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HBx基因诱发肝细胞癌的实验研究及其机制(英文) 被引量：1
1
作者 侯周华 刘国珍 +1 位作者 郑芳 谭德明 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期282-288,共7页
目的:在裸鼠体内转入HBx基因的QSG7701细胞株形成移植瘤,并探讨裸鼠成瘤的可能机制。方法:利用已成功构建的高表达HBx基因的pCMVX/QSG7701细胞株作为实验组,以pRcCMV2/QSG7701细胞株和QSG7701细胞株为对照组接种于裸鼠皮下,观察裸鼠能... 目的:在裸鼠体内转入HBx基因的QSG7701细胞株形成移植瘤,并探讨裸鼠成瘤的可能机制。方法:利用已成功构建的高表达HBx基因的pCMVX/QSG7701细胞株作为实验组,以pRcCMV2/QSG7701细胞株和QSG7701细胞株为对照组接种于裸鼠皮下,观察裸鼠能否成瘤。HE染色研究移植瘤的组织形态学特征,以RT-PCR法检测移植瘤组织、pCMVX/QSG7701细胞、pRcCMV2/QSG7701细胞及QSG7701细胞的p53基因和c-Myc基因表达情况。结果:接种pCMVX/QSG7701细胞株的裸鼠在第2周开始出现移植瘤生长,周围器官和组织未发现转移灶。对照组至接种后第35天无移植瘤生长。HE染色证实移植瘤为肝细胞癌组织。移植瘤和pCMVX/QSG7701细胞中突变型p53和c-MycmRNA的表达量较pRcCMV2/QSG7701细胞和QSG7701细胞明显增高(P<0.01)。结论:HBx基因表达可以直接导致肝细胞癌变;HBx能上调移植瘤和pMVX/QSG7701细胞中突变型p53和c-Myc的表达,并可能通过这一机制导致肝细胞癌变。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X基因 肝细胞癌 突变型P53基因 C-MYC基因
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肝细胞癌组织中HBx基因缺失型突变体真核表达载体的构建和鉴定 被引量：6
2
作者 朱平安 谭德明 +2 位作者 陈莉 彭忠田 宋琳 《热带医学杂志》 CAS 2008年第4期332-334,361,共4页
目的构建缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431真核表达载体。方法以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含KpnⅠ和ApaⅠ酶切位点的HBx基因片段。双酶切后再与载体pcDNA3载体重组连接。重组质粒转化到大肠杆菌DH5α后,经酶切... 目的构建缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431真核表达载体。方法以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含KpnⅠ和ApaⅠ酶切位点的HBx基因片段。双酶切后再与载体pcDNA3载体重组连接。重组质粒转化到大肠杆菌DH5α后,经酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-d431真核表达载体。结果成功构建了重组pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-d431真核表达载体,经DNA序列测定与比对,重组前后HBx基因片段序列一致。结论pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-d431真核表达载体构建成功,可为HBx基因缺失型突变体,特别是HBx-d382基因的生物学功能研究提供基因材料。 展开更多
关键词 hbx基因 肝细胞癌 乙型肝炎病毒 缺失型突变体 真核表达载体
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C端截断的HBX突变体通过上调DR4和DR5表达促TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡 被引量：1
3
作者 胡威 魏肖 +7 位作者 周凯 孔凡运 寇艳波 房贤达 李向阳 尤红娟 郑葵阳 汤仁仙 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期480-485,共6页
目的探讨不同的HBX截断突变体对TRAIL-R1（DR4）和TRAIL-R2（DR5）表达的影响,以及DR4和DR5在HBX截断突变体增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。方法构建HBX的1~120 aa（C端截断）、51~120 aa（C端和N端共同截断）和51~155 aa（N端... 目的探讨不同的HBX截断突变体对TRAIL-R1（DR4）和TRAIL-R2（DR5）表达的影响,以及DR4和DR5在HBX截断突变体增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。方法构建HBX的1~120 aa（C端截断）、51~120 aa（C端和N端共同截断）和51~155 aa（N端截断）的突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3;在HepG2和Huh-7肝癌细胞中,Real-time PCR和Western blot检测稳定转染HBX不同突变体的DR4和DR5的表达;Western blot检测RNA小干扰载体（DR4-siRNA和DR5-siRNA）的HBX突变体的DR4和DR5表达情况,流式细胞术检测TRAIL（200 ng/ml）诱导的肝癌细胞凋亡情况。结果经PCR扩增和双酶切鉴定,3种突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3重组质粒构建成功,测序检测目的基因序列正确;Real-time PCR和Western blot表明,HBX1能显著增加2种肝癌细胞系中的DR4和DR5基因和蛋白的表达;而HBX2和HBX3对DR4和DR5基因和蛋白的表达无显著影响;在Hep G2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞中,与对照组相比,DR4-siRNA和DR5-siRNA显著降低了DR4、DR5的表达;流式细胞术检测结果显示HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率较对照组细胞均显著提高;RNA小干扰抑制DR4和DR5的表达后,HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率下降。结论成功构建了3种不同HBX突变体的真核表达载体;HBX基因C端截断（1~120 aa）的突变体能够上调DR4和DR5的表达,且能够上调DR4和DR5的表达促进TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 hbx突变体 肝癌细胞 DR4 DR5 TRAIL
