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HEV/HAV两联装甲RNA质控样品的研制及应用性能评价
1
作者 杨书仁 朱志梅 +3 位作者 许艺凡 李慧 王术德 高慎阳 《现代畜牧兽医》 2025年第5期1-7,共7页
试验旨在研制一种安全、稳定性强的戊型肝炎(HEV)和甲型肝炎(HAV)两联装甲RNA阳性质控品。利用装甲RNA技术,设计将HEV与HAV标准检测靶基因序列串联合成MS2-HE-AV基因片段,将其克隆到pET-28b载体中构建重组质粒pET-28b-MS2-HE-AV608,转... 试验旨在研制一种安全、稳定性强的戊型肝炎(HEV)和甲型肝炎(HAV)两联装甲RNA阳性质控品。利用装甲RNA技术,设计将HEV与HAV标准检测靶基因序列串联合成MS2-HE-AV基因片段,将其克隆到pET-28b载体中构建重组质粒pET-28b-MS2-HE-AV608,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导原核表达、纯化制备HE-AV二联病毒样颗粒(VLPs),并对其稳定性、回收率进行验证以评价其实际应用性能。结果显示,试验成功构建包含MS2外壳蛋白和外源靶基因的重组载体,目的蛋白高效表达,电镜下可见直径约为27 nm的VLPs。该VLPs可耐受全能核酸酶降解作用。VLPs中HEV和HAV检测靶标定值结果分别为1.88×10^(9)、1.17×10^(9)copies/μL。该VLPs在4℃条件下至少可保存21 d,符合国家标准中对于VLPs保存期的基本规定。实际样品检测结果显示,当人工污染样品的VLPs浓度稀释为1000、10000倍时,4种样品基质中装甲RNA回收率均大于1%。研究表明,HE-AV两联VLPs能够有效抵抗全能核酸酶的降解作用、热稳定性好、适用性强,可作为HEV和HAV核酸检测的阳性质控品全程监控病毒核酸检测过程。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 甲型肝炎病毒 阳性质控品 装甲RNA
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应用斑点杂交法从甲型肝炎及其复发患者的粪便中检测HAVRNA
2
作者 窦晓光 吴海滨 +1 位作者 李智伟 王兆荃 《辽宁医学杂志》 1998年第1期21-22,共2页
本文应用３２Ｐ标记的ＨＡＶｃＤＡＮ探针进行斑点杂交，检测５０例急性甲型肝炎及４例复发患者粪便中的ＨＡＶＲＮＡ，同时检测抗ＨＡＶＩｇＭ、血清转氨酶及胆红素。结果发现，４例复发的甲型肝炎患者复发时间为病愈后３０～５０天，... 本文应用３２Ｐ标记的ＨＡＶｃＤＡＮ探针进行斑点杂交，检测５０例急性甲型肝炎及４例复发患者粪便中的ＨＡＶＲＮＡ，同时检测抗ＨＡＶＩｇＭ、血清转氨酶及胆红素。结果发现，４例复发的甲型肝炎患者复发时间为病愈后３０～５０天，此时血清转氨酶及胆红素均再次升高，抗ＨＡＶＩｇＭ阳性，复发后第１周的粪便中可再次检出ＨＡＶＲＮＡ。提示ＨＡＶ可能为甲型肝炎临床复发的致病因子。 展开更多
关键词 斑点杂交法 复发 甲型肝炎病毒 粪便 hav-rna
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氯和二氧化氯灭活甲型肝炎病毒机理的研究 被引量：8
3
作者 李君文 辛忠涛 +2 位作者 王新为 宋农 郑金来 《中国消毒学杂志》 CAS 2003年第1期1-5,共5页
为探讨氯和二氧化氯灭活HAV机理及用PCR评价消毒效果的可行性,采用细胞培养、ELISA及大片段逐步步移RT-PCR方法对消毒前后HAV感染性、HAAg抗原性及HAV核酸全序列进行检测。结果,以含有效氯10 mg/L消毒液作用30 min,或含二氧化氯7.5 mg/... 为探讨氯和二氧化氯灭活HAV机理及用PCR评价消毒效果的可行性,采用细胞培养、ELISA及大片段逐步步移RT-PCR方法对消毒前后HAV感染性、HAAg抗原性及HAV核酸全序列进行检测。结果,以含有效氯10 mg/L消毒液作用30 min,或含二氧化氯7.5 mg/L的消毒液作用10 min,对HAV感染性的灭活率均为100％,均可破坏HAV核酸5’非编码区;但检测两者HAAg抗原性P/N值分别为3.21(阳性)与2.02(阴性)。结果表明,HAV感染性的灭活与HAV核酸5’非编码区破坏是一致的,可用PCR技术检测HAV核酸5’非编码区以判定HAV灭活与否。 展开更多
关键词 灭活机理 氯 二氧化氯 病毒灭活 甲型肝炎病毒 消毒效果 研究
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一步单管反转录PCR检测水中甲型肝炎病毒 被引量：7
4
作者 李君文 张符光 +3 位作者 晁福寰 王福玉 王新为 宋农 《中国卫生检验杂志》 1996年第2期63-66,共4页
