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2例人感染H9N2亚型禽流感病毒的分子溯源及进化特征
1
作者 肖姗 李灵之 +3 位作者 黄政 欧新华 姚栋 裴瑞青 《中国热带医学》 北大核心 2025年第8期1004-1010,1015,共8页
目的分析2025年4月长沙市发现的2例人感染H9N2亚型禽流感病毒并采集相关活禽市场环境样本进行H9N2亚型禽流感病毒分子溯源及进化特征分析,为禽流感防控提供科学依据。方法对2个病例咽拭子样本和相关环境样本中发现的H9N2亚型禽流感病毒... 目的分析2025年4月长沙市发现的2例人感染H9N2亚型禽流感病毒并采集相关活禽市场环境样本进行H9N2亚型禽流感病毒分子溯源及进化特征分析,为禽流感防控提供科学依据。方法对2个病例咽拭子样本和相关环境样本中发现的H9N2亚型禽流感病毒进行基因测序,重点分析血凝素(hemagglutinin,HA)基因和神经氨酸酶(neur‑aminidase,NA)基因的遗传进化关系、同源性、受体结合、蛋白活性、耐药位点及N-糖基化特征。结果共获得10组H9N2亚型禽流感病毒基因序列,其中1组为全基因组序列。经同源性分析,HA基因与福建省分离株相似性最高,NA基因与福建省和重庆市分离株相似性最高。HA基因属于Y280-like h9.4.2.5分支,裂解位点为PSRSSR↓GLF,受体结合位点发生Q226L、Q227M等突变,与Y280-like疫苗株相比抗原位点发生多处突变,潜在N-糖基化位点预测分析显示所有毒株均含有7个潜在N-糖基化位点。NA基因均发生茎部氨基酸序列55~57位缺失,蛋白活性中心发现K135E、I145T突变,其他头部位点发生1个或多个氨基酸突变,未发现耐药位点突变;潜在N-糖基化位点预测分析显示9株含有4个潜在N-糖基化位点,1株含有3个潜在N-糖基化位点,经氨基酸序列比对发现或与其发生N78D突变有关。结论2025年4月长沙的10株H9N2亚型禽流感病毒关键位点及功能结构域呈现多样性变异特征,在本地已形成多条传播链流行,应多维度加强疫情防控工作。 展开更多
关键词 禽流感 h9n2 人感染病例 分子特征 溯源调查
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湖北省鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因生物学特征分析
2
作者 付小强 孙强 +3 位作者 徐惠 董江峰 秦艺 方斌 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1183-1189,共7页
为了解2024年鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异特征及进化规律,本研究采集活禽市场外环境标本,开展H9N2亚型禽流感病毒核酸检测,对阳性标本进行病毒分离,并测定分离毒株的HA和NA基因序列,运用生物信息学软件分析其基因... 为了解2024年鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异特征及进化规律,本研究采集活禽市场外环境标本,开展H9N2亚型禽流感病毒核酸检测,对阳性标本进行病毒分离,并测定分离毒株的HA和NA基因序列,运用生物信息学软件分析其基因特征。系统进化树和核苷酸相似性分析表明,2株分离株的HA和NA基因分别归属于h9.4.2.5c分支和1.2分支,与早期毒株的核苷酸相似性分别为85.57%~91.83%和85.51%~89.29%。氨基酸序列关键位点分析发现,HA蛋白裂解位点为PSRSSR↓GLF,表明其属于低致病性禽流感病毒,且受体结合位点出现T155N、S158N、F/A160N等突变;NA蛋白茎部缺失63~65位的3个氨基酸(TEI),红细胞366-373结合位点发生K/E/S368N、D369N突变,而与NA蛋白耐药性相关的位点未发生突变。进化速率估算结果显示,HA基因平均进化速率为2.479×10^(-3)替代/位点/年,NA基因平均进化速率为1.573×10^(-3)替代/位点/年,其最近共同祖先估算时间分别在2003年和2009年,说明HA基因比NA基因进化更为活跃。研究结果提示,2024年从鄂州市城乡活禽市场外环境分离的H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因检测到部分关键位点突变,这些突变可能增强了病毒对哺乳动物的适应性,在进化过程中存在潜在的跨宿主传播风险,需持续加强对该病毒分子进化的监测,以便评估其公共卫生威胁,为防控策略的制定提供科学依据。 展开更多
关键词 城乡活禽市场 h9n2 禽流感病毒 HA基因 NA基因 生物学特征
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福建湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒HA的分子特征
3
作者 陈珍 朱春华 +5 位作者 陈翠腾 刘斌琼 蔡国漳 万春和 黄瑜 施少华 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期227-234,共8页
目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因... 目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因核苷酸同源率为89.8%~99.4%,均属于h9.4.2.5c进化分支;HA蛋白裂解位点基序均为PSRSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;HA蛋白存在8个相同的潜在糖基化位点,其中第313位的糖基化位点位于HA蛋白裂解位点附近;位于HA受体结合位点第226位氨基酸均为亮氨酸,具有结合哺乳动物唾液酸α-2,6受体的特征。结论5株野鸟源H9N2亚型AIV均为低致病性AIV,具有感染人的特征。 展开更多
