流感病毒给全球公共卫生带来了严重威胁,疫苗接种是预防流感及严重并发症的有效手段。本研究分析了北半球2012–2022年间人类甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)流行株血凝素(hemagglutinin,HA)中HA1亚基的氨基酸突变趋势和抗原显性...流感病毒给全球公共卫生带来了严重威胁,疫苗接种是预防流感及严重并发症的有效手段。本研究分析了北半球2012–2022年间人类甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)流行株血凝素(hemagglutinin,HA)中HA1亚基的氨基酸突变趋势和抗原显性位点变化情况。基于世界卫生组织(World Health Organization,WHO)公布的2022年北半球流感疫苗推荐株A/Wisconsin/588/2019(H1N1)和A/Darwin/6/2021(H3N2)的HA1氨基酸序列,通过马赛克(mosaic)遗传算法设计了3种Mosaic-HA1抗原并将其在293F细胞中进行表达、纯化。将纯化后的Mosaic-HA1抗原与明矾佐剂以1:1的体积比混合制备亚单位疫苗并免疫BALB/c小鼠以评价免疫效果。酶联免疫吸附实验表明Mosaic-HA1抗原能产生同时结合两种亚型HA1的IgG,其中结合H3蛋白、H1蛋白的特异性效价IgG效价分别达到10~5、10~3以上,攻毒实验表明Mosaic-HA1能抵抗H3N2和H1N1流行毒株的攻击。本研究通过对不同亚型IAV毒株HA1中免疫显性位点进行重新组合,为多价亚单位流感疫苗开发提供了新思路。展开更多
目的原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F...目的原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F076/2018(mixed)]和Influenza A virus[A/USA/LAN_(P5)_HA/2018(H1N1)]进行截短,取63~286头状结构域氨基酸序列,按照大肠埃希菌常用密码子进行优化,合成基因命名为17Sa、Hebei和USA,并对基因17Sa进行点突变命名为基因17Sa变。将4个基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,并利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。结果成功插入长度为762 bp的目的基因,重组质粒经双酶切(NheⅠ/XhoⅠ)鉴定构建正确。表达的重组蛋白USA相对分子质量约为26000,17Sa、p17Sa和Hebei相对分子质量约为28000,均可与鼠抗His抗体特异性结合。重组蛋白均以包涵体形式表达,在诱导温度37℃,诱导8 h表达量最高。纯化的重组蛋白17Sa、17Sa变、Hebei和USA纯度分别为90%、85%、95%和80%。结论通过原核表达系统成功表达并纯化了目的蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础。展开更多
文摘流感病毒给全球公共卫生带来了严重威胁,疫苗接种是预防流感及严重并发症的有效手段。本研究分析了北半球2012–2022年间人类甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)流行株血凝素(hemagglutinin,HA)中HA1亚基的氨基酸突变趋势和抗原显性位点变化情况。基于世界卫生组织(World Health Organization,WHO)公布的2022年北半球流感疫苗推荐株A/Wisconsin/588/2019(H1N1)和A/Darwin/6/2021(H3N2)的HA1氨基酸序列,通过马赛克(mosaic)遗传算法设计了3种Mosaic-HA1抗原并将其在293F细胞中进行表达、纯化。将纯化后的Mosaic-HA1抗原与明矾佐剂以1:1的体积比混合制备亚单位疫苗并免疫BALB/c小鼠以评价免疫效果。酶联免疫吸附实验表明Mosaic-HA1抗原能产生同时结合两种亚型HA1的IgG,其中结合H3蛋白、H1蛋白的特异性效价IgG效价分别达到10~5、10~3以上,攻毒实验表明Mosaic-HA1能抵抗H3N2和H1N1流行毒株的攻击。本研究通过对不同亚型IAV毒株HA1中免疫显性位点进行重新组合,为多价亚单位流感疫苗开发提供了新思路。
文摘目的原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F076/2018(mixed)]和Influenza A virus[A/USA/LAN_(P5)_HA/2018(H1N1)]进行截短,取63~286头状结构域氨基酸序列,按照大肠埃希菌常用密码子进行优化,合成基因命名为17Sa、Hebei和USA,并对基因17Sa进行点突变命名为基因17Sa变。将4个基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,并利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。结果成功插入长度为762 bp的目的基因,重组质粒经双酶切(NheⅠ/XhoⅠ)鉴定构建正确。表达的重组蛋白USA相对分子质量约为26000,17Sa、p17Sa和Hebei相对分子质量约为28000,均可与鼠抗His抗体特异性结合。重组蛋白均以包涵体形式表达,在诱导温度37℃,诱导8 h表达量最高。纯化的重组蛋白17Sa、17Sa变、Hebei和USA纯度分别为90%、85%、95%和80%。结论通过原核表达系统成功表达并纯化了目的蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础。
