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H3N2亚型猪流感病毒HA1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1
1
作者 司维 谭茜宇 +3 位作者 徐玲芸 罗廷荣 李晓宁 顾金燕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1739-1749,共11页
【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04... 【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04/2005(H3N2))毒株的HA1片段,采用同源重组方法构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1,经PCR和测序鉴定正确后将重组阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。对HA1蛋白表达条件(诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行优化,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白。将获得的重组蛋白与QuickAntibody-Mouse3W佐剂混合后以肌内注射方式免疫BALB/c小鼠,制备H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,并通过ELISA、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体的效价、反应性及特异性进行鉴定。【结果】本研究成功构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1;H3N2亚型SIV HA1重组蛋白在1 mmol/L IPTG 26℃诱导10 h时表达量最高,且主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量大小约为39.5 ku。成功制备5株H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,效价均为1∶1 638 400。Western blotting和IFA鉴定结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别真核表达的H3N2亚型SIV HA1蛋白,与H1N1亚型SIV、H7N9亚型禽流感病毒(AIV)等其他亚型流感病毒的HA1蛋白均不发生反应,具有良好的反应性及特异性。【结论】本研究成功表达并纯化了免疫原性良好的H3N2亚型SIV HA1蛋白,制备了反应性及特异性良好的鼠源多克隆抗体,为深入研究H3N2亚型SIV HA1蛋白的生物学功能提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪流感病毒(SIV) H3N2亚型 ha1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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长链非编码RNAENST00000602558.1靶向P4HA1基因调控血管平滑肌细胞增殖与迁移
2
作者 杨志良 邹天宇 +7 位作者 陈恕凤 叶珏 时娜 李之凡 吴娜琼 邱洪 杨彬 王来元 《中国分子心脏病学杂志》 2025年第2期6729-6737,共9页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)ENST00000602558.1在调节血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用及其机制。方法应用过表达绿色荧光蛋白的腺病毒(AdGFP)载体(阴性对照)、过表达ENST00000602558.1的腺病毒载体(AdENST00000602558.1)感... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)ENST00000602558.1在调节血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用及其机制。方法应用过表达绿色荧光蛋白的腺病毒(AdGFP)载体(阴性对照)、过表达ENST00000602558.1的腺病毒载体(AdENST00000602558.1)感染VSMCs,或应用siNC(阴性对照)、特异性针对ENST00000602558.1的siRNA转染VSMCs。应用RNA测序技术、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法筛选、鉴定ENST00000602558.1的靶基因。利用RNA荧光原位杂交(FISH)技术观察ENST00000602558.1在VSMCs中的定位。采用CCK-8技术和Transwell迁移实验分别检测ENST00000602558.1对VSMCs增殖和迁移的影响。应用迁移回复实验验证靶基因在ENST00000602558.1调控VSMCs迁移中的作用。结果过表达ENST00000602558.1显著促进VSMCs增殖和迁移,敲低内源性ENST00000602558.1则显著抑制VSMCs增殖和迁移。筛选、验证了P4HA1基因ENST00000602558.1的靶基因。ENST00000602558.1通过靶向P4HA1基因调控VSMCs迁移。结论LncRNA ENST00000602558.1通过靶向P4HA1基因,调控VSMCs增殖和迁移,参与冠状动脉疾病的发病机制。 展开更多