关键词 福建湿地 野鸟源 h9n2亚型 禽流感病毒 HA基因
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2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境H9N2亚型禽流感病毒遗传进化及分子特征分析
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作者 李灵之 黄政 +3 位作者 裴瑞青 欧新华 姚栋 肖姗 《疾病监测》 北大核心 2025年第9期1160-1167,共8页
目的 分析2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境中H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化及分子特征,掌握H9N2病毒在活禽市场中的流行特征和传播机制,为禽流感防控措施的制定提供科学依据。方法 采用荧光定量PCR法检测样本中的禽流感病毒,通... 目的 分析2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境中H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化及分子特征,掌握H9N2病毒在活禽市场中的流行特征和传播机制,为禽流感防控措施的制定提供科学依据。方法 采用荧光定量PCR法检测样本中的禽流感病毒,通过鸡胚分离培养获得H9N2亚型阳性毒株。利用二代测序平台对分离株进行全基因组测序,测序结果通过MEGA 7软件进行序列比对和遗传进化分析。结果 2021-2024年,采集长沙市活禽市场外环境标本441份,其中373份(84.58%)甲型流感病毒阳性,356份(80.73%)H9亚型阳性。阳性标本经鸡胚接种后,成功分离出17株H9N2毒株。遗传进化分析显示,17株分离株的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因均属于H9N2亚型禽流感欧亚类Y280-like谱系,且均属于G57基因型。氨基酸序列分析表明,HA蛋白裂解位点无连续碱性氨基酸插入,符合低致病性禽流感病毒的典型特征。在多个关键氨基酸位点发现与病毒跨种感染能力增强及哺乳动物致病力相关的突变,包括HA蛋白的H183N、A190T/V和Q226L,NA蛋白茎部63~65位氨基酸缺失,碱性聚合酶蛋白2的A588V、E627V,碱性聚合酶蛋白1的I368V、D622G,酸性聚合酶蛋白的K356R、S409N,核蛋白的I353V,基质蛋白1的N30D,非结构蛋白1的P42S。此外,16株分离株的基质蛋白2中检测到S31N突变,提示这些毒株对金刚烷胺具有耐药性。结论 长沙市活禽市场外环境禽流感病毒阳性率高,分离毒株具有较高的跨种传播风险,相关部门应加强活禽市场监测并密切关注病毒分子进化特征。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 活禽市场 分子特征 遗传进化
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实时荧光定量PCR与酶法预处理联合应用对H9N2禽流感病毒灭活效果评价的初步研究
5
作者 王慧 王明明 +6 位作者 张杰琼 王娇 李颖 王大燕 王世文 卢学新 董婕 《病毒学报》 北大核心 2025年第3期676-682,共7页
本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测,但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定... 本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测,但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定量消毒剂作用后的残余病毒量的一种方法,但无法评估病毒的感染性。本研究将RT-qPCR技术与酶法预处理相结合,对中低效消毒剂新洁尔灭和75%乙醇灭活H9N2病毒的效果进行评估。结果显示,333 U/mL的蛋白酶K处理30 min,可有效降解受损的病毒囊膜蛋白;随后使用0.2 mg/mL的RNase A处理30 min,可降解裸露的病毒RNA。1%和0.25%的苯扎溴铵分别作用5 min后,经酶法预处理联合RT-qPCR检测,病毒基因组水平分别降低5.67和5.62 lg拷贝数/μL;75%乙醇作用1 min,病毒基因组水平降低5.65 lg拷贝数/μL;作用时间延长至5 min时,病毒基因组水平降低至检测值以下。本研究通过RT-qPCR联合酶法预处理建立了定量评价苯扎溴铵和75%乙醇有效灭活H9N2禽流感病毒的方法 。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9n2亚型 灭活评估 实验室生物安全
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H9N2亚型禽流感病毒双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 刘莉 张贺楠 +4 位作者 莫一群 徐亚亚 金丁丁 齐岩 胡增垒 《中国家禽》 北大核心 2025年第11期154-160,共7页
