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HaSNPV几丁质酶基因在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达及其产物对Bt杀虫剂的增效作用 被引量:10
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作者 王芳 顾奇伟 +1 位作者 武家才 张传溪 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期792-797,共6页
为了探索杆状病毒几丁质酶对微生物杀虫剂的增效作用及其利用途径 ,分别在大肠杆菌和昆虫细胞中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)几丁质酶 .用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的几丁质酶基因片段 ,并分别克隆至原核表... 为了探索杆状病毒几丁质酶对微生物杀虫剂的增效作用及其利用途径 ,分别在大肠杆菌和昆虫细胞中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)几丁质酶 .用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的几丁质酶基因片段 ,并分别克隆至原核表达载体pET2 8a和重组到杆状病毒BactoBac表达系统 ,在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1和粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞系Tn 5B1 4中分别进行了表达 .在大肠杆菌中表达量约占细菌总蛋白 15 % ,在昆虫细胞中表达量约占细胞总蛋白10 % .将含有几丁质酶的大肠杆菌和昆虫细胞表达产物添加到苏云金杆菌 (Bt)菌液中一起喂食 2龄家蚕 .结果显示 ,HaSNPV几丁质酶基因的 2种表达产物和Bt杀虫剂的混合物使处理的家蚕的致死时间较对照处理均明显缩短 .昆虫细胞和大肠杆菌表达产物与Bt混合物处理的LT50 分别从 93 5h和 95 1h缩短到 5 6 2h及 6 7 2h ,并且供试家蚕的生长速度明显缓慢 .研究结果表明 。 展开更多
关键词 hasnpv 几丁质酶 原核表达 真核表达 BT杀虫剂 增效作用
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WHS_3菌株产几丁质酶对棉铃虫HaSNPV的增效作用 被引量:19
2
作者 徐红革 彭辉银 +2 位作者 刘家欣 白志强 谢薇 《中国病毒学》 CSCD 2002年第3期239-242,共4页
WHS3 (Serratiamarcescens)菌是一株几丁质酶的高产菌株 ,在诱导培养基中几丁质酶的产量可达84 .4 μg/mL。通过对中国棉铃虫进行的生物测定表明 :WHS3 菌所产的几丁质酶 (A3 )能有效地提高HaSNPV的毒力 2 0 %~ 70 % ,LT50 、LT90 比... WHS3 (Serratiamarcescens)菌是一株几丁质酶的高产菌株 ,在诱导培养基中几丁质酶的产量可达84 .4 μg/mL。通过对中国棉铃虫进行的生物测定表明 :WHS3 菌所产的几丁质酶 (A3 )能有效地提高HaSNPV的毒力 2 0 %~ 70 % ,LT50 、LT90 比对照组缩短天数最高可达 1.1d、1.3d。 展开更多
关键词 WHS3菌株 几丁质酶 棉铃虫hasnpv 增效作用 棉铃虫核型多角体病毒
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HaSNPV几丁质酶的分离纯化与毒理学研究 被引量:1
3
作者 惠有为 夏天 +1 位作者 赵亚玲 贾静芳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期43-49,共7页
利用重组工程菌GS115-pPIC 9k-ChiA4.0发酵几丁质酶粗液,经(NH4)2SO4盐析、透析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析以及Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得电泳纯的棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒(HaSNPV)几丁质酶,回收率为... 利用重组工程菌GS115-pPIC 9k-ChiA4.0发酵几丁质酶粗液,经(NH4)2SO4盐析、透析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析以及Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得电泳纯的棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒(HaSNPV)几丁质酶,回收率为19.64%,纯化17.74倍;经HaSNPV几丁质酶毒理学研究,通过触杀作用和胃毒作用,几丁质酶使小菜蛾幼虫细胞液化,导致死亡,其作用效果与几丁质酶浓度和作用时间成正比,且胃毒作用大于触杀作用;经小麦根腐、烟草赤星、番茄灰霉和苹果炭疽等植物病原真菌的抑菌实验,表明几丁质酶可以通过酶解真菌细胞壁中的几丁质达到抑菌作用。 展开更多
