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长沙市2019—2024年甲型H3N2流感病毒血凝素与神经氨酸酶分子遗传特征
1
作者 裴瑞青 黄政 +5 位作者 李灵之 姚栋 叶文 肖姗 扶会媛 刘晓蕾 《中国热带医学》 北大核心 2026年第1期88-94,共7页
目的通过系统分析长沙市2019—2024年甲型H3N2型流感病毒流行株的分子进化特征,揭示其基因变异规律,为长沙地区流感的精准防控和疫苗株选择提供科学依据。方法选取2019—2024年长沙市国家哨点监测分离的16株H3N2流感毒株作为代表株,采取... 目的通过系统分析长沙市2019—2024年甲型H3N2型流感病毒流行株的分子进化特征,揭示其基因变异规律,为长沙地区流感的精准防控和疫苗株选择提供科学依据。方法选取2019—2024年长沙市国家哨点监测分离的16株H3N2流感毒株作为代表株,采取RT-PCR扩增病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的基因全长片段,通过下一代测序(next generation sequencing,NGS)技术得到完整基因序列,使用Megalign软件进行序列同源性分析,采用MEGA 11.0软件的Clustal W法进行多重序列比对和氨基酸突变位点分析。采用邻接法(neighbor-joining,N-J法)构建HA和NA基因系统发育进化树(Bootstrap=1000)。结果2019—2024年长沙市16株H3N2分离株HA蛋白均属于3C.2a进化分支,2019年分化出3C.2a1b.1b与3C.2a1b.22个亚分支,2022年后逐步演化为3C.2a1b.2a.2a分支,2023和2024年毒株全部归属于3C.2a1b.2a.2a.3a.1进化分支。同源性分析表明,2019年H3N2流行株HA和NA基因与疫苗株相似性最低,2024年相似性最高。HA蛋白关键位点发生显著变异,包括受体结合位点(re⁃ceptor binding site,RBS)区域的N190D、Y195F,以及抗原表位区域的T135K、H156S、N158K等抗原漂移。2022年毒株新增的NYTY糖基化基序可能导致红细胞凝集能力下降;所有分离株的NA蛋白催化中心高度保守,未检出E119V/R292K等神经氨酸酶抑制剂耐药性突变。结论2019—2024年间长沙市H3N2流感病毒毒株持续发生抗原漂移和遗传进化,已形成了新的优势流行进化分支3C.2a1b.2a.2a.3a.1,HA蛋白的抗原决定簇及RBS区域出现的多个氨基酸位点变异涉及到受体结合特性和病毒抗原性的改变,应及时更新流感疫苗。NA蛋白未出现耐药位点突变,提示对神经氨酸酶抑制剂等药物仍然敏感。 展开更多
关键词 h3n2流感病毒 血凝素 神经氨酸酶 分子进化 基因变异 抗原表位
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2023-2024年湖南省长沙市H3N2流感流行株血凝素蛋白鸡胚适应性关键突变研究
2
作者 裴瑞青 叶文 +5 位作者 姚栋 欧新华 张如胜 黄政 曾琴 扶会媛 《疾病监测》 北大核心 2026年第1期80-86,共7页
目的本研究旨在分析2023—2024年湖南省长沙市H3N2亚型流感病毒在鸡胚中复制能力提高的分子机制,为疫苗株筛选提供依据。方法选取2023—2024年长沙市H3N2流行期间6例流感样病例的H3N2核酸阳性样本,分别接种犬肾上皮细胞和无特定病原鸡... 目的本研究旨在分析2023—2024年湖南省长沙市H3N2亚型流感病毒在鸡胚中复制能力提高的分子机制,为疫苗株筛选提供依据。方法选取2023—2024年长沙市H3N2流行期间6例流感样病例的H3N2核酸阳性样本,分别接种犬肾上皮细胞和无特定病原鸡胚进行病毒分离,通过红细胞凝集试验与凝集抑制试验鉴定病毒滴度。采用Illumina测序平台对血凝素基因进行全长测序,使用MEGA 11.0软件用邻接法构建系统进化树,并通过多序列比对重点分析抗原决定簇及受体结合位点氨基酸突变,鉴定与鸡胚适应性相关的关键位点。结果6株H3N2鸡胚毒株HA滴度为1∶8~1∶64,鸡胚一代分离阳性率83.33%。进化分析显示2023—2024年长沙市H3N2流行株归属于3C.2a1b.2a.2a.3a.1谱系,与2023—2024年世界卫生组织推荐疫苗株序列一致性达99.10%~99.60%;与鸡胚生长不良型参考毒株HA蛋白序列比对分析发现了H156S、Y159N、G186D、F193S等与鸡胚内流感病毒发育适应相关的氨基酸突变位点。在鸡胚传代过程中,H3N2流感病毒出现了D186N、N246K两个鸡胚适应性突变,均不在抗原决定簇。结论2023—2024年长沙市H3N2流行株通过HA蛋白受体结合域关键氨基酸位点突变,重新获得在鸡胚良好的生长复制能力;鸡胚适应性突变D186N、N246K对病毒抗原性影响有限。本研究为疫苗生产株筛选提供了分子标记,但需持续监测这些突变对病毒传播力及疫苗有效性的潜在影响。 展开更多