为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进... 为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进一步对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估,并将建立的方法用于临床样品的检测,与H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒进行比较。结果显示:该方法与其他亚型AIV、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、传染性法氏囊病病毒和传染性支气管炎病毒无交叉反应,检测限为0.1 copies/μL,批内和批间变异系数均小于5%,临床样本检测阳性率(24.3%)高于H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒(18.9%)。研究表明,建立的H9N2 AIV双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强,敏感性较高,能够应用于H9N2 AIV的快速检测。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR HA基因 NA基因
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2024年安徽省H9N2亚型禽流感病毒遗传进化和抗原性分析 被引量：1
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作者 李玉冬 周迎春 +13 位作者 段倩倩 曹婕 董金泽 陈洪壮 束思成 佟琪 赵传阔 王维 刘畅 王军 陈静 蒲娟 何长生 朱良强 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期1-11,共11页
为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,... 为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,结合安徽省所有H9N2亚型AIV公开序列数据,进行8个基因片段(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS)的同源性分析、遗传进化分析、关键氨基酸和糖基化位点分析以及抗原性分析。结果显示,本试验共采集了1033份拭子样本,鉴定出334株H9N2亚型AIV,分离率为32.33%。4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株的PB1、PA、HA基因序列一致度差异较大(88.65%~98.05%),而PB2、NP、NA、M、NS基因序列一致度较为接近(92.19%~99.08%)。HA基因的遗传进化分析显示,2株鸡源和1株鸭源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.2分支,1株鹅源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.3分支;PB2、PB1、PA、NP、NA、M、NS基因遗传进化分析显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株与近年来的人源H9N2亚型AIV分离毒株遗传距离接近,2024年2月鸡源H9N2亚型AIV分离毒株的PA基因与野鸟源H9N2亚型AIV的亲缘关系较近。关键氨基酸分析显示,与参考株序列相比,4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白的130-loop、150-loop和190-helix存在明显氨基酸多态性;鹅源H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白在第289~291位可能出现了N-糖基化修饰的缺失,值得关注。抗原性评估显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株均属于当前优势流行的抗原群,鹅源H9N2亚型AIV分离毒株表现出明显的抗原漂移。结果表明,2024年安徽H9N2亚型AIV在不同宿主中显示出较高的遗传多样性,HA蛋白的受体结构域存在变异和抗原性漂移,有向家禽和人类传播扩散的风险隐患。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感 遗传进化 抗原性分析
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浙江省5株H9N2亚型禽流感病毒的血凝素基因分子特征与遗传进化分析
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作者 刘士哲 华炯钢 +10 位作者 陈柳 谢荣辉 叶伟成 张传亮 朱寅初 冯肖肖 付媛 倪征 张存 屈勇刚 云涛 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第12期2494-2503,共10页
