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2例人感染H9N2亚型禽流感病毒的分子溯源及进化特征
1
作者 肖姗 李灵之 +3 位作者 黄政 欧新华 姚栋 裴瑞青 《中国热带医学》 北大核心 2025年第8期1004-1010,1015,共8页
目的分析2025年4月长沙市发现的2例人感染H9N2亚型禽流感病毒并采集相关活禽市场环境样本进行H9N2亚型禽流感病毒分子溯源及进化特征分析,为禽流感防控提供科学依据。方法对2个病例咽拭子样本和相关环境样本中发现的H9N2亚型禽流感病毒... 目的分析2025年4月长沙市发现的2例人感染H9N2亚型禽流感病毒并采集相关活禽市场环境样本进行H9N2亚型禽流感病毒分子溯源及进化特征分析,为禽流感防控提供科学依据。方法对2个病例咽拭子样本和相关环境样本中发现的H9N2亚型禽流感病毒进行基因测序,重点分析血凝素(hemagglutinin,HA)基因和神经氨酸酶(neur‑aminidase,NA)基因的遗传进化关系、同源性、受体结合、蛋白活性、耐药位点及N-糖基化特征。结果共获得10组H9N2亚型禽流感病毒基因序列,其中1组为全基因组序列。经同源性分析,HA基因与福建省分离株相似性最高,NA基因与福建省和重庆市分离株相似性最高。HA基因属于Y280-like h9.4.2.5分支,裂解位点为PSRSSR↓GLF,受体结合位点发生Q226L、Q227M等突变,与Y280-like疫苗株相比抗原位点发生多处突变,潜在N-糖基化位点预测分析显示所有毒株均含有7个潜在N-糖基化位点。NA基因均发生茎部氨基酸序列55~57位缺失,蛋白活性中心发现K135E、I145T突变,其他头部位点发生1个或多个氨基酸突变,未发现耐药位点突变;潜在N-糖基化位点预测分析显示9株含有4个潜在N-糖基化位点,1株含有3个潜在N-糖基化位点,经氨基酸序列比对发现或与其发生N78D突变有关。结论2025年4月长沙的10株H9N2亚型禽流感病毒关键位点及功能结构域呈现多样性变异特征,在本地已形成多条传播链流行,应多维度加强疫情防控工作。 展开更多
关键词 禽流感 h9N2 人感染病例 分子特征 溯源调查
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福建湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒HA的分子特征
2
作者 陈珍 朱春华 +5 位作者 陈翠腾 刘斌琼 蔡国漳 万春和 黄瑜 施少华 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期227-234,共8页
目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因... 目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因核苷酸同源率为89.8%~99.4%,均属于h9.4.2.5c进化分支;HA蛋白裂解位点基序均为PSRSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;HA蛋白存在8个相同的潜在糖基化位点,其中第313位的糖基化位点位于HA蛋白裂解位点附近;位于HA受体结合位点第226位氨基酸均为亮氨酸,具有结合哺乳动物唾液酸α-2,6受体的特征。结论5株野鸟源H9N2亚型AIV均为低致病性AIV,具有感染人的特征。 展开更多
关键词 福建湿地 野鸟源 h9N2亚型 禽流感病毒 HA基因
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湖北省鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因生物学特征分析
3
作者 付小强 孙强 +3 位作者 徐惠 董江峰 秦艺 方斌 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1183-1189,共7页
为了解2024年鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异特征及进化规律,本研究采集活禽市场外环境标本,开展H9N2亚型禽流感病毒核酸检测,对阳性标本进行病毒分离,并测定分离毒株的HA和NA基因序列,运用生物信息学软件分析其基因... 为了解2024年鄂州市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异特征及进化规律,本研究采集活禽市场外环境标本,开展H9N2亚型禽流感病毒核酸检测,对阳性标本进行病毒分离,并测定分离毒株的HA和NA基因序列,运用生物信息学软件分析其基因特征。系统进化树和核苷酸相似性分析表明,2株分离株的HA和NA基因分别归属于h9.4.2.5c分支和1.2分支,与早期毒株的核苷酸相似性分别为85.57%~91.83%和85.51%~89.29%。氨基酸序列关键位点分析发现,HA蛋白裂解位点为PSRSSR↓GLF,表明其属于低致病性禽流感病毒,且受体结合位点出现T155N、S158N、F/A160N等突变;NA蛋白茎部缺失63~65位的3个氨基酸(TEI),红细胞366-373结合位点发生K/E/S368N、D369N突变,而与NA蛋白耐药性相关的位点未发生突变。进化速率估算结果显示,HA基因平均进化速率为2.479×10^(-3)替代/位点/年,NA基因平均进化速率为1.573×10^(-3)替代/位点/年,其最近共同祖先估算时间分别在2003年和2009年,说明HA基因比NA基因进化更为活跃。研究结果提示,2024年从鄂州市城乡活禽市场外环境分离的H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因检测到部分关键位点突变,这些突变可能增强了病毒对哺乳动物的适应性,在进化过程中存在潜在的跨宿主传播风险,需持续加强对该病毒分子进化的监测,以便评估其公共卫生威胁,为防控策略的制定提供科学依据。 展开更多
关键词 城乡活禽市场 h9N2 禽流感病毒 HA基因 NA基因 生物学特征
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2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境H9N2亚型禽流感病毒遗传进化及分子特征分析
