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国标中H5亚型高致病性禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法的优化与应用
1
作者 刘朔 彭程 +3 位作者 毛秋艳 杨吉喆 蒋文明 刘华雷 《病毒学报》 北大核心 2025年第5期1522-1530,共9页
当前H5N1亚型禽流感疫情在全球范围内肆虐,且病毒不断变异,因此需要持续对检测方法的有效性进行评估。近年来,我们在临床样品检测过程中发现,国家标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2020)中H5亚型高致病性禽流感病毒实时荧光RT... 当前H5N1亚型禽流感疫情在全球范围内肆虐,且病毒不断变异,因此需要持续对检测方法的有效性进行评估。近年来,我们在临床样品检测过程中发现,国家标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2020)中H5亚型高致病性禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法存在扩增曲线荧光值偏低的现象,对结果判定产生一定干扰。基于国标引物和探针序列与当前流行毒株的匹配性评估分析,我们设计和优化了上游引物和探针序列,并对优化方法的特异性、灵敏度和临床样品检测效果与国标方法进行了对比。结果显示,该优化方法特异性强,与其他亚型AIV和常见禽类病原体均无交叉反应;针对2.3.4.4b分支H5亚型病毒的检测灵敏度较国标方法提高了10倍,针对2.3.4.4h分支H5亚型病毒的检测灵敏度与国标方法类似;组内和组间试验Ct值变异系数介于0.17%~1.58%,具有良好的重复性;对48份家禽和野禽咽肛拭子样品检测,本优化方法检出阳性样本38份(国标方法检出37份),其中64.9%(24/37)阳性样品的Ct值较国标方法低2以上。结果表明,本研究优化的荧光RT-PCR方法可为H5亚型高致病性禽流感病毒的流行病学调查监测及快速诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h5亚型 实时荧光RT-PCR 检测方法
原文传递
2010-2023年中国H5亚型高致病性禽流感病毒2.3.4.4b分支特征分析
2
作者 张曙霞 刘佳 +3 位作者 谭敏 杨磊 李希妍 王大燕 《疾病监测》 北大核心 2025年第2期226-231,共6页
目的基于H5亚型高致病性禽流感病毒2.3.4.4b分支全球蔓延现状,分析2010—2023年中国H5亚型2.3.4.4b分支病毒传播流行和遗传进化特征。方法收集整理2010—2023年全球流感共享数据库中H5亚型2.3.4.4b分支病毒表面蛋白血凝素(HA)基因序列,... 目的基于H5亚型高致病性禽流感病毒2.3.4.4b分支全球蔓延现状,分析2010—2023年中国H5亚型2.3.4.4b分支病毒传播流行和遗传进化特征。方法收集整理2010—2023年全球流感共享数据库中H5亚型2.3.4.4b分支病毒表面蛋白血凝素(HA)基因序列,结合病毒的宿主来源、采样时间和地理分布等元数据信息,基于最大似然法构建系统发育树,利用谱系生物地理学推断病毒传播路径,分析中国H5亚型2.3.4.4b分支病毒的宿主来源、遗传进化特征和时空传播动态。结果2010—2023年中国野生水禽、家禽中存在H5N1、H5N6和H5N8亚型的高致病性禽流感病毒共流行,不同亚型的宿主来源存在差异;H5N1和H5N8亚型主要为野生水禽来源,H5N6亚型主要为家禽来源。遗传进化分析显示,H5亚型2.3.4.4b分支根据进化时间形成明显的3个簇,即cluster Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ,与全球3次疫情的流行趋势相一致。谱系生物地理学推断分析显示,华中地区是中国H5亚型2.3.4.4b分支病毒进化和传播的驱动中心。结论2010—2023年H5亚型2.3.4.4b分支病毒在中国持续流行,通过野鸟迁徙、禽类交易等有输入的高风险,中国应持续开展人群、家禽、野生水禽等全方位的流感监测预警。本研究为中国H5亚型高致病性禽流感病毒的风险评估提供了依据。 展开更多
关键词 高致病性禽流感病毒 h5亚型 遗传进化 传播
原文传递
贵港市2019年-2023年H5亚型高致病性禽流感的监测与分析
3
作者 周淑棉 《广西畜牧兽医》 2025年第1期10-13,共4页
本文总结分析了2019年-2023年贵港市辖区范围内的不同场点(规模场、市场、散养户和屠宰场)、不同监测动物种类(鸡、鸭、鹅、鸽子)H5亚型高致病性禽流感的监测数据,科学评估贵港市不同环境下H5亚型高致病性禽流感的免疫抗体水平和疫情发... 本文总结分析了2019年-2023年贵港市辖区范围内的不同场点(规模场、市场、散养户和屠宰场)、不同监测动物种类(鸡、鸭、鹅、鸽子)H5亚型高致病性禽流感的监测数据,科学评估贵港市不同环境下H5亚型高致病性禽流感的免疫抗体水平和疫情发生的风险,以期为我市禽流感的预警和防控提供科学依据。结果显示,2019年-2023年,累计监测841个场点,H5亚型免疫抗体总合格率为93.45%,规模场、市场、散养户及屠宰场的合格率分别为94.28%、91.78%、92.24%、85.00%,鸡、鸭、鹅抗体合格率分别为95.01%、90.82%、90.43%;RT-PCR方法检测病毒核酸的结果显示,样品H5亚型阳性率0.83%(55/6643),均为市场环境样品。结果表明,贵港市H5亚型禽流感免疫效果整体良好,但市场存在H5亚型高致病性禽流感污染,需加强监测和风险评估工作,防止疫情发生,保障我市养禽业健康发展。 展开更多
关键词 h5亚型高致病性禽流感 抗体检测 病原检测 抗体合格率