H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是我国禽类中最流行的低致病性禽流感(LPAIV),因其持续的抗原漂移与跨物种传播风险对养殖业和公共卫生安全构成严重威胁。为了解浙江省流行的H9N2亚型AIV的遗传进化特征,本研究对当地分... H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是我国禽类中最流行的低致病性禽流感(LPAIV),因其持续的抗原漂移与跨物种传播风险对养殖业和公共卫生安全构成严重威胁。为了解浙江省流行的H9N2亚型AIV的遗传进化特征,本研究对当地分离到的5株H9N2亚型AIV毒株的血凝素(HA)基因进行测序与分子特征分析。结果显示,5株分离株分属于欧亚谱系的h9.4.2.1和h9.4.2.5分支,HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为83.51%~99.88%和86.33%~99.83%。值得注意的是,分离株A/Chicken/Zhejiang/HZ01/2022和A/Duck/Zhejiang/TZ01/2022与疫苗株CK/SS/94的HA基因核苷酸同源性仅为88.24%~88.35%,氨基酸同源性为89.43%~90.82%。所有分离株的HA裂解位点均呈单碱性氨基酸特征,符合低致病性病毒特性。受体结合位点分析发现存在I163T、H191N、A198T/V、Q234L和Q235M突变,这些突变可能增强病毒与人源唾液酸α-2,6-半乳糖受体的结合能力。糖基化位点分析显示,分离株存在7~8个潜在糖基化位点,其中218和551位点缺失,206和313位点增加,这些变异可能增强病毒对哺乳动物宿主的适应性。此外,HA蛋白抗原位点存在234、285和334位点突变,而181、280、281与296位点高度保守。研究表明,浙江省H9N2亚型AIV通过关键位点突变和糖基化模式改变持续进化,可能导致病毒毒力增强、疫苗保护效力下降,并增加跨物种传播风险。亟须加强本地流行毒株的分子监测,优化疫苗株匹配性,以提升防控效能并降低公共卫生威胁。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9n2亚型 HA基因 遗传进化 基因分析
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表达H9N2亚型禽流感病毒血凝素HA1重组乳酸乳球菌的构建及免疫效果评价
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作者 王志悦 李欣蕊 +8 位作者 崔子扬 贺志新 孙嘉咛 王许刚 王瑞 李春红 徐明举 张瑞华 徐彤 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期48-54,共7页
本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、W... 本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、Western blot鉴定HA1在重组乳酸菌的表达情况;将重组乳酸乳球菌口服免疫10日龄雏鸡,每只鸡口服2×10~9 CFU菌液,共免疫2次;分别在免疫后第7、14天采集血清与气管灌洗液,并检测其抗体与细胞因子水平。结果显示:成功构建出重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,且重组乳酸乳球菌成功表达血凝素HA1蛋白,该蛋白能够与H9亚型禽流感阳性血清发生特异性免疫结合反应;雏鸡口服免疫后,其血清与气管灌洗液中抗体与细胞因子水平与对照组相比明显上升。本研究表明,构建的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1能够有效刺激免疫应答,口服免疫雏鸡后能够获得良好的免疫效果。 展开更多
关键词 h9n2禽流感病毒 血凝素 乳酸乳球菌
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增殖H9N2禽流感病毒的MDCK细胞传代稳定性及病毒对细胞适应性研究
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作者 张伦 单学强 +1 位作者 周芳 李丽敏 《河北农业大学学报》 北大核心 2025年第6期70-76,108,共8页
为研究增殖H9N2禽流感病毒的MDCK细胞传代稳定性及病毒对细胞的适应性,本试验对悬浮培养的MDCK细胞连续传40代,进行细胞形态及胞核学检查;用H9N2亚型禽流感病毒接种P10、P20、P30和P40代次的细胞,进行敏感性试验;利用MDCK细胞筛选细胞... 为研究增殖H9N2禽流感病毒的MDCK细胞传代稳定性及病毒对细胞的适应性,本试验对悬浮培养的MDCK细胞连续传40代,进行细胞形态及胞核学检查;用H9N2亚型禽流感病毒接种P10、P20、P30和P40代次的细胞,进行敏感性试验;利用MDCK细胞筛选细胞适应毒株;用对细胞适应较好的毒株SD/28/17在细胞上进行连续传代试验。结果显示,悬浮培养的MDCK细胞连续传代40代,细胞状态良好,形态一致;经胞核学检查染色体众数为78,各代差异不超过15%;P10、P20、P30和P40代次的细胞接种H9N2禽流感病毒后HA效价和TCID50无明显差异;筛选出对细胞适应较好的毒株SD/28/17株,在细胞上连续传代10代,病毒毒价未降低,且HA和NA基因的氨基酸位点均未发生突变。研究结果为H9N2亚型禽流感病毒疫苗研发提供了重要的理论和技术支撑。 展开更多
关键词 悬浮培养 MDCK细胞 h9n2亚型禽流感病毒 连续传代 稳定性
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G57基因型H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统的建立与验证
