛋白表达量低于si-NC+高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA NBR2靶向调控miR-650的表达。anti-miR-650+si-LncRNA NBR2+高剂量组肝癌细胞Hep3B CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin、Vimentin蛋白、LncRNA NBR2表达量及增殖能力、迁移和侵袭数量均低于anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,E-Cadherin蛋白表达量高于anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄籽提取物原花青素通过上调LncRNANBR2靶向下调miR-650并调节EMT,来抑制肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 葡萄籽提取物原花青素 肝癌细胞hep3b 恶性行为 长链非编码RNA(LncRNA)NBR2 miR-650 上皮间充质转化(EMT)
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人参皂苷Rg3联合奥沙利铂对肝癌Hep3B细胞株增殖及凋亡的影响 被引量：1
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作者 孙海凤 郭亚焕 +5 位作者 经里 赵征 苏智祥 雷宝霞 焦敏 南克俊 《疑难病杂志》 CAS 2015年第9期963-966,共4页
目的探讨人参皂苷Rg3(GS-Rg3)、奥沙利铂(L-OHP)单药及联合作用对肝癌Hep3B细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法培养Hep3B细胞株,采用不同浓度GS-Rg3(12.5、25.0、50.0、100.0μmol/L)(G组)、LOHP(1.25、2.50、5.00、10.00 mg/L)(O组... 目的探讨人参皂苷Rg3(GS-Rg3)、奥沙利铂(L-OHP)单药及联合作用对肝癌Hep3B细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法培养Hep3B细胞株,采用不同浓度GS-Rg3(12.5、25.0、50.0、100.0μmol/L)(G组)、LOHP(1.25、2.50、5.00、10.00 mg/L)(O组)单药及联合应用(L组)进行干预,并设空白对照组(C组),MTt法观察各组对Hep3B细胞株生长的抑制作用;采用流式细胞仪检测上述药物单独或联合应用对Hep3B细胞株凋亡率的影响。结果GS-Rg3、L-OHP单药及联合采用对Hep3B细胞株的抑制作用均呈明显的时间与浓度依赖关系,O组较G组抑制率高,且与O组、G组比较,L组抑制率更高(P<0.05)。与C组比较,G组、O组、L组细胞凋亡率均增高(P<0.05),O组高于G组,且C组均高于O组、G组(P<0.05)。与GS-Rg3组比较,L-OHP组对Hep3B细胞株的抑制率及诱导凋亡率均较高(P<0.05)。结论 GS-Rg3、L-OHP能够抑制肝癌Hep3B细胞株增殖并诱导凋亡,两药联合有协同作用,且西药L-OHP抗增殖效应和诱导凋亡作用,均比中药GS-Rg3强。 展开更多
关键词 人参皂苷RG3 奥沙利铂 hep3b细胞株 增殖 凋亡
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六神丸和砷化合物对人肝癌Hep3B细胞增殖的影响 被引量：3
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作者 梁世霞 刘正芸 +5 位作者 余丽梅 刘云 郭静 贾智诚 拓军雄 刘杰 《合肥医学院学报》 2016年第6期558-562,共5页
目的中药六神丸(LSW)含雄黄(As_4S_4)。近年研究表明砷化合物对血液肿瘤有显著的抑制作用,但其对实体瘤的作用报道少。故我们就六神丸和砷化合物[Na_2HAsO_4(As^(5+))、NaAsO_2(As^(3+))、As_2O_3、As_4S_4和As_2S_2]对人肝癌Hep3B细胞... 目的中药六神丸(LSW)含雄黄(As_4S_4)。近年研究表明砷化合物对血液肿瘤有显著的抑制作用,但其对实体瘤的作用报道少。故我们就六神丸和砷化合物[Na_2HAsO_4(As^(5+))、NaAsO_2(As^(3+))、As_2O_3、As_4S_4和As_2S_2]对人肝癌Hep3B细胞的抗肿瘤作用进行了研究。方法采用MTS法检测六神丸、雄黄及其他含砷化合物对人肝癌Hep3B细胞的杀灭作用,通过原子吸收光谱测定各砷化合物中砷(As)的溶出度;流式细胞仪检测药物对细胞周期和细胞凋亡的影响;荧光定量PCR检测相关基因的表达。结果六神丸中As的溶出度高于雄黄和As_2S_2,但低于亚砷酸钠(As^(3+))、砷酸钠(As^(5+))和As_2O_3。六神丸对Hep3B有较好的抑制增殖和杀灭作用其作用仅次于亚砷酸钠。六神丸可诱导Hep3B细胞凋亡,作用机制与降低Bcl-2及Bcl-w的表达有关,并降低ABCG2、VEGF(血管内皮生长因子)和肿瘤转移相关基因MMP-9的表达。但六神丸对细胞周期无明显影响。结论六神丸通过多途径对肝癌Hep3B细胞具有明显的抗增殖作用。 展开更多
关键词 六神丸 抗肿瘤 hep3b细胞 砷化合物 凋亡
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蜂毒素基因重组腺病毒对人肝癌Hep3B细胞增殖抑制作用 被引量：1
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作者 李柏 张晨 +3 位作者 李绍祥 顾伟 万旭英 凌昌全 《中医药学刊》 2003年第3期357-359,共3页