4
作者 李灵之 黄政 +3 位作者 裴瑞青 欧新华 姚栋 肖姗 《疾病监测》 北大核心 2025年第9期1160-1167,共8页
目的 分析2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境中H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化及分子特征,掌握H9N2病毒在活禽市场中的流行特征和传播机制,为禽流感防控措施的制定提供科学依据。方法 采用荧光定量PCR法检测样本中的禽流感病毒,通... 目的 分析2021-2024年湖南省长沙市活禽市场外环境中H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化及分子特征,掌握H9N2病毒在活禽市场中的流行特征和传播机制,为禽流感防控措施的制定提供科学依据。方法 采用荧光定量PCR法检测样本中的禽流感病毒,通过鸡胚分离培养获得H9N2亚型阳性毒株。利用二代测序平台对分离株进行全基因组测序,测序结果通过MEGA 7软件进行序列比对和遗传进化分析。结果 2021-2024年,采集长沙市活禽市场外环境标本441份,其中373份(84.58%)甲型流感病毒阳性,356份(80.73%)H9亚型阳性。阳性标本经鸡胚接种后,成功分离出17株H9N2毒株。遗传进化分析显示,17株分离株的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因均属于H9N2亚型禽流感欧亚类Y280-like谱系,且均属于G57基因型。氨基酸序列分析表明,HA蛋白裂解位点无连续碱性氨基酸插入,符合低致病性禽流感病毒的典型特征。在多个关键氨基酸位点发现与病毒跨种感染能力增强及哺乳动物致病力相关的突变,包括HA蛋白的H183N、A190T/V和Q226L,NA蛋白茎部63~65位氨基酸缺失,碱性聚合酶蛋白2的A588V、E627V,碱性聚合酶蛋白1的I368V、D622G,酸性聚合酶蛋白的K356R、S409N,核蛋白的I353V,基质蛋白1的N30D,非结构蛋白1的P42S。此外,16株分离株的基质蛋白2中检测到S31N突变,提示这些毒株对金刚烷胺具有耐药性。结论 长沙市活禽市场外环境禽流感病毒阳性率高,分离毒株具有较高的跨种传播风险,相关部门应加强活禽市场监测并密切关注病毒分子进化特征。 展开更多
关键词 h9N2亚型禽流感病毒 活禽市场 分子特征 遗传进化
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实时荧光定量PCR与酶法预处理联合应用对H9N2禽流感病毒灭活效果评价的初步研究
5
作者 王慧 王明明 +6 位作者 张杰琼 王娇 李颖 王大燕 王世文 卢学新 董婕 《病毒学报》 北大核心 2025年第3期676-682,共7页
本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测,但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定... 本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测,但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定量消毒剂作用后的残余病毒量的一种方法,但无法评估病毒的感染性。本研究将RT-qPCR技术与酶法预处理相结合,对中低效消毒剂新洁尔灭和75%乙醇灭活H9N2病毒的效果进行评估。结果显示,333 U/mL的蛋白酶K处理30 min,可有效降解受损的病毒囊膜蛋白;随后使用0.2 mg/mL的RNase A处理30 min,可降解裸露的病毒RNA。1%和0.25%的苯扎溴铵分别作用5 min后,经酶法预处理联合RT-qPCR检测,病毒基因组水平分别降低5.67和5.62 lg拷贝数/μL;75%乙醇作用1 min,病毒基因组水平降低5.65 lg拷贝数/μL;作用时间延长至5 min时,病毒基因组水平降低至检测值以下。本研究通过RT-qPCR联合酶法预处理建立了定量评价苯扎溴铵和75%乙醇有效灭活H9N2禽流感病毒的方法 。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9N2亚型 灭活评估 实验室生物安全
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玉朗伞查尔酮对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响及机制研究
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作者 梁杏梅 农慧亮 +5 位作者 廖乃英 刘安韬 蒙泔竹 黄仁彬 张婷 傅鹏 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第12期31-39,共9页
目的探讨玉朗伞查尔酮(YLSC)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及可能机制。方法将H9c2心肌细胞分为空白对照组、模型组、YLSC低、中、高剂量组,YLSC干预后,以浓度为1μmol/L的AngⅡ诱导细胞损伤模型。细胞计数法(... 目的探讨玉朗伞查尔酮(YLSC)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及可能机制。方法将H9c2心肌细胞分为空白对照组、模型组、YLSC低、中、高剂量组,YLSC干预后,以浓度为1μmol/L的AngⅡ诱导细胞损伤模型。细胞计数法(CCK-8)检测细胞活力,单丹磺酰尸胺染色法(MDC)检测细胞自噬体的形成,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测心肌细胞三磷酸腺苷(ATP)含量,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测Bcl2-腺病毒E1B 19 k Da相互作用蛋白3(Bnip-3)及自噬相关蛋白5(Atg5)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬标记蛋白p62、Beclin1及LC3Ⅱ/LC3I表达。