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作者 史玉婷 韩心雨 +5 位作者 钟沐卉 林耀忠 柳腾飞 李焰 尹会方 贾伟新 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1825-1833,共9页
旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构... 旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构建,共转染293T细胞成功拯救毒株命名为rM。测定病毒的稳定性和生长曲线;进行动物试验,从传播效率、致病性角度验证克隆毒株与原毒的一致性。结果显示:M毒株为G57基因型,为近年的流行毒株。M毒株与rM毒株在酸稳定性、热稳定性、致病性以及传播性等方面保持一致的生物学特性。综上,成功建立了G57基因型H9N2亚型AIV的反向遗传系统,且从体内和体外试验两个方面全面验证M与rM的生物学特性保持一致。 展开更多
关键词 反向遗传 h9n2 禽流感病毒 G57基因型
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2023—2024年山东省H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析和生物学特性研究
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作者 高振涛 高斌 +2 位作者 张瑞华 徐彤 李旭冬 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期23-34,共12页
为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,... 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,利用反向遗传操作技术构建亲本毒株(SD11、SD341)和重组毒株(re_SD341),将重组毒株PA基因中携带的宿主适应性位点突变为禽源模式(PA-R356K/N409S),检测3株毒株在不同宿主细胞中的复制能力,并进一步检测SD341和re_SD341毒株对小鼠的致病能力。结果显示,从54份病料中分离获得2株H9N2亚型AIV,2株分离株与2000年之后国内疫苗株同源性较高,核苷酸相似性达90%以上;HA基因遗传进化分析结果显示,2株分离毒株均属于B分支中的B4.7.2分支,且8个基因片段均与一些人源分离毒株亲缘关系较近,其中HA、PB1、PB2和PA基因与一些人源分离毒株的核苷酸相似性超过90%;分子特征分析结果显示,2株分离毒株HA蛋白裂解位点均为PSRSSR↓GL,符合2020年左右B分支中流行毒株分子特征;与早期代表毒株相比,NA蛋白茎部均有缺失且在第368位均增加1个新的潜在糖基化位点;2株毒株的HA、PB1、PB2和PA蛋白均携带宿主适应性突变位点,其中PA蛋白发生K356R和S409N适应性突变;生物学特性验证结果显示,与re_SD341重组毒株相比,SD341亲本毒株在人非小细胞肺癌细胞系(A549)中的复制能力更强(P<0.0001),并且在一定时间内可导致小鼠的体重明显下降。结果表明,本试验分离的2株H9N2 AIV毒株均为低致病性毒株,病毒发生不同程度的变异进化,其中一些病毒蛋白包含哺乳动物适应性突变,增加了其跨种传播的风险,本试验结果为我国H9N2亚型AIV的进化提供了参考,为禽流感综合防控和公共卫生安全提供了数据支撑。 展开更多
关键词 h9n2 禽流感病毒 遗传进化 跨种传播
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云南地区28株H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析
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作者 刘照生 周洁楠 +6 位作者 伏晓庆 赵晓南 张美玲 孙艳红 韩晓宇 倪瑞泽 陈瑶瑶 《病毒学报》 北大核心 2025年第2期407-416,共10页
为了解云南地区流行的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的遗传变异情况,并为进一步研究和防控提供依据,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对2020-2023年云南省部分地区采集的环境标本进行H9N2亚型AIV核酸检测,对阳性标... 为了解云南地区流行的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的遗传变异情况,并为进一步研究和防控提供依据,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对2020-2023年云南省部分地区采集的环境标本进行H9N2亚型AIV核酸检测,对阳性标本进行鸡胚病毒分离实验,对分离获得的28株H9N2亚型阳性AIV的血凝素(HA)基因片段进行扩增和测序,利用生物信息软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析,受体结合位点、抗原位点、潜在糖基化等关键位点分析,并构建系统进化树。