关键词 冠状动脉疾病 血管平滑肌细胞 长链非编码RNA ENST00000602558.1 P4ha1基因 细胞增殖 细胞迁移
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北京地区2009-2010年乙型流感病毒的流行特征及HA1基因片段特性分析 被引量：10
3
作者 何翠 张磊 +4 位作者 恩特马克.布拉提白 李科 刘运喜 刘刚 吾鲁木汗.那孜尔别克 《中国预防医学杂志》 CAS 2010年第10期995-999,共5页
目的了解2009年5月-2010年4月间北京地区乙型流感的流行特征及血凝素（HA1）变异情况。方法采用real-time RT-PCR法对流感样疑似病人咽拭子进行乙型流感病毒检测,采用DNA Star软件对HA1基因片段核苷酸和氨基酸序列进行系统进化分析。结... 目的了解2009年5月-2010年4月间北京地区乙型流感的流行特征及血凝素（HA1）变异情况。方法采用real-time RT-PCR法对流感样疑似病人咽拭子进行乙型流感病毒检测,采用DNA Star软件对HA1基因片段核苷酸和氨基酸序列进行系统进化分析。结果 2009年5月-2010年4月共收集并检测流感样疑似病例咽拭子样本2 138份,乙型流感病毒阳性169例,总阳性率为7.9%,且以2010年2月阳性率最高。乙型流感病毒阳性者平均年龄为（35±24）岁,显著高于对照组中的（28±19）岁（P〈0.001）;女性组中乙型流感病毒阳性率为11.8%,显著高于男性组的7.9%（P〈0.015）。HA1片段序列分析显示本地区的乙型流感病毒属于Victoria系,与参考株B/Brisbane/60/2008相比,其核苷酸、氨基酸的同源性分别为93.4%-99.2%和99.3%-99.7%;2个氨基酸发生改变。结论 2009年5月-2010年4月期间北京地区乙型流感病毒的流行高峰为2010年1、2月,主要累及的人群为35岁以上的女性。本地区的优势流行株仍属于Victoria系,其抗原性未发生明显改变,提示以往流感疫苗仍有较好的保护效果。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 REAL-TIME RT-PCR ha1基因 流行特征
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江西省2005～2006年甲1亚型流感病毒株与疫苗株的HA1区差异分析 被引量：6
4
作者 熊英 邹明霞 +2 位作者 马雪兰 施勇 龚甜 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第2期322-326,共5页
[目的]分析江西省2005～2006年分离的甲1亚型流感病毒株与疫苗推荐株HA1区的差异,以了解江西省流感病毒变异情况及WHO推荐疫苗株对人体的保护作用。[方法]采集监测医院和疑似流感疫情的流感样病例鼻咽拭子标本进行流感病毒分离,对分离... [目的]分析江西省2005～2006年分离的甲1亚型流感病毒株与疫苗推荐株HA1区的差异,以了解江西省流感病毒变异情况及WHO推荐疫苗株对人体的保护作用。[方法]采集监测医院和疑似流感疫情的流感样病例鼻咽拭子标本进行流感病毒分离,对分离到的甲1亚型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒基因后进行核苷酸序列测定,用DNAStar5.0、BioEdit(Version5.0)、Mage生物软件对测序结果进行分析处理,并与WHO推荐疫苗株进行比对。[结果]20株甲1亚型流感病毒HA1区域核苷酸序列长度均为960bp,未发现核苷酸的丢失和插入,平均点突变率为2.94%。2005年甲1亚型流感病毒分离株与2005年WHO北半球流感甲1亚型疫苗推荐株A/New caledonia/20/99(H1N1)HA1区相比较,不同毒株氨基酸的同源性是96.9%～98.1%,替换数在6～10个之间,涉及2～3个抗原决定簇,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为2.33。2006年甲1亚型流感病毒分离株与疫苗推荐株HA1区相比较,不同毒株氨基酸的同源性是95.3%～97.2%,、替换数在9～15个之间,涉及4个抗原决定簇,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为6.0个。2006年我省甲1亚型流感病毒分离株与WHO疫苗推荐株之间在HA1区域的氨基酸差异以及抗原决定簇上氨基酸的差异,均显著大于2005年我省甲1亚型流感病毒分离株与WHO疫苗推荐株之间差异(P﹤0.0005)。[结论]2005年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年度我省的甲1亚型流感总体上有较好的预防效果,而2006年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对我省该年度的甲1亚型流感预防效果不够理想。 展开更多
关键词 甲1亚型流感病毒 分离林 疫苗株 ha1区域 差异
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H5亚型禽流感病毒HA1基因在Sf9昆虫细胞中的表达及其抗原性检测 被引量：5
5
作者 齐岩 孙凌霜 +3 位作者 王彬 孙进华 王君伟 师东方 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期352-356,共5页