关键词 hasnpv 几丁质酶 分离纯化 毒理
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HaSNPV几丁质酶重组蛋白的表达、纯化和复性(英文)
4
作者 惠有为 赵健 +1 位作者 王振虎 夏天 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期77-83,共7页
棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(HaSNPV)是我国第一个商品病毒杀虫剂,具有使用安全、害虫不产生抗药性等优点,是一种很有发展潜力的生物农药。幼虫虫体受病毒感染后,HaSNPV几丁质酶在其液化过程中起了很大的作用,因此可以作为增效剂以显... 棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(HaSNPV)是我国第一个商品病毒杀虫剂,具有使用安全、害虫不产生抗药性等优点,是一种很有发展潜力的生物农药。幼虫虫体受病毒感染后,HaSNPV几丁质酶在其液化过程中起了很大的作用,因此可以作为增效剂以显著提高细菌、病毒、真菌等微生物杀虫剂的毒力,并具有更高的安全性。将HaSNPV几丁质酶基因构建到原核表达载体pET28a中,经测序检验后转化至大肠杆菌Rosetta,然后以IPTG作为诱导剂,目标蛋白以包涵体的形式得以成功表达。在变性条件下,包涵体经镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱层析纯化,并以两种不同的方法进行复性,均可获得具有活性的HaSNPV几丁质酶。 展开更多
关键词 hasnpv 几丁质酶 表达 纯化 复性
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一株空多角体突变的HaSNPV的发现及其生物学性质初探
5
作者 司艳红 孙新城 +1 位作者 方明刚 王汉中 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第36期11770-11772,共3页
[目的]探索一株新的空多角体突变的HaSNPV的生物学性质。[方法]利用同源重组的方法构建HaSNPV细菌人工染色体的过程中,发现一株多角体病毒对棉铃虫幼虫无毒性。通过电镜观察和Western-blot检测对多角体的生物学性质进行了初步探索。[结... [目的]探索一株新的空多角体突变的HaSNPV的生物学性质。[方法]利用同源重组的方法构建HaSNPV细菌人工染色体的过程中,发现一株多角体病毒对棉铃虫幼虫无毒性。通过电镜观察和Western-blot检测对多角体的生物学性质进行了初步探索。[结果]细胞和多角体的电镜结果表明,该病毒能形成正常的多角体外壳,但是不能包装病毒粒子。通过PCR检测,发现其ORF51-54片段缺失,但这一多角体的突变并不与多角体基因和p10基因有关,ORF53(fp25)的回复也证明fp25的缺失不是造成此突变的原因。[结论]该突变株将为HaSNPV基因功能的研究提供良好的技术平台与研究素材。 展开更多
关键词 hasnpv 细菌人工染色体 多角体 突变
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GP64表面展示元件与组Ⅱ HaSNPV出芽病毒的融合 被引量:1
6
作者 刘永 于峰 +3 位作者 曹青 徐琳琳 陈修文 王文兵 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期14-18,共5页
利用杆状病毒组ⅠAcMNPV(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus)GP64信号肽(GP64SP),C-末端跨膜区(GP64CTD)及报告基因绿色荧光蛋白(eGFP)构成的表面展示系统(gp64sp-egfp-gp64ctd),同源重组到组ⅡHaSNPV的多角体基因... 利用杆状病毒组ⅠAcMNPV(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus)GP64信号肽(GP64SP),C-末端跨膜区(GP64CTD)及报告基因绿色荧光蛋白(eGFP)构成的表面展示系统(gp64sp-egfp-gp64ctd),同源重组到组ⅡHaSNPV的多角体基因位置,筛选重组病毒。通过激光共聚焦观察,HaSNPV重组病毒感染Hz-AM1细胞后绿色荧光分布在质膜,表明GP64SP可以引导表达产物趋向于细胞膜。病毒感染后,收集并纯化重组的出芽病毒(BV),经Western blot检测,eGFP存在于重组病毒BV中。结果表明,组ⅠGP64表面展示系统中的重要元件GP64SP和GP64CTD能够装配到组ⅡHaSNPV BV上,可以用于组ⅡNPV表面展示目的蛋白。 展开更多
关键词 GP64 组Ⅱ 表面展示 hasnpv 出芽病毒
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棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)G4株Ha109蛋白的原核表达及抗体制备
7
作者 闫尧 曾利平 +1 位作者 钱丽莹 徐旭士 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期178-182,共5页