分析结果显示,28株分离株的HA基因属于欧亚分支Y280为代表的第Ⅰ群,与疫苗株A/chicken/Jiangsu/WJ57/2012在同一分支,核苷酸同源性为90.63%~100%,氨基酸同源性为92.45%~100%,与中国最早分离的疫苗株A/chicken/Beijing/1/1994(H9N2)核苷酸同源性整体较低,为84.18%~85.68%,氨基酸同源性为85.73%~88.72%;28株分离株HA蛋白裂解位点均为PSRSSR↓GLF,受体结合位点存在A198T/V、T163N、N232H、Q234L、Q235M突变,其中Q234L突变具有和人流感受体受体结合的特性;抗原位点仅在234、285、334位点存在变异,其他位点相对保守;分离株存在7~8潜在糖基化位点,主要变异表现在218、492位点的缺失和313、491位点的增加。28株H9N2亚型AIV分离株均为低致病性禽流感病毒,存在人易感位点,与参考株比较发生了一定程度的变异,应加强H9N2亚型AIV病毒的监测,密切关注其变异情况。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9n2亚型 HA基因 序列分析
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黄芩苷对感染H9N2亚型禽流感的小鼠肺泡上皮细胞分泌Ⅰ型干扰素的影响
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作者 梁丽娜 孙红丹 +2 位作者 乌仁图亚 张涛 胡格 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期528-537,共10页
本研究旨在探究黄芩苷对感染H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)的小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12细胞)中Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,进一步揭示黄芩苷在体外抗禽流感病毒的作用机制,以及其与MLE-12细胞免疫功能之间的关系,以期为揭示中药的抗... 本研究旨在探究黄芩苷对感染H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)的小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12细胞)中Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,进一步揭示黄芩苷在体外抗禽流感病毒的作用机制,以及其与MLE-12细胞免疫功能之间的关系,以期为揭示中药的抗病毒机理提供理论依据。首先在体外建立感染H9N2 AIV的MLE-12细胞模型,利用空斑法确定H9N2 AIV对MLE-12细胞的感染复数,毒性试验确定使用黄芩苷的安全剂量。另外,利用荧光定量PCR和ELISA方法检测MLE-12细胞IFN-Ⅰ的表达情况。结果,H9N2 AIV作用于MLE-12细胞的感染复数是MOI=0.05;黄芩苷的安全药物浓度应小于20μg/mL;H9N2 AIV能够诱导MLE-12细胞表达IFN-α和IFN-β;在第24小时黄芩苷高剂量组(15μg/mL)IFN-α和IFN-β基因的相对表达量显著增加(P<0.05);在第6小时黄芩苷低、中、高3种剂量组中MLE-12细胞IFN-α的蛋白表达量显著增加(P<0.05),而且作用12和24小时显著增加了MLE-12细胞IFN-β的蛋白表达量(P<0.05)。研究表明H9N2 AIV可以诱导MLE-12细胞表达IFN-α和IFN-β,黄芩苷通过提高MLE-12细胞中IFN-β的表达水平快速响应H9N2 AIV感染,以发挥抗病毒效应。 展开更多
关键词 黄芩苷 h9n2亚型禽流感病毒 小鼠肺泡上皮细胞 Ⅰ型干扰素
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连翘脂苷A通过调控TLR3-NF-κB信号通路抑制H9N2亚型禽流感病毒复制
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作者 张泰铭 李雅萱 +1 位作者 汪长寿 胡格 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5266-5276,共11页
本研究旨在探讨连翘脂苷A(forsythiaside A,FTA)对H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)在肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)中复制的抑制作用及其潜在机制。采用不同浓度的连翘脂苷A处理H9N2 AIV感染的PMVE... 本研究旨在探讨连翘脂苷A(forsythiaside A,FTA)对H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)在肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)中复制的抑制作用及其潜在机制。采用不同浓度的连翘脂苷A处理H9N2 AIV感染的PMVECs,使用MTT法检测细胞毒性,采用RT-qPCR分析病毒复制情况。通过Western blot检测TLR3、TRIF和NF-κB蛋白表达水平,采用ELISA检测炎性细胞因子(TNF-α、IL-6)及I型干扰素(IFN-α、IFN-β)的分泌情况。研究结果表明,连翘脂苷A能显著抑制H9N2 AIV的复制(P<0.05),其抑制作用呈剂量依赖性;下调TLR3、TRIF及NF-κB蛋白的过表达(P<0.05),降低促炎性细胞因子分泌(P<0.05),同时增强I型干扰素的生成(P<0.05)。连翘脂苷A通过调控TLR3-NF-κB信号通路及细胞因子表达,展现出针对H9N2 AIV的显著抗病毒活性,具有作为新型宿主靶向抗病毒药物的潜力。 展开更多