利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒(AIV)的 HA1基因。Western-blotting证明HA1在昆虫细胞中得到了表达,其产物具有抗原性;且不与 H7、H9 AIV的抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示... 利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒(AIV)的 HA1基因。Western-blotting证明HA1在昆虫细胞中得到了表达,其产物具有抗原性;且不与 H7、H9 AIV的抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示,表达蛋白可以在非变性条件下与相应抗体作用,同样具有良好的抗原性。试验结果证明,表达的H5亚型AIV的 HA1蛋白,为检测禽类体内是否感染H5亚型AIV和监测免疫禽类血清H5抗体水平提供了优良的检测抗原。 展开更多
关键词 禽流感病毒 ha1基因 杆状病毒 真核表达
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H3N2亚型猪流感病毒重组HA1蛋白间接ELISA诊断方法的建立 被引量：5
6
作者 丁选亚 乔传玲 +4 位作者 陈艳 杨焕良 辛晓光 韩庆功 陈化兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1230-1234,共5页
以pMD18-HA质粒为模板,PCR扩增HA1基因片段并与pET30a连接后,转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA1蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting检测。结果表明,表达的重组HA1蛋白具有良好的反应原性,分子量约为45 ku。表达产物经过... 以pMD18-HA质粒为模板,PCR扩增HA1基因片段并与pET30a连接后,转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA1蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting检测。结果表明,表达的重组HA1蛋白具有良好的反应原性,分子量约为45 ku。表达产物经过纯化作为包被抗原建立了检测H3亚型猪流感抗体的间接ELISA方法。该方法具有较高的特异性和敏感性,重复性良好,通过检测40份血清,与HI检测结果相比较,其符合率达86.5%。该方法为检测H3亚型猪流感抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 猪流感病毒 ha1蛋白 间接ELISA
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2004～2006年江西省乙型流感病毒HA1基因特性分析 被引量：16
7
作者 熊英 邹明霞 +2 位作者 龚甜 方晓艳 施勇 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第2期211-213,238,共4页
目的：了解江西省2004～2006年分离的B型流感病毒株HA1基因变异特征。方法：采集监测医院和疑似流感疫情的流感样病例鼻咽拭子标本进行流感病毒分离,对分离到的B型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基... 目的：了解江西省2004～2006年分离的B型流感病毒株HA1基因变异特征。方法：采集监测医院和疑似流感疫情的流感样病例鼻咽拭子标本进行流感病毒分离,对分离到的B型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行核苷酸序列测定,用DNAStar5.0、BioEdit（Version5.0）、Mage生物软件对测序结果进行分析处理,推导出氨基酸序列,进行基因特性分析。结果：2004年和2005年分离到的B型流感病毒均为B型的Yamagata系;2006年以Victoria系为优势株,但有Yamagata系的活动。9株Yamagata系B型流感病毒HA1区域核苷酸序列长度均为1014 bp,未发现核苷酸的丢失和插入,与疫苗推荐株B/Shanghai/361/2002 HA1区相比较,不同毒株氨基酸同源性为96.4%～97.3%,替换数在10～11个,所有毒株均在9个相同的氨基酸位点发生了相同的替换,在196位增加了一个糖基化位点。12株Victoria系B型流感病毒HA1区域核苷酸序列长度均为1017 bp,未发现核苷酸的丢失和插入,与疫苗推荐株B/Malaysia/2506/2004的HA1区相比较,不同毒株氨基酸同源性为98.4%～99.5%,替换数在2～4个,所有毒株均在2个相同的氨基酸位点发生了相同的替换,在197位增加了一个糖基化位点。结论：江西省2004～2006年Yamagata系B型流感病毒HA1基因特性已发生改变,从基因水平说明Yamagata系B型流感病毒抗原性发生了改变。2006年Victoria系B型流感病毒HA1基因特性有所改变,疫苗仍有预防效果。 展开更多
关键词 B型流感病毒 分离株 ha1区域 基因
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青海省2011-2012年乙型流感病毒HA1基因特性研究 被引量：7
8
作者 于娟 饶华祥 +3 位作者 李红 卢囡囡 易虎 赵生仓 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期32-35,共4页