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农户散养鸡禽流感H5亚型一免与二免抗体对比试验
4
作者 刘根林 罗凤德 《家禽科学》 2025年第5期109-111,共3页
高致病性禽流感传染性强,致死率高,危害巨大,在我国被认定为一类动物疫病。农户散养鸡因多种原因,极少自己给鸡打禽流感疫苗,主要依靠村兽医在春、秋两季重大动物疫病防控入户时接种一次禽流感疫苗。为了解散养鸡高致病性禽流感抗体水... 高致病性禽流感传染性强,致死率高,危害巨大,在我国被认定为一类动物疫病。农户散养鸡因多种原因,极少自己给鸡打禽流感疫苗,主要依靠村兽医在春、秋两季重大动物疫病防控入户时接种一次禽流感疫苗。为了解散养鸡高致病性禽流感抗体水平高低,本文对经村兽医只一免和免疫两次禽流感(内含H5亚型毒株)疫苗农户散养鸡进行采样检测对比,结果显示高致病性禽流感(H5亚型)疫苗二免后,大大提高对散养鸡的免疫保护作用。 展开更多
关键词 散养鸡 禽流感h5亚型 对比
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农村散养鸭H5亚型禽流感一次免疫与二次免疫抗体监测试验报告
5
作者 刘根林 刘玉兰 《福建畜牧兽医》 2025年第2期35-37,共3页
农村散养户养的鸭极少自己给鸭进行禽流感免疫,村兽医每年仅在春、秋两季重大动物疫病防控时入户帮鸭接种一次禽流感疫苗,村防疫员专业技水平参差不齐,常有免疫后抗体水平、抗体合格率不高等情况。笔者通过村兽医对散养户鸭进行H5亚型... 农村散养户养的鸭极少自己给鸭进行禽流感免疫,村兽医每年仅在春、秋两季重大动物疫病防控时入户帮鸭接种一次禽流感疫苗,村防疫员专业技水平参差不齐,常有免疫后抗体水平、抗体合格率不高等情况。笔者通过村兽医对散养户鸭进行H5亚型禽流感一免和二免抗体监测对比,二免可明显提高农村散养鸭对高致病性禽流感(H5亚型)的免疫保护。 展开更多
关键词 鸭 h5亚型禽流感 抗体监测
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接种H5亚型禽流感疫苗对活禽禽流感荧光PCR检测结果的影响 被引量：1
6
作者 谢海燕 朱燕秋 +1 位作者 温清萍 杨德胜 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第5期111-112,共2页
关键词 h5亚型禽流感疫苗 荧光PCR 检测结果 h5亚型禽流感病毒 PCR检测方法 活禽 接种 A型流感病毒
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用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒 被引量：22
7
作者 卢建红 龙进学 +3 位作者 邵卫星 韦栋平 刘秀梵 张艳梅 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-57,共5页
选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录 表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株... 选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录 表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株和H9N2亚型毒株的NA全基因分别克隆入pHW2 0 0 0 ,构建质粒pHW5 0 6_NA和pHW2 0 6_NA。将pHW5 2 4_HA与pHW5 0 6_NA或pHW2 0 6_NA组合、均用A WSN 33(H1N1)提供 6个内部基因 ,两个组合的 8个质粒分别共转染COS_1细胞 ,产生了H5N1和H5N2两个亚型的基因重排病毒。通过在鸡胚中的连续传代和适应 ,2个重组病毒血凝价上升到 1∶2 9、表面基因稳定、对 6周龄SPF鸡不表现致病性 ,H5N2重组病毒对鸡胚的毒力低于H5N1病毒。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h5亚型 反向遗传操作技术 基因重排 致弱
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H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的构建及其遗传稳定性与免疫效力 被引量：20
8
作者 贾立军 彭大新 +7 位作者 张艳梅 刘红旗 刘秀梵 程坚 陈素娟 韦栋平 黄勇 张如宽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期722-727,共6页
以鹅源H5亚型禽流感病毒 (AIV)基因组为模板 ,用RT PCR扩增血凝素 (Hemaggluti nin ,HA)基因 ,克隆入鸡痘病毒表达载体pFG1 1 75 ,转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞 ,通过蓝斑筛选和间接免疫荧光检测 ,获得表达HA基因的重组鸡痘病毒 (R... 以鹅源H5亚型禽流感病毒 (AIV)基因组为模板 ,用RT PCR扩增血凝素 (Hemaggluti nin ,HA)基因 ,克隆入鸡痘病毒表达载体pFG1 1 75 ,转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞 ,通过蓝斑筛选和间接免疫荧光检测 ,获得表达HA基因的重组鸡痘病毒 (Recombinantfowlpoxvir us,rFPV HA)。rFPV HA经鸡胚成纤维细胞连续传 1 5代后 ,报告基因LacZ和HA基因可稳定表达。用 1 0 3PFU和 1 0 5PFU的rFPV HA免疫无特定病原体的 (Specificpathogenfree,SPF)鸡 ,免疫后 2 2d血凝抑制 (Hemagglutinininhibition ,HI)抗体监测阳性率分别为 0 %和 2 0 % ,但均抵御了H5亚型毒株的致死性攻击 ,保护率为 1 0 0 %。结果表明 ,构建了表达HA基因的重组鸡痘病毒 ,该重组病毒具有良好遗传稳定性 ,免疫鸡可提供完全保护 ,显示出了一定的应用前景。 展开更多