采用现代分子生物学手段,将蜂毒素基因重组入复制缺陷型腺病毒骨架,并在蜂毒素基因上游插入特异性的甲胎蛋白启动子,构建成功携蜂毒素基因的重组腺病毒。体外实验证明,该重组腺病毒可特异性地杀伤分泌AFP的肝癌细胞。目的:观察携动物毒... 采用现代分子生物学手段,将蜂毒素基因重组入复制缺陷型腺病毒骨架,并在蜂毒素基因上游插入特异性的甲胎蛋白启动子,构建成功携蜂毒素基因的重组腺病毒。体外实验证明,该重组腺病毒可特异性地杀伤分泌AFP的肝癌细胞。目的:观察携动物毒素基因重组腺病毒在体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法:用X-gal染色法测定腺病毒介导基因转染的效率;将携蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌Hep3B细胞,采用细胞计数及MTT法测定转染后对Hep3B细胞的增殖抑制作用,并采用流式细胞术测定基因转染后对增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。结果:重组腺病毒对Hep3B细胞具有较高的转染效率;细胞计数及MTT实验证明携蜂毒素基因重组腺病毒转染后,人肝癌Hep3B细胞的增殖受到明显抑制,PCNA标记指数下降。结论:携蜂毒素基因重组腺病毒在体外可抑制肝癌细胞增殖,抑制PCNA的合成可能是其作用机理之一。 展开更多
关键词 蜂毒素基因重组腺病毒 肝癌 hep3b细胞 细胞增殖 抑制作用
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类泛素FAT10高表达肝癌细胞株Hep3B酵母双杂交cDNA文库的构建
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作者 余新 刘天 +2 位作者 德洪波 李国惠 邵江华 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第4期400-403,共4页
目的:构建类泛素FAT10高表达肝癌细胞株Hep3B的酵母双杂交用cDNA文库.方法:从肝癌细胞Hep3B中提取总RNA,分离mRNA.利用反转录酶M-MLV与Oligo(dT)AnchorPrimer合成1stStrandcDNA,用E.coliDNAPolymerase与E.coliDNALigase将RNA链置换成DNA... 目的:构建类泛素FAT10高表达肝癌细胞株Hep3B的酵母双杂交用cDNA文库.方法:从肝癌细胞Hep3B中提取总RNA,分离mRNA.利用反转录酶M-MLV与Oligo(dT)AnchorPrimer合成1stStrandcDNA,用E.coliDNAPolymerase与E.coliDNALigase将RNA链置换成DNA链,合成2ndStrandcDNA.将双链cDNA与EcoRⅠAdaptor连接,然后用EcoRⅠ/XhoⅠ进行酶切.使用SpinColumn除去短链cDNA与pGADT7载体连接,转化入E.coliDH10B,建成原始文库.然后对其进行扩增并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小.结果:提取的总RNA降解少且分子完整;RNA纯度高,相对分子质量为400-5000bp;成功合成双链cDNA,均符合建库要求;库容量达到1.03×106克隆,原始文库滴度为2.50×109cfu/L,扩增后的文库滴度为3.60×1012cfu/L.插入片段大小分布为0.5-3.5kb,平均长度约为2.0kb.结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选FAT10作用蛋白奠定了重要基础. 展开更多
关键词 人肝癌细胞hep3b 酵母双杂交cDNA文库 FAT10
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ANKRD1基因转染对肝癌Hep3B细胞增殖的影响
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作者 刘兰 孙抒 许东元 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第34期36-37,共2页
目的观察人心肌锚蛋白重复域1(ANKRD1)基因转染对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。方法将Hep3B细胞分为三组,pEGFPC3-ANKRD1组、空载体组分别转染pEGFPC3-ANKRD1、pEGFPC3质粒2μg,对照组不处理。14 d后收集细胞克隆,采用Western blot法检测He... 目的观察人心肌锚蛋白重复域1(ANKRD1)基因转染对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。方法将Hep3B细胞分为三组,pEGFPC3-ANKRD1组、空载体组分别转染pEGFPC3-ANKRD1、pEGFPC3质粒2μg,对照组不处理。14 d后收集细胞克隆,采用Western blot法检测Hep3B细胞的ANKRD1蛋白,MTT法检测Hep3B细胞生长抑制率。结果与对照组和空载体组比较,pEGFPC3-ANKRD1组ANKRD1蛋白表达量明显增加(P均<0.01),Hep3B细胞生长抑制率明显升高(P均<0.01)。结论 ANKRD1基因转染可显著抑制Hep3B细胞增殖。 展开更多
关键词 人心肌锚蛋白重复域1基因 肝肿瘤 hep3b细胞 细胞增殖
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