根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopoly-hedrovirus,HaSNPV)G4株基因组全序列,设计引物,利用PCR方法扩增出开放阅读框(open reading frame,ORF)109编码片段并将其克隆至载体pGEM-TEasy,... 根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopoly-hedrovirus,HaSNPV)G4株基因组全序列,设计引物,利用PCR方法扩增出开放阅读框(open reading frame,ORF)109编码片段并将其克隆至载体pGEM-TEasy,测序正确后将其亚克隆至原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导,融合蛋白GST-Ha109在E.coliBL21中以包涵体形式得到高效表达。表达目的蛋白大小为38.5 kD,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。抗体经1∶6 000倍稀释后用于Western blotting分析,获得特异性显色信号,为深入研究Ha109的功能奠定基础。 展开更多
关键词 hasnpv 克隆 多克隆抗体 WESTERN BLOTTING
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棉铃虫病毒HaSNPVfp25k基因的克隆表达及抗体制备 被引量:2
8
作者 吴东 邓菲 +2 位作者 胡志红 袁丽 孙修炼 《中国病毒学》 CSCD 2004年第4期380-384,共5页
根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpaarmigerasinglenucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)fp25k基因的序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段。将该基因片段克隆至原核表达载体pProEXHTb,经IPTG诱导,在... 根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpaarmigerasinglenucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)fp25k基因的序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段。将该基因片段克隆至原核表达载体pProEXHTb,经IPTG诱导,在大肠杆菌DH5α中获得了高效表达,表达产物的大小为32kDa。纯化蛋白产物免疫家兔制备抗血清。该抗血清可与原核表达的GST-FP25K融合蛋白及在感染的昆虫细胞中表达的FP25K蛋白发生特异性免疫反应。该抗体的获得为深入研究FP25K蛋白的功能提供了基础。 展开更多
关键词 棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 基因 克隆 表达 抗体 杆状病毒
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HaSNPV的9个基因的转录谱分析
9
作者 代文涛 邓菲 +2 位作者 王华林 袁丽 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 2006年第1期47-51,共5页
使用反转录和实时荧光定量PCR技术,我们对HaSNPV的几个预期的早期基因、早晚期基因、晚期基因、极晚期基因的转录时相进行分析,结果表明:这些基因的起始转录时间与其自身的启动子类型基本是一致的。但是预期的早期基因pkip晚期才开始转... 使用反转录和实时荧光定量PCR技术,我们对HaSNPV的几个预期的早期基因、早晚期基因、晚期基因、极晚期基因的转录时相进行分析,结果表明:这些基因的起始转录时间与其自身的启动子类型基本是一致的。但是预期的早期基因pkip晚期才开始转录;预期的早晚期基因ha107早期不转录,仅在晚期转录。这些基因的转录水平一般都在病毒感染细胞72h后达到最高,并且极晚期基因polyhedrin的转录水平明显高于其它基因。Iap2的转录水平仅次于polyhedrin,表明它可能是一个功能基因。与AcMNPV的p10不同,在HaSNPV/HzAM1系统中p10的转录水平并不高。 展开更多
关键词 hasnpv 实时荧光定量PCR 转录谱
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棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)ORF99基因在昆虫细胞中的表达及亚细胞定位 被引量:1
10
作者 安世恒 杜孟芳 张传溪 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期670-674,共5页