结果YLSC能减轻AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞损伤,CCK-8检测提示YLSC能提高心肌细胞的活力(P<0.05或P<0.01),MDC染色法提示YLSC能促使自噬体形成,DCFH-DA荧光探针法检测结果显示YLSC能减少ROS的生成(P<0.01),Hoechst 33342染色法检测结果显示YLSC能减少细胞凋亡(P<0.01),ELISA检测结果显示YLSC能提高细胞ATP水平(P<0.05或P<0.01),RT-PCR检测结果显示YLSC能促进Bnip-3和Atg5的基因表达(P<0.05或P<0.01),Western blot检测结果显示YLSC能降低p62的表达并提高Beclin1及LC3Ⅱ/LC3I的表达(P<0.05或P<0.01)。结论YLSC能有效抑制AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞损伤及凋亡,其机制可能与启动心肌自噬程序、激活自噬相关因子表达以及清除凋亡细胞等有关。 展开更多
关键词 玉朗伞查尔酮 心肌细胞损伤 自噬 h9C2心肌细胞
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H9N2亚型禽流感病毒双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 刘莉 张贺楠 +4 位作者 莫一群 徐亚亚 金丁丁 齐岩 胡增垒 《中国家禽》 北大核心 2025年第11期154-160,共7页
为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进... 为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进一步对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估,并将建立的方法用于临床样品的检测,与H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒进行比较。结果显示:该方法与其他亚型AIV、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、传染性法氏囊病病毒和传染性支气管炎病毒无交叉反应,检测限为0.1 copies/μL,批内和批间变异系数均小于5%,临床样本检测阳性率(24.3%)高于H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒(18.9%)。研究表明,建立的H9N2 AIV双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强,敏感性较高,能够应用于H9N2 AIV的快速检测。 展开更多
关键词 h9N2亚型禽流感病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR HA基因 NA基因
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左归降糖舒心方调控TLR4/NF-κB/NLRP3通路抑制H9C2心肌细胞炎性损伤机制
8
作者 黄娟 黄湘宁 +7 位作者 王屹菲 李美英 刘晶晶 王瑾茜 刘林劵 林湘东 王婷婷 喻嵘 《陕西中医》 2025年第11期1454-1461,共8页
目的:探讨左归降糖舒心方对于脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护机制。方法:以H9C2心肌细胞为研究对象,随机分为空白血清组、模型组、左归降糖舒心方组、二甲双胍组、TAK-242组。除空白血清组外,其余各组均以LPS诱导损伤,构建心... 目的:探讨左归降糖舒心方对于脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护机制。方法:以H9C2心肌细胞为研究对象,随机分为空白血清组、模型组、左归降糖舒心方组、二甲双胍组、TAK-242组。除空白血清组外,其余各组均以LPS诱导损伤,构建心肌细胞炎症损伤体外模型。通过CCK-8法筛选含药血清干预浓度,ELISA法及免疫荧光法检测细胞IL-1β、TNF-α、IL-6含量及蛋白表达;Hoechst/PI双染检测细胞焦亡水平;AO/EB双染检测细胞膜通透性;Western Blot法检测TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65及NLRP3蛋白表达;RT-PCR技术检测IL-1β、Caspase-1及GSDMD mRNA表达。结果:通过CCK-8法筛选,确定10%的左归降糖舒心方含药血清浓度为后续实验的干预浓度。与空白血清组相比,模型组H9C2细胞释放的TNF-α、IL-6、IL-1β含量和相对荧光强度增加(P<0.01)。PI染色细胞数量明显增多,EB橘红色荧光比例上升,TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达升高,IL-1β、Caspase-1及GSDMD mRNA表达增高(均P<0.01)。与模型组相比,左归降糖舒心方组、二甲双胍组、TAK-242组细胞中的TNF-α、IL-6、IL-1β含量及相对荧光强度降低(P<0.01)。PI染色细胞数量减少,左归降糖舒心方组AO/EB染色的EB橘红色荧光比例缩小。中药含药血清及TAK-242可抑制细胞的TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达和Caspase-1、GSDMD mRNA表达。结论:左归降糖舒心方含药血清能抑制LPS诱导的H9C2心肌细胞炎症反应,减轻心肌细胞焦亡,这与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路相关。 展开更多
关键词 糖尿病心肌病 左归降糖舒心方 h9C2心肌细胞 TLR4/NF-κB/NLRP3通路 炎性损伤 细胞焦亡
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非奈利酮对脂多糖诱导的大鼠心肌H9C2细胞凋亡和氧化应激的影响及作用机制