关键词 h5亚型 禽流感 血凝素基因 重组鸡痘病毒 遗传稳定性 免疫效力
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H5亚型高致病性禽流感疫苗的免疫效力 被引量：21
9
作者 贾立军 刘秀梵 +3 位作者 卢建红 张艳梅 彭大新 张如宽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期542-545,共4页
利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡,比较两种疫苗的保护效力。结果发现,利用103PFU和106PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡,HI抗体应答水平均低于灭活疫苗... 利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡,比较两种疫苗的保护效力。结果发现,利用103PFU和106PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡,HI抗体应答水平均低于灭活疫苗免疫组。利用H5亚型禽流感病毒经肌肉注射攻毒后,rFPV-HA免疫的无母源抗体商品鸡获得了完全保护(100%),高于灭活疫苗保护率(94.7%);但rFPV-HA免疫含母源抗体商品鸡诱导的保护率(11.4%～15.8%)低于灭活疫苗免疫组的保护水平(68.4%)。结果表明,rFPV-HA诱导HI抗体的能力低于灭活疫苗;但rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡的保护率完全达到灭活疫苗保护水平,显示出了良好的应用前景;灭活疫苗和rFPV-HA均受到母源抗体的干扰,不适于在母源抗体处于高峰期时使用。 展开更多
关键词 h5亚型高致病性禽流感疫苗 免疫效力 血凝素基因 重组鸡痘病毒 全病毒灭活疫苗
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以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性 被引量：13
10
作者 张小荣 焦新安 +4 位作者 潘志明 张晓明 刘秀梵 黄金林 张如宽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期157-161,共5页
根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染... 根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染P815细胞 ,经间接免疫荧光试验证实 ,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0得到两种运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4 5 5 0 (pVAX1 HA)和X4 5 5 0 (asd pVAX1 HA) ,以 1× 10 9CFU 只的剂量两次口服免疫BALB c小鼠 ,免疫小鼠不仅可以检测到HA特异性的血清抗体应答 ,而且还能抵抗稳定表达H5亚型禽流感病毒HA基因的P815肥大细胞瘤的攻击 ,说明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒 ,并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 h5亚型禽流感病毒 DNA疫苗 免疫原性 小鼠 hA基因序列 RT-PCR 免疫应答
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H5亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量：28
11
作者 侯佳蕾 罗开健 +5 位作者 樊惠英 焦培荣 亓文宝 曹伟胜 廖明 任涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1070-1074,共5页
根据GenBank中登录的H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)血凝素基因序列,设计了1套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立了一种基于LAMP技术的H5亚型禽流感病毒诊断方法。结果表明,该方法对H5-AIV RNA... 根据GenBank中登录的H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)血凝素基因序列,设计了1套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立了一种基于LAMP技术的H5亚型禽流感病毒诊断方法。结果表明,该方法对H5-AIV RNA的最小检测限为10-6,灵敏性高于一步RT-PCR方法;全部反应可在1.5 h内完成;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H5亚型禽流感病毒的快速诊断方法。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 逆转录环介导恒等温扩增 快速检测