棉铃虫核型多角体病毒ORF99基因Ha99是其基因组中特有的一个基因,序列分析发现Ha99基因开放阅读框包含354 bp核苷酸,编码118个氨基酸残基,预测相对分子质量为13 kDa.Ha99基因进一步在Bac-to-Bac系统中进行表达,SDS-PAGE和Western blot... 棉铃虫核型多角体病毒ORF99基因Ha99是其基因组中特有的一个基因,序列分析发现Ha99基因开放阅读框包含354 bp核苷酸,编码118个氨基酸残基,预测相对分子质量为13 kDa.Ha99基因进一步在Bac-to-Bac系统中进行表达,SDS-PAGE和Western blot分析显示Ha99基因得到了成功表达,表达的相对分子质量为13kDa,与预测的大小相符.亚细胞定位分析表明,ORF99基因的表达产物主要定位在细胞质中.时序表达分析显示Ha99基因在病毒侵染后6 h开始表达,一直持续到侵染后122 h,表明Ha99基因是一个晚期表达的基因. 展开更多
关键词 棉铃虫核型多角体病毒 ORF99 昆虫表达系统 细胞定位
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棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)Hind III-L片段的序列分析
11
作者 方明刚 陈新文 +2 位作者 王汉中 Just M Vlak 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 2001年第4期355-360,共6页
本文报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (Helicoverpaarmigerasingle nucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组的HindIII L片段的全序列。该片段全长 2 6 35bp ,包括 5个有意义的开放阅读框 :HaSNPVORF2 2 7,晚期表达因子 10基... 本文报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (Helicoverpaarmigerasingle nucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组的HindIII L片段的全序列。该片段全长 2 6 35bp ,包括 5个有意义的开放阅读框 :HaSNPVORF2 2 7,晚期表达因子 10基因 (lef10 ) ,vp10 5 4基因 ,Ac5 5 (AcMNPVORF5 5的同源基因 ) ,Ac5 6 (AcMNPVORF5 6的同源基因 )。与其它 6种杆状病毒的氨基酸序列比较表明 ,HaSNPV的lef10基因与甜菜夜蛾核型多角体病毒 (SeMNPV)的同源性最高 ,为6 4 % ,与冷杉毒蛾核型多角体病毒 (OpMNPV)的同源性最低 ,为 4 3% ;HaSNPV的vp10 5 4基因与SeMNPV的同源性最高 ,为 6 5 % ,与OpMNPV的同源性最低 ,为 4 9%。序列比较表明 ,HaSNPV的LEF10与VP10 5 4蛋白与其它 6种杆状病毒具有相同的保守区和亮氨酸拉链 (leucinezipper) 展开更多
关键词 棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 lef10基因 vp1054基因 序列分析 HindⅢ-L片段
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Reconstruction of HaSNPV with helicoverpa hormone receptor 3
12
作者 扈进冬 Shao Honglian +4 位作者 Zhang Yubao Fu Qiang Sun Chen Wang Jinxing Zhao Xiaofan 《High Technology Letters》 EI CAS 2007年第3期327-331,共5页
In order to develop a more efficient virus for controlling the cotton bollworm Helicoverpa armigera, Helicoverpa hormone receptor 3 (HHR3), which is involved in the ecdysteroid regulatory pathway, was used to geneti... In order to develop a more efficient virus for controlling the cotton bollworm Helicoverpa armigera, Helicoverpa hormone receptor 3 (HHR3), which is involved in the ecdysteroid regulatory pathway, was used to genetically modify wild HaSNPV. HaSNPV-HHR3 budded virus and occlusion body virus were constructed in three steps: preparation of pFastBacHaPhpP10-HHR3 donor plasmid, transposition of HHR3 into the HaBacHZ8 bacmid, and transfection of HzAM1 cells to get HaSNPV-HHR3 virus.HHR3 was proved to be expressed in the HaSNPV-HHR3 virus infected HzAM1 cells by immunoblotting. Results of bioassay indicated that the body weight of the HaSNPV-HHR3 infected larvae was lower than the larvae infected with wild virus and uninfected normal larvae, which suggests that HaSNPV-HHR3 delayed larval growth. 展开更多