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作者 张恒 邓伟 《武汉大学学报(医学版)》 2025年第6期703-708,共6页
目的:分析非奈利酮(Finerenone)对大鼠心肌H9C2细胞在脂多糖(LPS)刺激下引起的凋亡和氧化应激的影响及其作用机制。方法:使用不同浓度的非奈利酮(0, 2.5, 5, 10, 20 mmol·L^(-1))经过24 h的处理,接着给予12 h的脂多糖(10μg·m... 目的:分析非奈利酮(Finerenone)对大鼠心肌H9C2细胞在脂多糖(LPS)刺激下引起的凋亡和氧化应激的影响及其作用机制。方法:使用不同浓度的非奈利酮(0, 2.5, 5, 10, 20 mmol·L^(-1))经过24 h的处理,接着给予12 h的脂多糖(10μg·mL^(-1))刺激,使用CCK-8试剂盒评估细胞活性,并确定适宜的非奈利酮浓度以进行后续研究。将大鼠心肌H9C2细胞随机分成4组:对照组、仅非奈利酮处理组(浓度为5 mmol·L^(-1))、单独LPS处理组(浓度为10μg·mL^(-1))以及同时接受LPS和非奈利酮处理组(浓度分别为10μg·mL^(-1)和5 mmol·L^(-1))。使用活性氧(ROS)检测试剂盒评估细胞的氧化应激水平,一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡;Western Blot法检测C-caspase-3、Bax、Bcl-2、PI3K、AKT和GSK-3β表达水平。结果:不同浓度的非奈利酮处理后,对大鼠心肌H9C2细胞的存活率差异无统计意义(P>0.05)。给予非奈利酮处理可挽救由LPS刺激诱导的细胞存活率下降,在非奈利酮浓度为5、10、20 mmol·L^(-1)的组中,差异具有统计学意义(P<0.05)。LPS组细胞凋亡、氧化应激显著高于对照组(P<0.05);非奈利酮处理后能抑制LPS诱导的凋亡因子的表达(P<0.05),同时减轻凋亡和氧化应激的水平(P<0.05)。机制方面,Western Blot显示非奈利酮能激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路。结论:非奈利酮能减轻LPS诱导的细胞毒性,抑制凋亡和氧化应激,而这些作用可能是通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路实现的。 展开更多
关键词 非奈利酮 大鼠心肌h9C2细胞 脂多糖 凋亡 氧化应激
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H9亚型禽流感病毒mRNA疫苗的构建与效力评价 被引量：2
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作者 黄程 杨志远 +7 位作者 林健 程慧敏 王米 毛惠琳 王国良 刘贵明 赵际成 刘月焕 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1843-1853,共11页
H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 202... H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 2022年公开的HA基因序列,优化HA全长(HA)和HA胞外区(HAe)序列,连接至pUC57载体构建体外转录模板,经体外转录、加帽、纯化,采用脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles, LNP)包封mRNA,并转染人胚肾细胞(293T)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(DF-1),Western blot检测HA表达。20只3周龄SPF鸡,随机分成4组,每组5只,分别经腿部肌肉接种0.3 mL PBS、25μg HA mRNA LNP、25μg HAe mRNA LNP和0.3 mL H9亚型AI灭活疫苗。免疫后4周采集血清,检测血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)抗体,每只鸡滴鼻点眼H9N2亚型AIV 0.2 mL(含10^(6.0)EID_(50)),攻毒后5日采集咽喉拭子和外周血单个核细胞,分别检测病毒分离情况及IFN-γ、IL-4的表达水平,观察气管组织病理学变化。Western blot结果显示两种mRNA HA蛋白均成功表达,经LNP包封后可有效在细胞内完成翻译。HA mRNA LNP和HAe mRNA LNP免疫SPF鸡后HI抗体效价(log2)平均值分别为5.6和3。H9亚型AI灭活疫苗免疫后HI抗体效价(log2)平均值为9.8,极显著高于2个mRNA LNP组(P<0.01)。非免疫对照、HA mRNA LNP、HAe mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗组病毒分离结果分别为5/5、1/5、4/5和2/5。HA mRNA LNP组IFN-γ表达水平显著高于其他组(P<0.05),HAe mRNA LNP组IL-4表达水平显著低于其他组(P<0.05)。气管组织病理学变化结果表明HA mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗免疫可有效减轻H9亚型AIV对SPF鸡气管上皮细胞的损伤。构建的H9亚型AIV HA全长mRNA疫苗免疫鸡能提供有效保护,而HA胞外区mRNA疫苗不能提供有效的免疫保护。 展开更多
关键词 h9亚型 禽流感病毒 mRNA疫苗 LNP 免疫保护
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复方丹参滴丸通过抑制ONOO-诱导的细胞焦亡对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤
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作者 黄惠敏 林艾雯 +2 位作者 陈君 郑鸿雁 梁伟杰 《解剖学研究》 2025年第5期415-421,共7页