关键词 h3n2流感病毒 血凝素 鸡胚 适应性突变 分子进化
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MDCK细胞悬浮培养制备流感病毒H3N2灭活疫苗研究
3
作者 阮朝列 杨璐洁 +2 位作者 廖国阳 李卫东 周健 《云南大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第1期192-200,共9页
以鸡胚为基质生产流感疫苗已有近70年的历史,但该生产平台存在一系列问题,因此,开发细胞培养替代鸡胚培养生产流感疫苗已势在必行.本研究建立了基于MDCK细胞悬浮培养的流感病毒H3N2生产与纯化工艺.首先,采用小规模悬浮培养制备H3N2病毒,... 以鸡胚为基质生产流感疫苗已有近70年的历史,但该生产平台存在一系列问题,因此,开发细胞培养替代鸡胚培养生产流感疫苗已势在必行.本研究建立了基于MDCK细胞悬浮培养的流感病毒H3N2生产与纯化工艺.首先,采用小规模悬浮培养制备H3N2病毒,经0.65μm滤柱过滤、300 ku超滤浓缩、核酸酶处理、Capto Core 700层析、Capto Q层析、病毒灭活等步骤,制备流感病毒H3N2单价疫苗原液.参考《中国药典》第三部(2020年版)相关附录,对各工艺步骤进行质量控制,检测宿主DNA质量浓度、血凝效价、总蛋白质量浓度、血凝素(HA)质量浓度及Vero细胞宿主蛋白质量浓度等指标,以评估纯化效果.结果表明,该工艺流程总蛋白去除率为(97.94±0.09)%,宿主蛋白去除率为(99.46±0.03)%,宿主DNA去除率为(99.99±0.01)%,血凝素回收率为(19.63±2.25)%.最终配制的H3N2单价疫苗各项质量指标均符合《中国药典》要求.在动物实验中,4~6周龄BALB/c小鼠经皮下免疫两次后采集尾静脉血清,采用红细胞凝集抑制试验评估免疫效果.结果显示,MDCK悬浮培养制备的H3N2单价疫苗与传统鸡胚疫苗在免疫效力上无显著差异,且具有良好的安全性.本研究成功建立了基于MDCK悬浮培养的H3N2流感病毒疫苗的生产与纯化工艺,所制备疫苗具有良好的免疫原性与安全性,为细胞基质流感疫苗的工业化生产提供了技术支撑. 展开更多
关键词 流感病毒 h3n2病毒 悬浮培养 MDCK细胞 疫苗
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甲型H3N2流感病毒候选标准株的筛选及其评价
4
作者 纪洵敏 谭丽容 +3 位作者 彭晓放 汤莉 柯昌文 张磊 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 北大核心 2026年第1期134-146,共13页
目的:依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812-2022),筛选甲型H3N2流感病毒的候选标准毒株,并进行实验室评价,旨在为我国流感病毒检测、疫苗研发和疾病防控提供本土化、标准化的毒株资源。方法:从广东省2020年分离... 目的:依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812-2022),筛选甲型H3N2流感病毒的候选标准毒株,并进行实验室评价,旨在为我国流感病毒检测、疫苗研发和疾病防控提供本土化、标准化的毒株资源。方法:从广东省2020年分离的甲型H3N2流感病毒毒株中筛选出2株候选株,通过蚀斑纯化技术获得单克隆毒株,结合细胞病变效应(CPE)情况、电镜形态学观察、基因型鉴定、病毒血凝实验、支原体检测及全基因组测序,对毒株生物学、活性和稳定性进行评价。结果:筛选出的2株甲型H3N2流感病毒毒株均无支原体污染,且同一样本产生的空斑均为同一基因型,感染MDCK细胞后可引发典型CPE。电镜观察显示病毒颗粒符合典型的甲型H3N2流感病毒颗粒特征。病毒连续传代5次后,红细胞凝集实验结果均稳定在1∶32~1∶64,均获得血凝素蛋白(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(MP)、非结构蛋白(NS)、核蛋白(NP)、聚合酶酸性蛋白(PA)、聚合酶碱性蛋白1(PB1)和聚合酶碱性蛋白2(PB2) 8个节段全基因组序列,这2株毒株的核苷酸序列与氨基酸序列均未发生突变。结论:本研究建立并验证了甲型H3N2流感病毒的候选标准株,为病原检测、诊断试剂开发及疫苗药物研发提供了关键物质基础,同时为其他病原微生物国家候选标准株的建立提供了技术参考。 展开更多