关键词 LEPIDOPTERA NOCTUIDAE Helicoverpa armigera Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovims hasnpv Helicoverpa hormone receptor 3 (HHR3) genetical manipulation BIOASSAY
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中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒(HaSNPV)HindⅢ-Ⅰ片段的序列分析与基因排列研究 被引量:2
13
作者 龙钢 陈新文 +1 位作者 Just M.Vlak 胡志红 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期150-157,共8页
对中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒 (HaSNPV)基因组中的HindⅢ Ⅰ片段的序列进行分析 ,该片段全长75 0 1nt,包括 10个开放阅读框 :AcMNPVORF111的同源基因 (Ac111) ,晚期表达因子 2 (lef 2 )基因 ,病毒核壳结构蛋白 p2 4基因、gp16 基... 对中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒 (HaSNPV)基因组中的HindⅢ Ⅰ片段的序列进行分析 ,该片段全长75 0 1nt,包括 10个开放阅读框 :AcMNPVORF111的同源基因 (Ac111) ,晚期表达因子 2 (lef 2 )基因 ,病毒核壳结构蛋白 p2 4基因、gp16 基因、多角体包膜蛋白 (polyhedronenvelopeprotein ,pep)基因、AcMNPVORF6 3的同源基因(Ac6 3) ,38 7kD基因 ,晚期表达因子 1(lef 1) 基因 ,及两个特有基因HaSNPV orf5 91和HaSNPV orf435。基因组的排列比较分析发现与AcMNPV有较大区别。 展开更多
关键词 中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒 S24基因 pep基因 lef-1基因 序列分析
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棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒HaSNPV orf101的原核表达及抗体制备 被引量:1
14
作者 李志远 邱小慧 +2 位作者 周玥 钱丽莹 徐旭士 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第35期15391-15393,15396,共4页
[目的]摸索棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(HaSNPV)orf101编码蛋白原核表达条件并制备其多克隆抗体。[方法]根据HaS-NPVorf101序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段并将其克隆至pGEM-TEasy载体,然后亚克隆至原核表达... [目的]摸索棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(HaSNPV)orf101编码蛋白原核表达条件并制备其多克隆抗体。[方法]根据HaS-NPVorf101序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段并将其克隆至pGEM-TEasy载体,然后亚克隆至原核表达载体pGEX-KG,检测在不同条件下融合蛋白的表达产量及其折叠性质。原核表达产物经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。[结果]在IPTG诱导的条件下,融合蛋白GST-HA101可在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达,表达产物的大小为55.8 kDa。制备的多克隆抗体经1∶8 000倍稀释后用于Western Blot分析,获得特异性显色信号。[结论]原核表达蛋白及其多克隆抗体的获得为深入研究Ha101的基因功能打下了基础。 展开更多
关键词 棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒 orf101 克隆 表达 抗体