目的探讨复方丹参滴丸能否通过抑制过氧亚硝基盐(ONOO⁃)诱导的细胞焦亡对抗高糖介导H9c2心肌细胞损伤。方法将细胞融合度达80%时的H9c2心肌细胞随机分为8组:正常对照(Control)组、高糖(HG)组、复方丹参滴丸+HG组、PDC+HG组、Caspase⁃1⁃s... 目的探讨复方丹参滴丸能否通过抑制过氧亚硝基盐(ONOO⁃)诱导的细胞焦亡对抗高糖介导H9c2心肌细胞损伤。方法将细胞融合度达80%时的H9c2心肌细胞随机分为8组:正常对照(Control)组、高糖(HG)组、复方丹参滴丸+HG组、PDC+HG组、Caspase⁃1⁃siRNA+HG组、复方丹参滴丸组、PDC组和NC SiRNA组,用ELISA分析培养液中IL⁃1β、IL⁃18的浓度;利用Wesern blot测定硝基酪氨酸(3⁃NT,ONOO⁃生成的标志性产物)、Caspase⁃1和NLRP3的水平;利用CCK8法评估心肌细胞存活率情况;JC⁃1染色检测线粒体膜电位(MMP);乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定培养液中LDH活性。结果在高糖(35 mmol/L葡萄糖,HG)环境下培养H9c2心肌细胞24 h,其焦亡相关指标(包括IL⁃1β、IL⁃18、Caspase⁃1、NLRP3)和3⁃NT的表达均明显上调;10μmol/L FeTMPyP(PDC,ONOO⁃的抑制剂)的共处理能对抗HG引起的焦亡相关指标上调;0.5 g/L复方丹参滴丸和HG共处理细胞可减轻HG引起的IL⁃1β、IL⁃18、Caspase⁃1、NLRP3和3⁃NT的上调。HG可引起一系列细胞损伤,包括细胞存活率和MMP下降、LDH活性升高;利用小干扰RNA(siRNA)沉默Caspase⁃1表达,或者应用10μmol/L PDC或0.5 g/L复方丹参滴丸共处理心肌细胞,可对抗HG引起的上述损伤。结论复方丹参滴丸可能通过抑制ONOO⁃诱导的细胞焦亡对抗HG引起的H9c2心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 复方丹参滴丸 h9C2心肌细胞 过氧亚硝基盐 焦亡 高糖
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2024年安徽省H9N2亚型禽流感病毒遗传进化和抗原性分析 被引量：1
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作者 李玉冬 周迎春 +13 位作者 段倩倩 曹婕 董金泽 陈洪壮 束思成 佟琪 赵传阔 王维 刘畅 王军 陈静 蒲娟 何长生 朱良强 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期1-11,共11页
为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,... 为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,结合安徽省所有H9N2亚型AIV公开序列数据,进行8个基因片段(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS)的同源性分析、遗传进化分析、关键氨基酸和糖基化位点分析以及抗原性分析。结果显示,本试验共采集了1033份拭子样本,鉴定出334株H9N2亚型AIV,分离率为32.33%。4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株的PB1、PA、HA基因序列一致度差异较大(88.65%~98.05%),而PB2、NP、NA、M、NS基因序列一致度较为接近(92.19%~99.08%)。HA基因的遗传进化分析显示,2株鸡源和1株鸭源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.2分支,1株鹅源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.3分支;PB2、PB1、PA、NP、NA、M、NS基因遗传进化分析显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株与近年来的人源H9N2亚型AIV分离毒株遗传距离接近,2024年2月鸡源H9N2亚型AIV分离毒株的PA基因与野鸟源H9N2亚型AIV的亲缘关系较近。关键氨基酸分析显示,与参考株序列相比,4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白的130-loop、150-loop和190-helix存在明显氨基酸多态性;鹅源H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白在第289~291位可能出现了N-糖基化修饰的缺失,值得关注。抗原性评估显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株均属于当前优势流行的抗原群,鹅源H9N2亚型AIV分离毒株表现出明显的抗原漂移。结果表明,2024年安徽H9N2亚型AIV在不同宿主中显示出较高的遗传多样性,HA蛋白的受体结构域存在变异和抗原性漂移,有向家禽和人类传播扩散的风险隐患。 展开更多
关键词 h9N2亚型禽流感 遗传进化 抗原性分析
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丹酚酸B介导Elovl6/Echs1/Acot1通路调节脂肪酸代谢减轻H9c2细胞OGD/R损伤 被引量：1
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作者 曹策 宋鉴书 +5 位作者 杨丽丽 李浩然 刘子馨 李磊 付建华 刘建勋 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期482-490,共9页