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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究 被引量：11
12
作者 姜永萍 于康震 +3 位作者 邓国华 田国斌 乔传玲 陈化兰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期1071-1075,共5页
表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA... 表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果为1/8和2/6;用剂量为5、20、35和50g pCIHA5分别免疫2次,免疫保护率分别为45.5%(5/11)、58.3%(7/12)、58.3%(7/12)和91.7%(11/12),5g的病毒分离结果为1/5,其余组未分离出病毒;pCIHA5免疫后AGP抗体均未检出,油苗免疫后其HI抗体虽高,但AGP抗体也呈阳性。结果显示,加强免疫应为DNA疫苗质粒pCIHA5的安全免疫方式,DNA疫苗质粒pCIHA5虽具有较为稳定的免疫原性和免疫保护性,但有必要进一步提高其在肌肉组织中的有效表达水平和抗体反应水平。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 hA基因 基因表达 DNA疫苗 免疫保护效力
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共表达H5亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力 被引量：10
13
作者 陈素娟 孙蕾 +2 位作者 刘武杰 孙学辉 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期111-114,共4页
为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同... 为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p11SH5ANA。将p11SH5ANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5ANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-11SH5ANA。通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用105PFU的rFPV-11SH5NA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明,该重组病毒能使经肌肉注射攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%,显示出一定的应用前景。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 重组鸡痘病毒 血凝素 神经氨酸酶
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H5亚型禽流感病毒单抗——生物素捕获ELISA的建立 被引量：16
14
作者 王传彬 田新生 +5 位作者 曹振 遇秀玲 孙明 陈西钊 王宏伟 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期204-207,共4页
目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生... 目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生物素标记的单抗和酶标亲和素来检测病毒血凝素抗原,经方阵试验优化ELISA反应体系。用该方法检测H1—H15亚型AIV标准毒株和H5、H7、H9亚型AIV分离株,并与血凝和血凝抑制试验比较,评价其敏感性和特异性。结果纯化后的单抗具有良好的反应活性,生物素标记单抗工作浓度为1∶5000;ELISA对H5亚型AIV的检出限为025个血凝单位。该ELISA反应体系能检出H5N3标准株和所有20株国内H5亚型AIV分离株,而与其他14个血凝素亚型的AIV标准株、15个H9亚型AIV分离株和2个H7亚型AIV分离株均无交叉反应。结论初步建立了检测H5亚型禽流感病毒的单抗—生物素捕获ELISA方法,为研制试剂盒和进一步应用试验提供了基础。 展开更多
关键词 单抗 ELISA 亲和素 h5亚型禽流感病毒 血凝素 单克隆抗体 AIV h9亚型 分离株 生物素标记
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H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的免疫保护 被引量：8
15
作者 姜永萍 张洪波 +3 位作者 李呈军 步志高 于康震 陈化兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1178-1182,共5页