以往甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）的检测主要依赖细胞培养法，但此法所需时间长、敏感性低、特异性不强。虽然反转录ＰＣＲ等技术已被用于粪便或食品中ＨＡＶ的检测，但常规反转录ＰＣＲ操作繁琐、污染环节多，极易造成污染，致使实验结果不... 以往甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）的检测主要依赖细胞培养法，但此法所需时间长、敏感性低、特异性不强。虽然反转录ＰＣＲ等技术已被用于粪便或食品中ＨＡＶ的检测，但常规反转录ＰＣＲ操作繁琐、污染环节多，极易造成污染，致使实验结果不稳定或出现假阳性结果。为克服ＰＣＲ检测ＨＡＶ的缺点和不足，我们在实验基础上建立了一步单管反转录ＰＣＲ技术检测水中的ＨＡＶ，采用热裂解法提取样品中ＨＡＶ病毒的总ＲＮＡ，反转录与ＰＣＲ反应一步进行，整个反应在一个反应管中进行，操作方法较简单，中间可能污染的环节较少，因此，最大限度的减少了由环境造成的可能污染。我们设计合成的引物（Ｈ１—Ｈ２）在ＨＡＶ病毒核酸的ＶＰ１区，只特异地扩增ＨＡＶ核酸片断，具有较强的特异性。改进后的反转录ＰＣＲ的敏感性与常规反转录ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＴＣＩＤ＿（５０）的ＨＡＶ。 展开更多
关键词 水质分析 甲型肝炎病毒 聚合酶链反应
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急性甲型肝炎病人粪便排毒和病毒血症分析 被引量：1
5
作者 高红 董红军 +2 位作者 王南红 傅燕 张姝 《现代实用医学》 2007年第7期521-523,共3页
目的探讨急性甲型肝炎患者通过粪便排毒与病毒血症的关系,排毒方式与产生抗体的关系以及临床生化指标与排毒的关系。方法收集42例10～20岁在象山甲型肝炎大流行期间的急性甲型肝炎病人入院第2天的血清和粪便,ELISA法检测HAV-IgM抗体、... 目的探讨急性甲型肝炎患者通过粪便排毒与病毒血症的关系,排毒方式与产生抗体的关系以及临床生化指标与排毒的关系。方法收集42例10～20岁在象山甲型肝炎大流行期间的急性甲型肝炎病人入院第2天的血清和粪便,ELISA法检测HAV-IgM抗体、血生化指标,RT-PCR法检测血清中和粪便中的HAVRNA。结果所有的病例HAV-IgM抗体为阳性,其OD值为2.0～4.2。所有病例出现了总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的升高。在粪便样品中共检测到阳性样品18份,占42.85%;在血清样品中共检测到阳性样品6份,占14.28%;在血清中HAVRNA阳性的病例其粪便HAVRNA也为阳性。结论在14.28%病例的血清中能检测到HAVRNA,说明这些患者的血液中仍存在感染性。病人是否排毒以及通过什么样的方式排毒,可能与病情的轻重无关。有病毒血症的病例都同时通过粪便排毒,通过粪便排毒的病例可以不产生病毒血症。 展开更多
关键词 肝炎 甲型 肝炎抗体 肝炎病毒 病毒血症
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血液及血制品感染因子检测 被引量：24
6
作者 陈前进 俞新莲 +4 位作者 张月花 赖惠川 王炳发 黄开华 曹春远 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期245-247,共3页
目的了解 1997～ 1999年度我市临床使用的血液及血液制品中甲肝病毒 (HAV)、乙肝病毒 (HBV )、丙肝病毒 (HCV)、艾滋病病毒 (HIV)及梅毒螺旋体的感染情况。方法　用 EL ISA、PCR和 TRU ST对 171份血液、83份血制品检测了抗 - HAV Ig M、... 目的了解 1997～ 1999年度我市临床使用的血液及血液制品中甲肝病毒 (HAV)、乙肝病毒 (HBV )、丙肝病毒 (HCV)、艾滋病病毒 (HIV)及梅毒螺旋体的感染情况。方法　用 EL ISA、PCR和 TRU ST对 171份血液、83份血制品检测了抗 - HAV Ig M、HBs Ag、抗 - HCV、HCV RNA、抗 - HIV1 + 2 、TRUST、TPPA。结果　 171份血液标本抗 - HAV Ig M、抗 - HCV、抗 - HIV1 + 2 皆阴性 ;HBs Ag阳性 1例 (0 .0 5 8% ) ,梅毒 1例 (0 .0 5 8% ) ;83份血制品抗 -HAV Ig M、HBs Ag、抗 - HIV1 + 2 、TRU ST均阴性 ,抗 - HCV阳性率为 2 4 .1% ,均为人血丙种球蛋白 ,取 4个批号阳性的各 2份进行 HCV- RNA检测 ,结果 6份 HCV RNA阳性。结论　 1997～ 1999年度临床上所使用的血液及血制品 (人血丙种球蛋白 )仍存在残余危险 ,需采取措施减少残余危险度。 展开更多
关键词 血液 血制品 抗-HAVIgM HBSAG 抗-HCV HCVRNA 抗-HIV1+2 TRUST
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