目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒HA1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株，提取病毒RNA，通过RT—PCR法扩增病毒HA1基因，纯化产物进行核苷酸序列测定，采用DNA Star5．0MegAlign和MEGA4... 目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒HA1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株，提取病毒RNA，通过RT—PCR法扩增病毒HA1基因，纯化产物进行核苷酸序列测定，采用DNA Star5．0MegAlign和MEGA4．0生物软件对测序结果进行分析处理，推导出氨基酸序列并进行基因特性分析。结果12株Victoria系乙流感病毒HA1区域核苷酸序列与2009—2011年WHO推荐疫苗株B／Brisbane／60／2008同源性为88．6％～95．7％，氨基酸替换数在2～5个，所有分离株均在1个相同的氨基酸位点发生了相同的替换，部分分离株在320位减少了一个糖基化位点。5株Yamagata系乙型流感病毒HAl区域核苷酸序列与2011-2012年WHO推荐疫苗株B／Wisconsin／01／2010HA1区相比较同源性为97．7％～99．3％，氨基酸替换数在2—3个，所有分离株均在2个相同的氨基酸位点发生了相同的替换（N116K，D196N），在196位增加了一个糖基化位点。结论青海省2011—2012年乙型流感病毒HA1基因特性正在逐渐发生变异，但尚未形成抗原漂移，今后在流感监测工作中要加强流感病原学的监测，及时发现新的乙型流感病毒变异株。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 ha1基因 抗原决定簇 糖基化位点
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2008～2009年珠海市H3N2亚型流感病毒HA1基因特性分析 被引量：3
9
作者 李红霞 魏泉德 +4 位作者 张丽荣 张静涛 林毅雄 方艳梅 郑予柯 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期117-121,共5页
为了解20082009年珠海市H3N2亚型流感病毒HA1基因变异情况,选择珠海市20082009年期间不同时间点的经狗肾传代细胞（MDCK）培养分离的H3N2亚型流感毒株20株,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增HA1基因片段,将产物纯化并测序,推导氨基酸序列,进... 为了解20082009年珠海市H3N2亚型流感病毒HA1基因变异情况,选择珠海市20082009年期间不同时间点的经狗肾传代细胞（MDCK）培养分离的H3N2亚型流感毒株20株,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增HA1基因片段,将产物纯化并测序,推导氨基酸序列,进行基因进化特性分析。与同时期的疫苗株比较,2008年珠海市流行的H3N2亚型流感毒株HA1区抗原决定簇的氨基酸位点变异数少于4个;2009年珠海市流行的H3N2亚型流感毒株除09-0056外,HA1区存在5个位于抗原决定簇内的变异氨基酸位点。2008年H3N2亚型流感毒株的HA1区的糖基化位点与疫苗株一致;2009年H3N2亚型流感毒株HA1区丢失第144位糖基化位点。20082009年H3N2亚型流感毒株RBS氨基酸序列未见明显变异。与2008年H3N2亚型流感毒株比较,2009年H3N2亚型流感毒株HA1区抗原决定簇内存在多个位点的氨基酸替换。这些说明2008年珠海市流行的H3N2亚型流感病毒不是新变种;2009年流行的H3N2亚型流感病毒为新的变异株,这可能是H3N2亚型流感病毒在2009年6-9月为珠海地区季节性流感流行优势株的原因。 展开更多
关键词 H3N2亚型流感病毒 ha1基因 序列分析 变异
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H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的原核表达及抗原性分析 被引量：3
10
作者 张敦伟 熊永忠 +3 位作者 远立国 贾坤 张桂红 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期157-159,共3页
为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱... 为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的HA1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明,表达的重组HA1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 犬流感病毒 ha1基因 原核表达 抗原性
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2009年成都市流感活动情况及H3N2亚型流感病毒HA1基因特性分析 被引量：6
11
作者 龙冬玲 张晓春 +2 位作者 曹冉冉 邓琦 刘衡川 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期260-263,共4页