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HBx-d431突变体多肽抗体的制备及鉴定 被引量：1
4
作者 祝玲玲 朱平安 +2 位作者 金娴 钟小婷 吴翔 《分子诊断与治疗杂志》 2014年第4期245-249,共5页
目的利用人工合成多肽制备针对乙肝病毒x基因突变体HBx-d431的特异性多克隆抗体．为进一步研制}玎Bx．d431免疫检测试剂盒打基础。方法采用生物信息学和多肽合成法制备HBx—d431特异性多肽（HBx．d431P）、高效液相色谱法（HPLC）和电... 目的利用人工合成多肽制备针对乙肝病毒x基因突变体HBx-d431的特异性多克隆抗体．为进一步研制}玎Bx．d431免疫检测试剂盒打基础。方法采用生物信息学和多肽合成法制备HBx—d431特异性多肽（HBx．d431P）、高效液相色谱法（HPLC）和电喷雾离子化质谱（ESI-MS）鉴定合成多肽的纯度和分子量。用化学方法将多肽与匙孔血蓝蛋白（KLH）偶联成多肽抗原HBx—d431P-KLH，并经完全弗氏佐剂（CFA）和不完全弗氏佐剂（IFA）乳化，免疫新西兰雄性大白兔。用ELISA鉴定抗血清效价、亲和层析法纯化抗体、Dotblot评价抗体特异性。结果经HPLC和ESI-MS分析，合成的多肽满足HBx-d431特异性抗体制备的要求。ELISA和Dotblot试验结果显示，兔抗血清的效价达6．4×10^4，纯化后的HBx-d431抗体特异性高。结论本研究制备了抗HBx-d431特异性抗体，为进一步研制HBx-d431免疫检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝病毒 hbx-d431突变体 多肽 抗体
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截断型突变体HBx-Mut120稳定表达真核细胞系的建立
5
作者 鲍艳婷 陈公英 +2 位作者 王洁 李鸽 葛柯 《医学研究杂志》 2018年第4期47-52,共6页
目的 成功构建HBx及其截断型突变体HBx-Mut120的真核载体,建立了两者稳定表达的HepG2细胞系,并研究了目的基因对细胞生长的影响。方法 采用PCR扩增HBx及其截断型突变体HBx-Mut120基因,然后分别克隆到PCMVTag2B载体中,并构建成重组质粒... 目的 成功构建HBx及其截断型突变体HBx-Mut120的真核载体,建立了两者稳定表达的HepG2细胞系,并研究了目的基因对细胞生长的影响。方法 采用PCR扩增HBx及其截断型突变体HBx-Mut120基因,然后分别克隆到PCMVTag2B载体中,并构建成重组质粒HBx-PCMV-Tag2B和HBx-Mut120-PCMV-Tag2B,经过PCR、酶切、测序鉴定重组质粒后,将其转染人肝癌细胞HepG2,经Game 418筛选后得到稳定表达目的基因的Hep G2细胞,最后通过RT-PCR和Western blot鉴定HBx、HBx-Mut120的mRNA和蛋白在HepG2细胞中的表达情况,并用流式细胞仪检测了各组细胞的周期。结果 (1)成功构建目的基因表达载体PCMV-Tag2B-HBx、PCMV-Tag2B-HBx-Mut120。(2)成功建立稳定表达HBx及其缺失片段的HBx蛋白的HepG2细胞系。(3)通过流式细胞仪检测各组细胞周期及对比,发现HepG2-HBx细胞和HepG2-HBx-Mut120细胞的生长分数(G_2+S)明显高于HepG2细胞及空载体转染的HepG2细胞。结论 本实验成功构建携带HBx及其截断型突变体HBxMut120基因的重组表达质粒,转染人肝癌细胞HepG2细胞后分别能够稳定表达HBx蛋白和截断型HBx蛋白,HBx及其突变体稳转细胞后更能促进HepG2细胞的增殖,且突变型目的基因稳转细胞系转移能力较前明显增强。为进一步研究截断型HBx突变体在肝癌的发生、发展中的作用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 hbx基因 hbx蛋白 C端截短型hbx突变体 HepG2细胞
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乙肝病毒突变体HBx-d382特异性抗体的制备及鉴定
6
作者 祝玲玲 朱平安 +3 位作者 金娴 钟小婷 吴翔 樊春卉 《实用预防医学》 CAS 2014年第7期784-787,共4页
目的制备乙肝病毒X基因突变体HBx-d382特异性抗体。方法运用生物信息学和多肽合成法制备HBx-d382特异性多肽(HBx-d382P),采用高效液相色谱法(HPLC)和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)测定合成多肽的纯度和分子量。用化学方法将多肽与匙孔血蓝蛋... 目的制备乙肝病毒X基因突变体HBx-d382特异性抗体。方法运用生物信息学和多肽合成法制备HBx-d382特异性多肽(HBx-d382P),采用高效液相色谱法(HPLC)和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)测定合成多肽的纯度和分子量。用化学方法将多肽与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联成多肽抗原HBx-d382P-KLH,并经完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)乳化,免疫新西兰雄性大白兔。用ELISA鉴定抗血清效价、亲和层析法纯化抗体、Dot blot评价抗体特异性。结果经HPLC和ESI-MS分析,合成多肽符合HBx-d382特异性抗体制备的要求。ELISA和Dot blot试验结果显示,兔抗血清的效价为6.4×104,纯化后的HBx-d382抗体特异性高。结论获得了高效价高特异性的HBx-d382多克隆抗体,为进一步研制HBx-d382免疫检测试剂盒打好了基础。 展开更多
关键词 乙肝病毒 hbx-d382突变体 多肽 特异性抗体
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