目的观察丹酚酸B(salvianolic acid B,SalB)抗H9c2细胞氧糖剥夺/再复(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)损伤机制。方法CCK-8筛选SalB对OGD/R损伤H9c2细胞保护浓度;试剂盒检测SalB对乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,L... 目的观察丹酚酸B(salvianolic acid B,SalB)抗H9c2细胞氧糖剥夺/再复(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)损伤机制。方法CCK-8筛选SalB对OGD/R损伤H9c2细胞保护浓度;试剂盒检测SalB对乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)的影响;转录组测序探索SalB对OGD/R损伤H9c2作用机制;分子对接检测SalB和差异蛋白结合情况;ELISA法检测脂肪酸含量;RT-qPCR和Western blot验证差异基因表达水平;孟德尔随机化验证SalB作用靶点与HF因果关系。结果与模型组相比,SalB可保护OGD/R损伤后H9c2细胞,且明显降低CK、LDH和AST含量;转录组筛选差异基因100个,涉及脂肪酸延长、癌症中心碳代谢、色氨酸代谢通路;分子对接显示SalB与差异蛋白具有良好结合能;核心基因Elovl6、Echs1、Acot1 mRNA和蛋白表达与转录组一致;SalB可降低OGD/R损伤后脂肪酸含量;孟德尔随机化表明SalB可调节脂肪酸代谢,降低HF风险。 结论 SalB下调Elovl6、Echs1、Acot1表达水平,通过脂肪酸代谢通路保护OGD/R损伤后H9c2细胞。 展开更多
关键词 丹酚酸B 转录组高通量测序 h9C2心肌细胞 OGD/R 缺血/再灌注损伤 脂肪酸代谢
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浙江省5株H9N2亚型禽流感病毒的血凝素基因分子特征与遗传进化分析
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作者 刘士哲 华炯钢 +10 位作者 陈柳 谢荣辉 叶伟成 张传亮 朱寅初 冯肖肖 付媛 倪征 张存 屈勇刚 云涛 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第12期2494-2503,共10页
H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是我国禽类中最流行的低致病性禽流感(LPAIV),因其持续的抗原漂移与跨物种传播风险对养殖业和公共卫生安全构成严重威胁。为了解浙江省流行的H9N2亚型AIV的遗传进化特征,本研究对当地分... H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是我国禽类中最流行的低致病性禽流感(LPAIV),因其持续的抗原漂移与跨物种传播风险对养殖业和公共卫生安全构成严重威胁。为了解浙江省流行的H9N2亚型AIV的遗传进化特征,本研究对当地分离到的5株H9N2亚型AIV毒株的血凝素(HA)基因进行测序与分子特征分析。结果显示,5株分离株分属于欧亚谱系的h9.4.2.1和h9.4.2.5分支,HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为83.51%~99.88%和86.33%~99.83%。值得注意的是,分离株A/Chicken/Zhejiang/HZ01/2022和A/Duck/Zhejiang/TZ01/2022与疫苗株CK/SS/94的HA基因核苷酸同源性仅为88.24%~88.35%,氨基酸同源性为89.43%~90.82%。所有分离株的HA裂解位点均呈单碱性氨基酸特征,符合低致病性病毒特性。受体结合位点分析发现存在I163T、H191N、A198T/V、Q234L和Q235M突变,这些突变可能增强病毒与人源唾液酸α-2,6-半乳糖受体的结合能力。糖基化位点分析显示,分离株存在7~8个潜在糖基化位点,其中218和551位点缺失,206和313位点增加,这些变异可能增强病毒对哺乳动物宿主的适应性。此外,HA蛋白抗原位点存在234、285和334位点突变,而181、280、281与296位点高度保守。研究表明,浙江省H9N2亚型AIV通过关键位点突变和糖基化模式改变持续进化,可能导致病毒毒力增强、疫苗保护效力下降,并增加跨物种传播风险。亟须加强本地流行毒株的分子监测,优化疫苗株匹配性,以提升防控效能并降低公共卫生威胁。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9N2亚型 HA基因 遗传进化 基因分析
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表达H9N2亚型禽流感病毒血凝素HA1重组乳酸乳球菌的构建及免疫效果评价
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作者 王志悦 李欣蕊 +8 位作者 崔子扬 贺志新 孙嘉咛 王许刚 王瑞 李春红 徐明举 张瑞华 徐彤 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期48-54,共7页
本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、W... 本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、Western blot鉴定HA1在重组乳酸菌的表达情况;将重组乳酸乳球菌口服免疫10日龄雏鸡,每只鸡口服2×10~9 CFU菌液,共免疫2次;分别在免疫后第7、14天采集血清与气管灌洗液,并检测其抗体与细胞因子水平。结果显示:成功构建出重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,且重组乳酸乳球菌成功表达血凝素HA1蛋白,该蛋白能够与H9亚型禽流感阳性血清发生特异性免疫结合反应;雏鸡口服免疫后,其血清与气管灌洗液中抗体与细胞因子水平与对照组相比明显上升。本研究表明,构建的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1能够有效刺激免疫应答,口服免疫雏鸡后能够获得良好的免疫效果。 展开更多
关键词 h9N2禽流感病毒 血凝素 乳酸乳球菌
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G57基因型H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统的建立与验证