目的 分析2009年成都市流感流行情况,探讨甲3流感病毒（H3N2）亚型分离毒株的流行及HA1基因变异和进化。方法 MDCK细胞对咽拭子样品进行病毒分离鉴定,提取病毒核酸,用RT-PCR法扩增HA1基因,对H3N2分离株核酸及氨基酸序列进行亲缘关系分... 目的 分析2009年成都市流感流行情况,探讨甲3流感病毒（H3N2）亚型分离毒株的流行及HA1基因变异和进化。方法 MDCK细胞对咽拭子样品进行病毒分离鉴定,提取病毒核酸,用RT-PCR法扩增HA1基因,对H3N2分离株核酸及氨基酸序列进行亲缘关系分析。结果甲型流感H1N1、H3N2、甲1、B型流感病毒分离率分别为25.2%、7.2%、4.5%、1.5%,流感流行高峰为夏秋季。H3N2与同年疫苗株氨基酸序列比对,同源性为97.0%～98.8%,点突变率为1.8%～3.0%,在抗原决定簇及受体结合部位共有4个位点发生替换：160位N〉K、174位K〉R/N、189位K〉Q、277位R〉Q。部分毒株在160位插入糖基化位点,在181位出现糖基化位点缺失。结论 2009年成都市流感以甲型流感H1N1为主,甲1、甲3及B型流感病毒循环交替并存;H3N2基因特性发生改变,出现抗原漂移。 展开更多
关键词 H3N2流感病毒 ha1基因 序列分析
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2013年-2014年江西省乙型流感病毒HA1基因特性分析 被引量：10
12
作者 肖芳 李健雄 +2 位作者 周珺 徐刚 熊英 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第17期2943-2946,共4页
目的了解江西省2013年-2014年乙型流感病毒毒株HA1基因的变异特征。方法对狗肾传代细胞（MDCK）培养分离得到的乙型流感病毒进行核酸提取,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因后进行核苷酸序列测定,用DNAStar5.0、Mega 4.0软件对测序结果进行分... 目的了解江西省2013年-2014年乙型流感病毒毒株HA1基因的变异特征。方法对狗肾传代细胞（MDCK）培养分离得到的乙型流感病毒进行核酸提取,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因后进行核苷酸序列测定,用DNAStar5.0、Mega 4.0软件对测序结果进行分析,并将其氨基酸序列与WHO推荐的北半球乙型流感病毒疫苗株进行比对。结果2013年-2014年分离的乙型流感病毒均为Yamagata系病毒。19株乙型流感病毒HA1区域核苷酸序列长度均为1 038 bp,未发现核苷酸的丢失和插入。所有毒株的氨基酸序列与北半球疫苗株B/Massachusetts/02/2012的同源性为95.1%～97.7%,有11个位点均发生了氨基酸变异,其中4个变异位于抗原决定簇。结论 2013年-2014年分离的乙型流感病毒HA1区域的氨基酸变异涉及4个抗原决定簇,故需要密切监测本省的乙型流感病毒变异情况,以判断WHO推荐的乙型流感疫苗株对本省的乙型流感病毒的保护作用。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 ha1区域 疫苗株 抗原决定簇
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H5亚型猪流感病毒HA1重组蛋白的制备及间接ELISA检测方法的建立 被引量：3
13
作者 尹可 郭军庆 +2 位作者 黄杰 黎满香 周继勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期762-766,共5页
利用化学合成技术合成H5亚型猪流感病毒(SIV)的HA1基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+),构建了重组表达质粒pET28a-HA1/H5,用重组质粒转化表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,以镍螯合层析纯化表达蛋白;通过优化反应条件,建立了基... 利用化学合成技术合成H5亚型猪流感病毒(SIV)的HA1基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+),构建了重组表达质粒pET28a-HA1/H5,用重组质粒转化表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,以镍螯合层析纯化表达蛋白;通过优化反应条件,建立了基于HA1重组蛋白的H5亚型SIV抗体间接ELISA(iHA1-ELISA)检测方法。SDS-PAGE分析结果显示,在大肠杆菌中成功表达了分子质量为45ku的His-HA1融合蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在;Western-blot分析结果显示,表达蛋白能被抗His单克隆抗体和抗H5亚型SIV阳性血清特异识别。优化iHAI-ELISA中HA1/H5重组蛋白的包被浓度为0.31μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1∶100。特异性测定结果显示,iHA1-ELISA方法不与H1、H3、H9亚型猪流感病毒抗体以及猪圆环病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒阳性血清发生交叉反应;iHA1-ELISA方法与血凝抑制试验的符合率达93.5%。表明利用重组HA1蛋白建立的检测H5亚型SIV抗体的ELISA方法具有良好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H5亚型 ha1蛋白 ELISA
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H3N8亚型马流感病毒HA1基因原核表达载体的构建及表达 被引量：3
