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极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究 被引量：3
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作者 周华 洪媛 +1 位作者 严明 许琳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期278-283,共6页
为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37... 为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37℃下在pH8～10的缓冲液中保温1h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75℃,酶活稳定的温度范围为25～55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L,VmaxKG为0.086mmol/(L·min),KmAsp为2.031mmol/L,VmaxAsp为0·024mmol/(L·min)。Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。 展开更多
关键词 天冬氨酸转氨酶 THERMUS THERMOPHILUS hb8 表达 纯化 酶学性质
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嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能
2
作者 张宗棋 田甜 +1 位作者 王妮莎 刘晓晴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期496-502,共7页
Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用，参与电子传递和基因调节等过程．以嗜热菌HB8基因组为模板，通过PCR扩增获得Fe—S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因．将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上，构建重... Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用，参与电子传递和基因调节等过程．以嗜热菌HB8基因组为模板，通过PCR扩增获得Fe—S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因．将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上，构建重组质粒,CS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1．重组质粒转化E．coli BL21（DE3）菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化．研究证明，sufS具有脱硫酶活性，而SufE的存在可增强其活性．体外重组实验表明，在60℃孵育SufS和SufE1．0～2．5h，其复合体脱硫酶活性约是单体sufS的2倍，但两者相互作用时间短暂．若通过交联剂Mts—Aft-Biotin使SufS与sufE共价连接，此时SufsE酶活性是SufS的6倍左右，并可持续72h． 展开更多
关键词 嗜热菌hb8 FE S簇 交联剂 重组
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嗜热菌Thermus thermophilus HB8铁硫簇合成途径中IscA和IscU蛋白的表达、纯化和功能研究
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作者 吴琦 谭菲 刘晓晴 《首都师范大学学报（自然科学版）》 2014年第2期49-56,共8页
Fe-S簇可参与电子传递和基因调节等过程.实验以嗜热菌Thermus thermophilus HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇ISC系统生物合成途径中的IscA和IscU基因,并克隆连接到表达载体pET-28a(+)上.重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3)进行表达... Fe-S簇可参与电子传递和基因调节等过程.实验以嗜热菌Thermus thermophilus HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇ISC系统生物合成途径中的IscA和IscU基因,并克隆连接到表达载体pET-28a(+)上.重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3)进行表达,用亲和层析纯化得到浓度和纯度都较高的IscA和IscU蛋白.SDS-PAGE分析,证实其分子量大小分别为13.7KD和14.8KD.实验确定IscA是单聚体,IscA上能形成铁硫簇,IscU上不能形成铁硫簇.在厌氧条件下,RNA的量能提高1.5倍,但是IscA和IscU的表达量都会降低,说明厌氧对这两个基因有损伤. 展开更多
关键词 嗜热菌Thermus THERMOPHILUS hb8 克隆 体外重组.
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利用重组嗜热栖热菌尿苷-胞苷激酶生产尿苷酸 被引量：1
4
作者 范晓光 贾子樊 +5 位作者 李国梁 韩洪军 高立栋 张顺棠 李燕军 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期7-12,共6页
尿苷-胞苷激酶(Uridine/cytidine kinase,UCK)作为生物体核苷酸代谢补偿途径中的重要催化剂,可以催化尿苷和胞苷磷酸化成为尿苷酸(5'-uridine monophosphate,5'-UMP)和胞苷酸(5'-cytidine monophosphate,5'-CMP)。利用... 尿苷-胞苷激酶(Uridine/cytidine kinase,UCK)作为生物体核苷酸代谢补偿途径中的重要催化剂,可以催化尿苷和胞苷磷酸化成为尿苷酸(5'-uridine monophosphate,5'-UMP)和胞苷酸(5'-cytidine monophosphate,5'-CMP)。利用大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)分别成功克隆表达了来源于嗜热栖热菌(Thermus thermophilus HB8)以及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)的尿苷-胞苷激酶。对比分析了不同重组尿苷-胞苷激酶的催化特性发现,来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶能以鸟苷三磷酸(Guanosine 5'-triphosphate,GTP)或者腺苷三磷酸(Adenosine 5'-triphosphate,ATP)作为磷酸供体催化尿苷生成尿苷酸,而来源于枯草芽孢杆菌的尿苷-胞苷激酶只有以GTP作为磷酸供体时的催化效果较好。在优化的反应条件下,使用来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶,6 h可催化10 mmol/L的尿苷和10 mmol/L的ATP生成8.74 mmol/L尿苷酸。研究结果表明,以ATP作为磷酸供体的尿苷-胞苷激酶可作为一种新型的催化剂用于尿苷酸的研制与生产。 展开更多
关键词 尿苷酸 尿苷-胞苷激酶 嗜热栖热菌 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌
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CYJB8—3—26HB六连杆摆杆式游梁抽油机 被引量：2
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作者 李树国 《石油机械》 北大核心 2002年第12期16-18,58,共3页
采用六连杆摆杆式结构型式 ,研制成CYJB8— 3— 2 6HB六连杆摆杆式游梁抽油机。这种抽油机的悬点载荷 80kN ;冲程 3、 2 5、 2 1m ;冲次 5、 6、 7min- 1;减速器扭矩 2 6kN·m ;电动机功率 16kW。设计时整机采用六连杆摆杆式结构... 采用六连杆摆杆式结构型式 ,研制成CYJB8— 3— 2 6HB六连杆摆杆式游梁抽油机。这种抽油机的悬点载荷 80kN ;冲程 3、 2 5、 2 1m ;冲次 5、 6、 7min- 1;减速器扭矩 2 6kN·m ;电动机功率 16kW。设计时整机采用六连杆摆杆式结构型式及摆杆平衡和曲柄平衡复合平衡方式 ,从而改变了整机工作时的受力状态 ;降低了峰值扭矩 ,减小了减速器扭矩最大峰值。经测试 ,六连杆摆杆式游梁抽油机的示功图面积比常规抽油机的小 ,节能 30 %以上 ;悬点速度和加速度均降低 ,整机运转平稳 。 展开更多
关键词 结构特点 节能 CYJB8-3-26HB 六连杆 摆杆式游梁抽油机
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