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感染HaSNPV棉铃虫幼虫的组织病理和免疫组化研究
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作者 欧阳志荃 孙修炼 +2 位作者 邓菲 袁丽 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 2003年第6期603-606,T003,T004,共6页
本文报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)感染棉铃虫幼虫的病理时相及HaSNPV多角体蛋白在幼虫组织中表达的免疫组化研究.以5×103PFU的HaSNPV出芽病毒粒子(BV... 本文报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)感染棉铃虫幼虫的病理时相及HaSNPV多角体蛋白在幼虫组织中表达的免疫组化研究.以5×103PFU的HaSNPV出芽病毒粒子(BV)注射4龄初的棉铃虫幼虫,石蜡切片的H.E染色表明,在感染后24h,病理变化不明显;48h后脂肪体、气管组织的细胞核开始肿大,细胞开始变形;72h后脂肪体、气管、真皮细胞核肿大十分明显,组织结构松散;但中肠和肌肉组织未见明显病变;96h后,脂肪体、气管、真皮组织结构完全被破坏,肌肉组织变疏松.免疫组化结果表明,感染后24h,未能检测到多角体蛋白在幼虫组织中的表达;感染后48h,多角体蛋白可在部分脂肪体、气管组织、血细胞和真皮组织的细胞核中表达;72h后,被感染的脂肪体、气管组织、和真皮组织的细胞数比48h多; 96h后,多角体蛋白可以在脂肪体、气管、真皮组织中大量表达,48h到96h间,被感染的血细胞数目基本不变,中肠组织和肌肉都未检测到多角体蛋白的表达;幼虫死亡后,可在中肠上皮细胞的基底膜间隙中检测到多角体蛋白的表达,肌肉组织中未见表达信号,其它组织全部被感染并且组织结构被破坏, H.E的结果与免疫组化的结果基本相符. 展开更多
关键词 棉铃虫核多角体病毒 病理时相 多角体蛋白 免疫组化
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SeMNPV抑制HaSNPV诱导的Se-UCR细胞凋亡
16
作者 程睿 梁昌镛 +3 位作者 南方 胡志红 J.M.Vlak 陈新文 《中国病毒学》 CSCD 2003年第6期587-592,共6页
在采用共感染和共转染的方法构建扩大杀虫范围的重组病毒的研究过程中发现棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)能诱导甜菜夜蛾细胞Se-UCR发生典型凋亡,但不能诱导另一... 在采用共感染和共转染的方法构建扩大杀虫范围的重组病毒的研究过程中发现棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)能诱导甜菜夜蛾细胞Se-UCR发生典型凋亡,但不能诱导另一株甜菜夜蛾细胞Se-301产生凋亡。以5 MOI的HaSNPV感染Se-UCR,在12h左右可以观测到少量细胞凋亡,24h能观察到明显的凋亡,凋亡细胞数量随时间不断增加,到72h基本上所有的细胞均发生凋亡,成为凋亡小体,基因组DNA片段化。同时发现HaSNPV诱导的甜菜夜蛾Se-UCR细胞凋亡能够被甜菜夜蛾多核衣壳核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleoplyhedrovirus,SeMNPV)所抑制,进一步点杂交试验发现SeMNPV和HaSNPV共同感染Se-UCR获得了HaSNPV在该细胞中的复制。 展开更多
关键词 棉铃虫单核农壳核名角体病毒 甜菜夜蛾多核衣壳核多角体病 细胞凋亡 杆状病毒
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杆状病毒包涵体蛋白基因的进化 被引量:6
17
作者 张传溪 贡成良 +1 位作者 胡萃 吴祥甫 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第1期69-76,共8页
在分析了HaSNPV和EoSNPV多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上,通过MALIGN程序,比较了目前已发表的26种杆状病毒包涵体蛋白的序列,HaSNPV与HzSNPV亲缘关系十分接近,两者aa序列同源性达97.6%,... 在分析了HaSNPV和EoSNPV多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上,通过MALIGN程序,比较了目前已发表的26种杆状病毒包涵体蛋白的序列,HaSNPV与HzSNPV亲缘关系十分接近,两者aa序列同源性达97.6%,nt序列同源性达97.4%;EoSNPV与黄杉毒蛾核型多角体病毒(Op-SNPV)的同源性为最高,nt序列的同源性为83.0%,aa序列达94.7%,与其它20种鳞翅目NPV的同源性也很高,nt序列同源性为72.6%~81.9%,aa序列为83.7%~93.9%;与GV的同源性较低,为48.4%~54.9%;而与锯叶蜂核型多角体病毒(NsSNPV)的同源性为最低,仅44.9%。应用Clustal程序建立了一个包括了26种包涵体蛋白的系统树,确定了新测定的EoSNPV和HaSNPVPh在包涵体蛋白基因系统树中都属于NPV中的GroupⅡ分枝。 展开更多