对H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次或两次免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后4周以同样剂量和途径进行第二次免疫,一次免疫后4周、两次免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/... 对H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次或两次免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后4周以同样剂量和途径进行第二次免疫,一次免疫后4周、两次免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、NT抗体以及AGP抗体的动态变化。结果,100μg pCAGGoptiHA5一次免疫、100μg pCAGGoptiHA5两次免疫以及10μg pCAGGoptiHA5两次免疫均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),结果表明,pCAGGoptiHA5作为疫苗效果良好、成本低廉,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。 展开更多
关键词 禽流感 h5亚型 DNA疫苗pCAGGoptihA5 免疫保护
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H5亚型禽流感病毒A/Duck/Anhui/1/2006(Clade 2.3)密码子优化HA基因DNA疫苗的免疫保护效力研究 被引量：9
16
作者 王国俊 熊杰 +6 位作者 李俊平 曾显营 田国彬 李雁冰 施建忠 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期116-120,共5页
为了进一步评价基于HA基因的DNA疫苗的开发应用前景,本研究将表达H5亚型禽流感水禽群代表株A/Duck/Anhui/1/2006(H5N1)[DKAH/1/06(H5N1)]HA基因的DNA疫苗pCAGGoAHHA的免疫保护效力进行了评估,以5μg、10μg、20μg、50μg和100μg剂量免... 为了进一步评价基于HA基因的DNA疫苗的开发应用前景,本研究将表达H5亚型禽流感水禽群代表株A/Duck/Anhui/1/2006(H5N1)[DKAH/1/06(H5N1)]HA基因的DNA疫苗pCAGGoAHHA的免疫保护效力进行了评估,以5μg、10μg、20μg、50μg和100μg剂量免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后3周再加强免疫一次,加强免疫后2周用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Duck/Fujian/31/2007(H5N1)[DKFJ/31/07(H5N1)]鼻腔途径进行攻毒,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3d、5d、7d天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测攻毒鸡排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体、NT抗体的动态变化。结果,20μg、50μg、100μg组的pCAGGoAHHA均可对免疫鸡产生100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而5μg和10μg剂量组则可对免疫鸡分别形成25%和75%的保护。结果表明,H5亚型禽流感水禽群DNA疫苗质粒pCAGGoAHHA具有良好的免疫保护性,有望成为预防H5亚型HPAIV的技术储备候选疫苗。 展开更多
关键词 禽流感 h5亚型 水禽群 DNA疫苗 保护效力
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通用型H5亚型禽流感病毒亚单位疫苗抗原表达和免疫效力研究 被引量：8
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作者 张雪花 陆吉虎 +3 位作者 华涛 卢宇 侯继波 梅梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期864-872,共9页
H5亚型高致病性禽流感病毒因其变异快、感染性和致病性强等特点严重威胁着家禽业和人类健康。为研制具有广谱保护性的H5亚型禽流感病毒通用型亚单位疫苗,本研究分析和对比各分支H5亚型禽流感病毒的HA蛋白基因,获得HA蛋白基因共有序列,... H5亚型高致病性禽流感病毒因其变异快、感染性和致病性强等特点严重威胁着家禽业和人类健康。为研制具有广谱保护性的H5亚型禽流感病毒通用型亚单位疫苗,本研究分析和对比各分支H5亚型禽流感病毒的HA蛋白基因,获得HA蛋白基因共有序列,采用杆状病毒表达系统构建和表达重组HA蛋白。经IFA、Western Blot、微量血凝试验等方法鉴定重组HA蛋白,结果显示重组HA蛋白在昆虫细胞中得到正确表达,血凝效价达13log2,且与禽流感Re6、Re7和Re8阳性血清均具有较好的交叉反应活性。免疫效力试验结果显示,重组HA蛋白疫苗组血清抗体能与H5亚型禽流感病毒Re6、Re7和Re8检测抗原反应,且能诱导机体产生较高水平IFN-γ和IL-4。该研究结果可为H5亚型禽流感通用型亚单位疫苗研发提供试验基础和科学依据。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 亚单位疫苗抗原 表达 免疫效力
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H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析 被引量：9