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作者 史玉婷 韩心雨 +5 位作者 钟沐卉 林耀忠 柳腾飞 李焰 尹会方 贾伟新 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1825-1833,共9页
旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构... 旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构建,共转染293T细胞成功拯救毒株命名为rM。测定病毒的稳定性和生长曲线;进行动物试验,从传播效率、致病性角度验证克隆毒株与原毒的一致性。结果显示:M毒株为G57基因型,为近年的流行毒株。M毒株与rM毒株在酸稳定性、热稳定性、致病性以及传播性等方面保持一致的生物学特性。综上,成功建立了G57基因型H9N2亚型AIV的反向遗传系统,且从体内和体外试验两个方面全面验证M与rM的生物学特性保持一致。 展开更多
关键词 反向遗传 h9N2 禽流感病毒 G57基因型
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增殖H9N2禽流感病毒的MDCK细胞传代稳定性及病毒对细胞适应性研究
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作者 张伦 单学强 +1 位作者 周芳 李丽敏 《河北农业大学学报》 北大核心 2025年第6期70-76,108,共8页
为研究增殖H9N2禽流感病毒的MDCK细胞传代稳定性及病毒对细胞的适应性,本试验对悬浮培养的MDCK细胞连续传40代,进行细胞形态及胞核学检查;用H9N2亚型禽流感病毒接种P10、P20、P30和P40代次的细胞,进行敏感性试验;利用MDCK细胞筛选细胞... 为研究增殖H9N2禽流感病毒的MDCK细胞传代稳定性及病毒对细胞的适应性,本试验对悬浮培养的MDCK细胞连续传40代,进行细胞形态及胞核学检查;用H9N2亚型禽流感病毒接种P10、P20、P30和P40代次的细胞,进行敏感性试验;利用MDCK细胞筛选细胞适应毒株;用对细胞适应较好的毒株SD/28/17在细胞上进行连续传代试验。结果显示,悬浮培养的MDCK细胞连续传代40代,细胞状态良好,形态一致;经胞核学检查染色体众数为78,各代差异不超过15%;P10、P20、P30和P40代次的细胞接种H9N2禽流感病毒后HA效价和TCID50无明显差异;筛选出对细胞适应较好的毒株SD/28/17株,在细胞上连续传代10代,病毒毒价未降低,且HA和NA基因的氨基酸位点均未发生突变。研究结果为H9N2亚型禽流感病毒疫苗研发提供了重要的理论和技术支撑。 展开更多
关键词 悬浮培养 MDCK细胞 h9N2亚型禽流感病毒 连续传代 稳定性
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2023—2024年山东省H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析和生物学特性研究
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作者 高振涛 高斌 +2 位作者 张瑞华 徐彤 李旭冬 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期23-34,共12页
为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,... 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,利用反向遗传操作技术构建亲本毒株(SD11、SD341)和重组毒株(re_SD341),将重组毒株PA基因中携带的宿主适应性位点突变为禽源模式(PA-R356K/N409S),检测3株毒株在不同宿主细胞中的复制能力,并进一步检测SD341和re_SD341毒株对小鼠的致病能力。结果显示,从54份病料中分离获得2株H9N2亚型AIV,2株分离株与2000年之后国内疫苗株同源性较高,核苷酸相似性达90%以上;HA基因遗传进化分析结果显示,2株分离毒株均属于B分支中的B4.7.2分支,且8个基因片段均与一些人源分离毒株亲缘关系较近,其中HA、PB1、PB2和PA基因与一些人源分离毒株的核苷酸相似性超过90%;分子特征分析结果显示,2株分离毒株HA蛋白裂解位点均为PSRSSR↓GL,符合2020年左右B分支中流行毒株分子特征;与早期代表毒株相比,NA蛋白茎部均有缺失且在第368位均增加1个新的潜在糖基化位点;2株毒株的HA、PB1、PB2和PA蛋白均携带宿主适应性突变位点,其中PA蛋白发生K356R和S409N适应性突变;生物学特性验证结果显示,与re_SD341重组毒株相比,SD341亲本毒株在人非小细胞肺癌细胞系(A549)中的复制能力更强(P<0.0001),并且在一定时间内可导致小鼠的体重明显下降。结果表明,本试验分离的2株H9N2 AIV毒株均为低致病性毒株,病毒发生不同程度的变异进化,其中一些病毒蛋白包含哺乳动物适应性突变,增加了其跨种传播的风险,本试验结果为我国H9N2亚型AIV的进化提供了参考,为禽流感综合防控和公共卫生安全提供了数据支撑。 展开更多
关键词 h9N2 禽流感病毒 遗传进化 跨种传播
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云南地区28株H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析
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作者 刘照生 周洁楠 +6 位作者 伏晓庆 赵晓南 张美玲 孙艳红 韩晓宇 倪瑞泽 陈瑶瑶 《病毒学报》 北大核心 2025年第2期407-416,共10页