关键词 连翘脂苷A h9n2禽流感病毒 TLR3-NF-κB信号通路 细胞因子 肺微血管内皮细胞 抗病毒治疗 中药
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H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白150-Loop结构域多态性变异对抗原性的影响
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作者 董金泽 赵传阔 +1 位作者 王林林 蒲娟 《中国家禽》 北大核心 2025年第11期75-83,共9页
为了解我国流行的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)蛋白150-Loop结构域多态性变异对抗原性的影响,研究通过反向遗传系统拯救多种H9N2150-Loop组合突变株,利用血凝抑制(HI)试验对其抗原性变化进行检测。结果显示:我国H9N2AIV流行毒株... 为了解我国流行的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)蛋白150-Loop结构域多态性变异对抗原性的影响,研究通过反向遗传系统拯救多种H9N2150-Loop组合突变株,利用血凝抑制(HI)试验对其抗原性变化进行检测。结果显示:我国H9N2AIV流行毒株的多态性组合主要包括早期分支毒株特征的_(145)TQKNNA_(150),以及当前B4.7分支毒株特征的_(145)TRKDGN_(150)、_(145)TRKNGE_(150)、_(145)TRKNGD_(150)和_(145)TRKNGN_(150)类型,在早期分支毒株上分别替换了B4.7分支的4种突变组合的突变株均被成功拯救;组合突变株与野生株产生了明显抗原性差异,抗原距离大于2个抗原单位,但4种突变株之间抗原性差异有限,抗原距离均小于1个抗原单位。该抗原性变异也通过微量中和试验和同源建模预测得到了进一步的验证。研究表明,B4.7分支与早期分支间出现的150-Loop变异对抗原漂移的产生起到重要作用,但是B4.7分支内的多态性组合变化尚未构成抗原漂移,结果为H9N2亚型禽流感临床防控和抗原性评估提供了理论依据。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 HA蛋白 150-Loop 抗原性
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神经介素B和受体对H9N2亚型流感病毒感染诱导的ITCH表达的影响
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作者 田世茂 田珂 +5 位作者 刘玉钤 辜晴新 沈昀知 张骋怀 包银莉 杨桂红 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1834-1842,共9页
甲型流感病毒(IAV)编码的基质蛋白1(M1)通过调控E3泛素连接酶ITCH介导的泛素化修饰反应拮抗宿主的抗病毒免疫反应。本课题前期研究表明,神经介素B(NMB)和其受体NMBR具有抑制IAV的先天性免疫应答反应的作用,但二者对IAV感染诱导的E3泛素... 甲型流感病毒(IAV)编码的基质蛋白1(M1)通过调控E3泛素连接酶ITCH介导的泛素化修饰反应拮抗宿主的抗病毒免疫反应。本课题前期研究表明,神经介素B(NMB)和其受体NMBR具有抑制IAV的先天性免疫应答反应的作用,但二者对IAV感染诱导的E3泛素连接酶ITCH和M1表达的影响如何,尚未见报道。因此,本文采用外源性NMB及H9N2亚型禽流感病毒刺激模型,适时干扰和过表达NMBR,分别从体内外水平分析NMB和NMBR对ITCH和M1蛋白的表达水平的影响。结果显示:添加外源性NMB和过表达NMBR均可显著抑制H9N2亚型禽流感病毒感染的A549细胞和小鼠肺组织中ITCH表达;与之相对,干扰NMBR表达则可显著促进A549细胞和小鼠肺组织中ITCH表达;此外,NMB和NMBR对H9N2亚型禽流感病毒感染诱导的ITCH的表达趋势与M1蛋白的表达呈现正相关。以上结果表明,NMB和NMBR可通过调节ITCH的表达而影响H9N2编码的M1蛋白的表达,从而发挥抗H9N2亚型禽流感病毒感染的先天性免疫反应。 展开更多
关键词 神经介素B 神经介素B受体NMBR h9n2流感病毒 E3泛素连接酶ITCH
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H9N2亚型禽流感的流行病学与防控措施 被引量：1
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作者 赵艳姣 《北方牧业》 2025年第11期35-35,共1页
H9N2亚型禽流感是我国二类传染病,本病在家禽和水禽中普遍发生,可造成蛋鸡、蛋鸭、蛋鹅产蛋量下降,肉鸡、肉鹅以及肉鸭复合型呼吸道疾病,给养禽业造成了巨大的经济损失。本文对H9N2亚型禽流感的流行病学和防控措施进行综合阐述,为今后... H9N2亚型禽流感是我国二类传染病,本病在家禽和水禽中普遍发生,可造成蛋鸡、蛋鸭、蛋鹅产蛋量下降,肉鸡、肉鹅以及肉鸭复合型呼吸道疾病,给养禽业造成了巨大的经济损失。本文对H9N2亚型禽流感的流行病学和防控措施进行综合阐述,为今后在临床上预防禽H9N2亚型禽流感的发生提供基础依据。 展开更多