关键词 甲型h3n2流感病毒 病毒标准株 蚀斑纯化 实验室评价
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甲型H3N2流感病毒的遗传进化与系统动力学研究进展
5
作者 朱瑾怀 曾治平 《临床医学进展》 2026年第2期3093-3101,共9页
甲型H3N2流感病毒是引起全球季节性流感的主要病原体之一,自1968年大流行以来持续演化。其突出的快速抗原变异与重组能力,严重导致疫苗匹配困难与疫情反复。病毒进化主要由血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的突变积累与基因重配来驱动,... 甲型H3N2流感病毒是引起全球季节性流感的主要病原体之一,自1968年大流行以来持续演化。其突出的快速抗原变异与重组能力,严重导致疫苗匹配困难与疫情反复。病毒进化主要由血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的突变积累与基因重配来驱动,上位性作用与结构约束共同塑造该病毒抗原变异路径。系统动力学模型整合基因组和流行病学数据,揭示了病毒传播的时空方式,并发现HA/NA表位遗传距离与流行规模、传播强度具有显著相关性。有研究表明,病毒进化具有明显的区域与宿主的特异性;在疫苗方面,抗原具有快速进化、鸡胚适应性突变及重组事件导致疫苗保护效果下降的特性,特别是在西太平洋等地区存在疫苗株更新滞后的问题。未来需要通过多学科交叉,加强全球监测、开发广谱疫苗、构建整合多基因的预测模型,同时深入评估跨物种传播风险,进而提升对H3N2流感的防控能力。本综述系统阐述了H3N2病毒的遗传进化机制、系统动力学特征以及该病毒对流行病学与疫苗策略的影响。 展开更多
关键词 甲型h3n2流感病毒 遗传进化 系统动力学 抗原漂移 重组 疫苗设计 流行病学监测
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2022-2024年新疆生产建设兵团甲型H3N2流感病毒进化与基因特征分析 被引量：2
6
作者 郭景霞 何尧 +3 位作者 郭艳 赵湾文槿 李永鑫 李凡卡 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1175-1182,共8页
分析新疆生产建设兵团(简称新疆兵团)2022-2024年甲型H3N2流感病毒抗原性变异及耐药情况。本文采集哨点医院流感样病例咽拭子标本进行病毒分离,选取病毒血凝效价≥8的毒株,利用二代测序技术对病毒株进行全基因组测序后通过生物信息学软... 分析新疆生产建设兵团(简称新疆兵团)2022-2024年甲型H3N2流感病毒抗原性变异及耐药情况。本文采集哨点医院流感样病例咽拭子标本进行病毒分离,选取病毒血凝效价≥8的毒株,利用二代测序技术对病毒株进行全基因组测序后通过生物信息学软件MEGA分析基因进化特征,同时分析病毒HA抗原决定簇和NA基因氨基酸位点变化情况,对其进行基因进化同源性和三维建模分析。新疆兵团2022-2024年甲型H3N2亚型流感病毒株均位于3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支,与WHO 2022-2023年发布的疫苗株A/Darwin/6/2021亲缘关系较近,HA基因抗原决定簇上存在9处不同的氨基酸突变位点。NA基因共存在27个氨基酸突变位点,但是均不在NA酶活性位点,推测不会产生相关的耐药性。全基因组其余6个片段序列相似性为95.2%~100%,均位于相应分支无重配现象。2022-2024年度新疆兵团H3N2亚型流感病毒与WHO 2022-2023年发布的疫苗株对比发生了部分变异,还需持续做好流感病毒抗原性和耐药监测工作,及时掌握流感病毒基因特性情况,为本地区流感病毒防控提供科学依据。 展开更多
关键词 甲型h3n2亚型流感病毒 全基因组测序 同源性 糖基化 三维建模
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2023—2024年山东省H3N2流感病毒的流行及HA、NA基因变异特征分析