为了解云南地区流行的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的遗传变异情况,并为进一步研究和防控提供依据,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对2020-2023年云南省部分地区采集的环境标本进行H9N2亚型AIV核酸检测,对阳性标... 为了解云南地区流行的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的遗传变异情况,并为进一步研究和防控提供依据,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对2020-2023年云南省部分地区采集的环境标本进行H9N2亚型AIV核酸检测,对阳性标本进行鸡胚病毒分离实验,对分离获得的28株H9N2亚型阳性AIV的血凝素(HA)基因片段进行扩增和测序,利用生物信息软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析,受体结合位点、抗原位点、潜在糖基化等关键位点分析,并构建系统进化树。分析结果显示,28株分离株的HA基因属于欧亚分支Y280为代表的第Ⅰ群,与疫苗株A/chicken/Jiangsu/WJ57/2012在同一分支,核苷酸同源性为90.63%~100%,氨基酸同源性为92.45%~100%,与中国最早分离的疫苗株A/chicken/Beijing/1/1994(H9N2)核苷酸同源性整体较低,为84.18%~85.68%,氨基酸同源性为85.73%~88.72%;28株分离株HA蛋白裂解位点均为PSRSSR↓GLF,受体结合位点存在A198T/V、T163N、N232H、Q234L、Q235M突变,其中Q234L突变具有和人流感受体受体结合的特性;抗原位点仅在234、285、334位点存在变异,其他位点相对保守;分离株存在7~8潜在糖基化位点,主要变异表现在218、492位点的缺失和313、491位点的增加。28株H9N2亚型AIV分离株均为低致病性禽流感病毒,存在人易感位点,与参考株比较发生了一定程度的变异,应加强H9N2亚型AIV病毒的监测,密切关注其变异情况。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h9N2亚型 HA基因 序列分析
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基于LncRNA malat-1/miR-133通路调控p-ERK1/2探讨温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素诱导H9C2心肌细胞损伤的影响
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作者 王楠 唐燕萍 +3 位作者 蔡虎志 陈新宇 李少东 陈雪靓 《中华中医药学刊》 北大核心 2025年第5期89-93,I0026,共6页
目的基于长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,LncRNA)肺腺癌转移相关转录子1(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,malat-1)/微小RNA-133(microRNA-133,miR-133)通路调控细胞外调节蛋白激酶1/2磷酸化(p-ERK1/2)探... 目的基于长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,LncRNA)肺腺癌转移相关转录子1(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,malat-1)/微小RNA-133(microRNA-133,miR-133)通路调控细胞外调节蛋白激酶1/2磷酸化(p-ERK1/2)探讨温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素诱导H9C2心肌细胞损伤的影响。方法使用2.67μmol/L阿霉素(adriamycin,ADR)培养液共培养45 h以建立H9C2心肌细胞损伤模型并设置正常对照组、正常+W组(W:温阳振衰颗粒含药血清)、miR-133过表达组、miR-133过表达+W组、ADR组[ADR:阿霉素(adriamycin)]、ADR+W组、ADR+miR-133过表达组、ADR+miR-133过表达+W组共8组。细胞增殖活性采用MTT法检测,N端B型脑钠肽前体(N-terminal B-type brain natriuretic peptide precursor,NT-proBNP)的变化采用ELISA法检测,各组H9C2心肌细胞lncRNA malat-1、miR-133以及ERK1/2 mRNA的含量采用Real-time PCR法检测,ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达采用Western blot检测。结果ADR组、ADR+miR-133过表达组、ADR+W组、ADR+miR-133过表达+W组、正常对照组、miR-133过表达组、正常+W组、miR-133过表达+W组心肌细胞活性依次增加(P<0.05);NT-proBNP含量依次降低(P<0.05)。实验后各组心肌细胞ERK1/2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),ADR组、ADR+miR-133过表达组、ADR+W组、ADR+miR-133过表达+W组、正常对照组、miR-133过表达组、正常+W组、miR-133过表达+W组miR-133表达依次增加(P<0.05);lncRNA malat-1表达依次降低(P<0.05)。实验后各组心肌细胞ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);ADR组、ADR+W组、ADR+miR-133过表达组、ADR+miR-133过表达+W组、正常对照组、miR-133过表达组、正常+W组、miR-133过表达+W组p-ERK1/2蛋白表达依次降低(P<0.05)。结论温阳振衰颗粒含药血清能够降低心肌细胞p-ERK1/2蛋白表达从而对慢性心力衰竭发挥疗效,其机制可能是通过对心肌细胞中的lncRNA malat-1/miR-133通路进行调控而实现的。 展开更多
关键词 慢性心力衰竭 温阳振衰颗粒含药血清 h9C2心肌细胞 细胞外信号调节激酶1/2 微小RNA-133 肺腺癌转移相关转录子1
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