关键词 杆状病毒 包涵体蛋白 hasnpv EoSNPV 分子进化
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一种新颖的棉铃虫单粒包埋核多角体病毒表达系统 被引量:3
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作者 王汉中 黄弋 +4 位作者 司艳红 方明刚 陈新文 Just M.Vlak 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 2002年第4期319-325,共7页
将含有低拷贝数的mini Freplicon、一个卡那霉素抗性基因和一个lacZα基因 8.6kb的DNA片段经同源重组置换到棉铃虫核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因内 ,构建了既能在E .coli内复制又可在昆虫细胞内复制形成完整的病毒粒子棉铃虫... 将含有低拷贝数的mini Freplicon、一个卡那霉素抗性基因和一个lacZα基因 8.6kb的DNA片段经同源重组置换到棉铃虫核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因内 ,构建了既能在E .coli内复制又可在昆虫细胞内复制形成完整的病毒粒子棉铃虫核型多角体病毒Bacmid(HaBacmid HZ8)。另外将HaSNPV的多角体蛋白基因和P10启动子序列取代 pFastBacDual质粒上的AcMNPV的多角体启动子序列和P10启动子序列 ,构建插入HaSNPV多角体蛋白基因和P10启动子序列的HapFastBacPhP10供体质粒。利用HapFastBacPhP10供体质粒将eGFP基因转位至HZ8的Tn7附着位点上 ,随后将含有eGFP基因的重组HaBacmidDNA转染至HZAm1细胞内。转染 5d后 ,细胞核内能形成典型的多角体 ,在萤光显微镜下观察到细胞内显示出强烈的绿色萤光。 展开更多
关键词 棉铃虫 单粒包埋核多角体病毒 表达系统 hasnpv 细胞人造染色体
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缺失p10基因的重组棉铃虫病毒导致多角体囊膜包装不完整 被引量:1
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作者 董春升 邓菲 +3 位作者 袁丽 潘小玉 王华林 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 2006年第6期594-598,共5页
P10蛋白是杆状病毒感染细胞后在极晚期高度表达的两个蛋白之一。本文通过构建p10缺失的重组棉铃虫病毒来研究P10的功能。利用λ噬菌体Red重组系统介导的同源重组,在大肠杆菌BW25113中,用含有40bp同源臂的氯霉素抗性基因替换了棉铃虫病毒... P10蛋白是杆状病毒感染细胞后在极晚期高度表达的两个蛋白之一。本文通过构建p10缺失的重组棉铃虫病毒来研究P10的功能。利用λ噬菌体Red重组系统介导的同源重组,在大肠杆菌BW25113中,用含有40bp同源臂的氯霉素抗性基因替换了棉铃虫病毒(HaSNPV)细菌人工染色体HaBacHZ8上的p10基因,然后利用Bac-to-Bac系统把多角体基因和绿色荧光蛋白基因转移到含有缺失p10的HaBacHZ8上,构建了p10缺失的重组HaBacΔp10-PH-eGFP。重组病毒的生长曲线和生物测定结果表明,缺失p10基因对病毒复制和毒力无显著影响,但电镜观察结果显示,P10的缺失会影响多角体囊膜的包装。 展开更多
关键词 棉铃虫病毒(hasnpv) p10基因 多角体囊膜包装
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中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆 被引量:16
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作者 彭辉银 李星 +3 位作者 张双民 Basil M.Arif 陈新文 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 1998年第2期139-143,共5页
以α32PdATP标记含CfMNPV几丁质酶基因的重组质粒为探针,在68℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒(HaSNPV)进行Southern杂交,将HaSNPV的几丁质酶基因分别定位在BamHIE、BglⅡ... 以α32PdATP标记含CfMNPV几丁质酶基因的重组质粒为探针,在68℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒(HaSNPV)进行Southern杂交,将HaSNPV的几丁质酶基因分别定位在BamHIE、BglⅡE、EcoRIG、HindⅢF、XbaIH、BamHI+HindIIM和BamHI+XbaIH,并以pTZ19R为载体获得了XbaIH片段克隆。 展开更多
关键词 棉铃虫 核型多角体病毒 几丁质酶 基因定位
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