7
作者 吴巨龙 何玉洁 +6 位作者 孙林 张淑 宋绍霞 刘倜 李忠 王显军 寇增强 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第8期873-878,共6页
目的 了解2023—2024年山东省H3N2流感病毒的流行状况以及分离的H3N2亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因的变异特征,以了解其与疫苗株的匹配性及其耐药情况。方法 从流感监测网络实验室分离的... 目的 了解2023—2024年山东省H3N2流感病毒的流行状况以及分离的H3N2亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因的变异特征,以了解其与疫苗株的匹配性及其耐药情况。方法 从流感监测网络实验室分离的毒株中随机选取25株H3N2亚型流感毒株,以WHO推荐的疫苗株为参考进行HA、NA基因序列测定分析,并采用神经氨酸酶抑制实验开展奥司他韦和扎那米韦敏感性监测。结果 2023—2024年山东省H3N2流感病毒属于3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支;核苷酸序列分析显示,HA和NA基因与WHO推荐的当季疫苗株A/Darwin/9/2021的亲缘关系较为接近,核苷酸同源性分别为97.8%~98.2%和98.9%~99.3%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白头部(HA1)共有22个位点发生氨基酸序列变异,8株病毒可能发生抗原漂移,25株毒株均在HA蛋白94位增加了糖基化位点。部分毒株NA抗原决定簇发生变异,NA抑制实验显示所测毒株对奥司他韦和扎那米韦均敏感。结论 本研究纳入的25株毒株与疫苗株HA、NA蛋白之间存在一定程度差异,今后要继续开展流感病毒基因变异监测,深入研究病毒变异对流感疫苗和治疗药物效果的影响。 展开更多
关键词 h3n2 血凝素 神经氨酸酶 基因变异
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2020—2024年广西H3N2亚型禽流感病毒HA和NA基因分子特征分析
8
作者 尹彦文 熊陈勇 +14 位作者 韦伟 施开创 郑敏 崔鹏飞 韦显凯 李致远 刘惠心 冯淑萍 卢春花 屈素洁 陆文俊 李雪珍 王睿敏 邓国华 欧长波 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4358-4367,共10页
【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,... 【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,提取核酸后通过PCR扩增血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因并测序,进行序列相似性、系统发育、氨基酸变异位点及遗传进化速率分析。【结果】共获得43株HA和NA基因序列,编码区大小为1 701和1 410 bp。相似性比对分析显示,本研究获得的HA和NA基因之间核苷酸序列相似性分别为86.0%~99.9%和89.7%~99.9%,与GenBank中禽源、人源、猪源和犬源核苷酸序列相似性分别为78.4%~99.7%和78.1%~99.1%。广西H3N2亚型AIV毒株HA和NA基因属于欧亚谱系,与禽源亲缘关系最近,与人源/猪源最远。HA蛋白在第18—20、22—24、38—40、54—56、61—63、181—183、301—303和499—501位氨基酸处出现糖基化,NA蛋白在第61—63、69—71、86—88、143—145、146—148、200—202、234—236、313—315和402—404位氨基酸处出现糖基化,部分氨基酸位点发生变异;HA蛋白裂解位点为340PEKQTR↓GLF348和340PERQTR↓GLF348。遗传进化速率估算结果显示,HA和NA基因遗传进化速率分别为3.26×10^(-3)和3.67×10^(-3)替换/(位点·年),HA基因种群规模在不同时间段表现出不同的动态进化特征。【结论】H3N2亚型AIV广西流行毒株与同种流行毒株亲缘性较近,部分HA和NA蛋白发生特有氨基酸突变,不同种属毒株进化趋势不一致,具有遗传多样性特征。试验结果为防控H3N2亚型AIV提供基础数据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h3n2亚型 遗传进化 相似性