关键词 防控措施 流行病学 h9n2亚型禽流感
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稳定表达IRF2基因DF-1细胞株的建立及其对H9N2 AIV复制的影响
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作者 晋晨阳 马露露 +2 位作者 郭梓轩 赵青青 代曼曼 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第5期169-178,共10页
为构建一种稳定表达干扰素调节因子2(Interferon regulatory factor 2,IRF2)的DF-1细胞株,本研究首先针对IRF2成功构建重组慢病毒,再用重组慢病毒感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素及有限稀释法筛选获得IRF2过表达多克隆细胞株。对构建的细胞... 为构建一种稳定表达干扰素调节因子2(Interferon regulatory factor 2,IRF2)的DF-1细胞株,本研究首先针对IRF2成功构建重组慢病毒,再用重组慢病毒感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素及有限稀释法筛选获得IRF2过表达多克隆细胞株。对构建的细胞株进行活力检测、Real-time qPCR以及Western blot等方法验证IRF2的体外表达效率,病毒增殖试验验证该细胞株对H9N2 AIV复制的影响,最后,通过双荧光素报告系统验证IRF2对干扰素刺激基因的调控作用。结果表明:1)细胞活性检测显示,稳定表达IRF2对细胞活性无显著影响(P>0.05)。2)Realtime qPCR以及Western blot证明IRF2的mRNA水平和蛋白水平在筛选的细胞株中表达相较于对照组细胞极显著增高(P<0.001)。3)Real-time qPCR(P<0.001)、Western blot(P<0.01)、TCID50(P<0.01)的体外试验证明,过表达DF-1-IRF2细胞株具有促进H9N2 AIV增殖的作用。4)双荧光素报告系统结果表明,IRF2能够极显著抑制ISRE(P<0.01)和NF-κB(P<0.01)活性,显著抑制IRF7(P<0.05)的活性。综上,本研究成功构建能够稳定表达IRF2基因的DF-1-IRF2细胞株,其能够增强H9N2 AIV的复制水平,为进一步研究IRF2在H9N2 AIV复制机制中的作用提供基础。 展开更多
关键词 h9n2 AIV 慢病毒载体 DF-1细胞 IRF2
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2023—2024年我国部分地区H9N2亚型禽流感病毒流行病学调查和疫苗株筛选
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作者 王金右 车艳杰 +3 位作者 宋新宇 张博文 付旭彬 孙英峰 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期12-22,共11页
为了解2023年12月—2024年9月我国H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子流行病学和遗传变异情况,并筛选免疫原性更好的H9N2亚型AIV疫苗株,本试验自甘肃、广西、山东、河北、辽宁、黑龙江、广东、湖北、江苏、安徽、河南、内蒙古和山西采集280... 为了解2023年12月—2024年9月我国H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子流行病学和遗传变异情况,并筛选免疫原性更好的H9N2亚型AIV疫苗株,本试验自甘肃、广西、山东、河北、辽宁、黑龙江、广东、湖北、江苏、安徽、河南、内蒙古和山西采集280份疑似AIV发病肉鸡和蛋鸡的临床样本,进行AIV-H9亚型核酸检测、HA基因测序分析和病毒分离,并采用分离毒制备油乳剂灭活疫苗,与购买的商品化三联灭活疫苗进行交叉血凝抑制(HI)试验和攻毒保护试验,以筛选出免疫原性较好的毒株进行攻毒保护试验。结果显示,280份样本中24份呈H9N2亚型AIV阳性,24份阳性样本的HA基因均属于h9.4.2.5分支(也被称为Y280谱系),它们之间的HA核苷酸同源性为90.10%~99.90%,氨基酸同源性为91.44%~99.82%。24份阳性样本的HA蛋白裂解位点均为333PSRSSR↓GLF341,符合低致病性AIV特征;HA蛋白受体结合位点变异主要表现为在R381K、Q234L和T198V的突变。将24份阳性样本接种无特定病原体(SPF)鸡胚获得9株分离毒,其中A/Chicken/Shandong/JY17/2024(H9N2)(简称SD17株)交叉HI抗体滴度较高,且制备的油乳剂灭活疫苗对流行毒株的免疫保护率不低于90%。结果表明,h9.4.2.5分支为我国H9亚型AIV的HA基因主流分支,结合关键氨基酸位点分析,H9亚型AIV逐步向哺乳动物适应性和气溶胶传播方向发生变异。本试验分离的A/Chicken/Shandong/JY17/2024(H9N2)制备的油乳剂灭活疫苗对H9N2亚型AIV流行毒株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。 展开更多
关键词 h9n2亚型禽流感病毒 流行病学调查 HA基因 交叉免疫保护
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