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作者 范文辉 王萌 +5 位作者 刘丽蓉 张鹤 张爽 凌红丽 刘文军 李晶 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-58,共10页
为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZ?A-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵... 为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZ?A-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵母中高效分泌表达,发酵液上清中目的蛋白浓度高达0.2 mg/mL,分子量约为37kDa。将酵母发酵上清经浓缩、纯化后,获得重组目的蛋白H5HA。将不同剂量的H5HA与不同佐剂联用后分别以滴鼻和肌肉注射两种方式免疫试验动物,进行免疫效力的评价。试验结果表明,H5HA具有较好的免疫原性,可诱导SPF鸡产生较高水平的IgG (血凝抑制效价达1∶64、病毒中和抗体效价为1∶218),最佳使用剂量为50μg/羽,与白油佐剂联用时效果最佳,且肌肉注射方式的免疫效果优于滴鼻方式。研究结果为H5亚型流感病毒亚单位疫苗的研制提供了理论支撑。 展开更多
关键词 h5亚型流感病毒 血凝素蛋白 毕赤酵母 亚单位疫苗
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多重反转录聚合酶链反应检测H5亚型禽流感病毒方法的建立 被引量：9
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作者 庞耀珊 谢芝勋 +2 位作者 邓显文 唐小飞 刘加波 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第9期762-764,共3页
目的根据A型AIV的M基因和HA基因序列,设计了两对引物。其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可检测所有A型AIV,跨幅为244bp;XZH5-1和XZH5-5为H5亚型AIV特异性引物,跨幅为860bp。通过对多重RTPCR扩增条件的优化,建立了快速检测鉴别H5亚型AIV多... 目的根据A型AIV的M基因和HA基因序列,设计了两对引物。其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可检测所有A型AIV,跨幅为244bp;XZH5-1和XZH5-5为H5亚型AIV特异性引物,跨幅为860bp。通过对多重RTPCR扩增条件的优化,建立了快速检测鉴别H5亚型AIV多重RTPCR。该多重RTPCR对H5亚型AIV同时扩增出两条大小分别为244bp和860bp的cDNA片段,对其他A型AIV只扩增出244bp的cDNA片段,对其它常见禽病病原则无244bp和860bpcDNA片段出现。该多重RTPCR对H5亚型AIVRNA最低检出量为10pg。该多重RTPCR对AIV人工感染鸡临床样品和鸡胚分离物进行检测,结果其检出率为100%。 展开更多
关键词 多重 聚合酶链反应 禽流感病毒 h5亚型
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表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-18基因重组禽痘病毒的构建 被引量：7
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作者 陈红英 黄青云 +2 位作者 崔保安 李新生 管倩 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1025-1030,共6页
【目的】获得共表达H5亚型AIVHA基因和鸡IL-18基因的重组禽痘病毒。【方法】将含痘病毒启动子LP2EP2的HA基因和鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSYHA/IL-18。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017... 【目的】获得共表达H5亚型AIVHA基因和鸡IL-18基因的重组禽痘病毒。【方法】将含痘病毒启动子LP2EP2的HA基因和鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSYHA/IL-18。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA和IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-HA-IL-18)。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组禽痘病毒又进行了多次蚀斑克隆。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因和鸡IL-18基因引物进行PCR,分别扩增出1条约1.7kb带和1条0.6kb左右的带。以间接免疫荧光试验、T细胞转化试验和SPF雏鸡免疫接种证实重组禽痘病毒能表达HA和鸡IL-18,并初步证明鸡IL-18增强HA免疫作用。【结论】重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA和鸡IL-18。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 hA基因 鸡IL-18 重组禽痘病毒
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