14
作者 何晶 马伟 +2 位作者 孙建华 徐泉源 冉多良 《新疆农业大学学报》 CAS 2013年第1期12-15,共4页
采用RT-PCR方法从马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)中扩增的HA1基因片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,测序正确后转化入Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌表达出约53ku,以沉淀性形式存在的重组蛋白,且在37℃,... 采用RT-PCR方法从马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)中扩增的HA1基因片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,测序正确后转化入Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌表达出约53ku,以沉淀性形式存在的重组蛋白,且在37℃,0.4mmol/L IPTG条件下诱导8h表达效果最好。表达产物经切胶纯化后得到纯度较高的目的蛋白。经Western-blot分析,表达的蛋白与抗马流感病毒阳性血清发生特异性反应,证实该蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 H3N8亚型马流感病毒 ha1基因 克隆 原核表达
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北京地区2005—2006年流感病原监测结果与乙型流感病毒HA1序列分析 被引量：13
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作者 彭晓旻 王晓梅 +2 位作者 梁慧杰 郭婧 刘医萌 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第3期431-432,共2页
目的：分析2005～2006年冬春季北京地区流感病原监测及乙型流感病毒种系分布情况。方法：采用狗肾传代细胞（MDCK）和鸡胚培养分离流感病毒，经血清学试验鉴定分型。选取部分乙型流感提取病毒RNA，经RT—PCR扩增得到HA1基因片段并进行... 目的：分析2005～2006年冬春季北京地区流感病原监测及乙型流感病毒种系分布情况。方法：采用狗肾传代细胞（MDCK）和鸡胚培养分离流感病毒，经血清学试验鉴定分型。选取部分乙型流感提取病毒RNA，经RT—PCR扩增得到HA1基因片段并进行核苷酸序列测定，用信息软件进行种系发生树分析。结果：共采集流感样病例标本1874份，经MDCK细胞分离到510株流感病毒。其中H1N1亚型244株（47．84％）；H3N2亚型57株（11．18％）；B型209株（40．98％），208株为Victoria系，1株为Yamagata系。对210份细胞分离阳性标本进行鸡胚培养，共分离到流感病毒9株，全部为H1N1亚型。28株B型优势流行株与当年疫苗株不属于同一谱系，相差较远；与新预测（2006～2007年）的疫苗株亲缘关系最近。结论：北京地区2005～2006年冬春季节存在H1N1、H3N2、B型3种流感病毒流行，以H1N1、B型为优势毒株。B型Victoria系优势株正在通过变异逐步在流行中占据主导地位。新预测流感疫苗可对人群产生良好的保护效果。 展开更多
关键词 流感病毒 监测 ha1基因
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青海省2010～2012年H3亚型流感病毒HA1基因特性研究 被引量：5
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作者 于娟 李红 +3 位作者 饶华祥 卢囡囡 易虎 赵生仓 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第10期889-892,共4页
目的了解2010～2012年青海省H3亚型流感病毒HA1基因变异情况，评价2010～2012wH0推荐流感疫苗株对当地H3亚型流感的预防效果。方法随机选择20J0～2012年流感病原监测中分离到的H3亚型流感毒株，提取病毒RNA，采用RT—PCR法扩增病毒HAl... 目的了解2010～2012年青海省H3亚型流感病毒HA1基因变异情况，评价2010～2012wH0推荐流感疫苗株对当地H3亚型流感的预防效果。方法随机选择20J0～2012年流感病原监测中分离到的H3亚型流感毒株，提取病毒RNA，采用RT—PCR法扩增病毒HAl皋㈨，纯化产物进干亍核仟酸序列测定，采用MEGA4．0软件时其核苷酸序列及所推导的氨基酸序列进行基因特性分析。结果与2010～2012年WHO推荐疫苗株A／Perth／16／2009相比，青海省2010年H3亚型分离株有5～6个位点发生氨基酸替换，其中N81D处于抗原决定簇E区；2011年分离株有7个位点发生氨基酸替换，I。157S处于抗原决定簇BI式；2012年分离株有9个位点发生氨基酸替换，K144N和A198S、N278K分别处于抗原决定簇A区和B区，并在第45和144位增加了2个糖基化位点。结论2010～2012年青海省H3亚型流感病毒HA1基因发生不同程度的变异；2010～2012年wH（）疫苗株A／Perth／16／2009对2010和2011年H3亚型流感的预防有效，对2012年H3亚型流感的预防效果不够理想。 展开更多
关键词 流感病毒 H3亚型 ha1基因 糖基化位点 抗原决定簇
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