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2016-2023年湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析
9
作者 邓先群 李冰清 +2 位作者 李雯 严小雪 杨芸 《疾病监测》 北大核心 2025年第1期98-105,共8页
目的了解2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流行性感冒(流感)病毒血凝素(HA)基因特征及抗原漂移情况。方法对2016—2023监测年度湖北省荆门市分离到的60株H3N2流感毒株进行全基因组测序,利用MEGA 11、UCSF Chimera1.18等软件对HA... 目的了解2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流行性感冒(流感)病毒血凝素(HA)基因特征及抗原漂移情况。方法对2016—2023监测年度湖北省荆门市分离到的60株H3N2流感毒株进行全基因组测序,利用MEGA 11、UCSF Chimera1.18等软件对HA基因序列进行抗原变异分析和三维建模分析。结果2016—2023监测年度共计5个监测年度有H3N2亚型流感病毒检出,共有3C.2a1、3C.2a2、3C.2a3、3C.2a1b.1b、3C.2a1b.2a.1a、3C.2a1b.2a.2a.3a.1共计6个进化簇流行,优势毒株从2016年的3C.2a2簇逐步变更为2023年的3C.2a1b.2a.2a.3a.1簇,两者在HA蛋白抗原表位上存在差异的氨基酸突变位点达21个,有I140K等13处氨基酸突变位点在表面模式结构图中差异明显。结论2016—2023监测年度湖北省荆门市H3N2亚型流感病毒不断进化,发生了抗原漂移,应持续加强对H3N2亚型流感病毒的分子变异监测。 展开更多
关键词 h3n2亚型流感病毒 血凝素基因 抗原漂移
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2023—2024年吉林省甲型H3N2流感病毒分子特征分析
10
作者 柳鸿敏 黄飚 +8 位作者 张炜煜 吴东林 杨显达 杨尧 孙杨 王艺儒 吴佳寅 崔芳健 李静 《中国卫生工程学》 2025年第6期755-761,共7页
目的对吉林省2023—2024年甲型H3N2流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因特征进行分析,为做好季节性流感病毒防控提供数据参考。方法随机选取吉林省2023—2024年38株H3N2流感病毒,对HA和NA基因进行序列同源性、基因位点氨基酸变异、... 目的对吉林省2023—2024年甲型H3N2流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因特征进行分析,为做好季节性流感病毒防控提供数据参考。方法随机选取吉林省2023—2024年38株H3N2流感病毒,对HA和NA基因进行序列同源性、基因位点氨基酸变异、构建系统进化树及进化特征分析。结果38株甲型H3N2流感毒株HA基因属于G.1分支(3C.2a1b.2a.2a),NA基因属于B分支。HA蛋白氨基酸序列共发生了39处氨基酸位点变异,NA蛋白氨基酸序列共发生了19处氨基酸位点变异,38株毒株全部对烷胺类药物耐药,全部对巴洛沙韦酸敏感。结论2023—2024年度吉林省甲型H3N2流感病毒毒株发生抗原漂移,未来应加强流感病毒病原学监测,以精准掌握流感病毒分子特征变异趋势。 展开更多
关键词 流感病毒 甲型h3n2流感病毒 序列分析
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一起学校聚集性感染甲型H3N2流感病毒基因特征分析
11
作者 张涛 邱超 张亮 《标记免疫分析与临床》 2025年第2期290-296,共7页
目的分析2023年12月枣庄市某学校发生的甲型H3N2流感病毒聚集性疫情的流行病学特点和全基因组特征,为流感防控提供参考依据。方法对流感样病例开展流行病学调查,并采集其咽拭子标本进行核酸检测,对阳性标本进行病毒分离。随后对分离得... 目的分析2023年12月枣庄市某学校发生的甲型H3N2流感病毒聚集性疫情的流行病学特点和全基因组特征,为流感防控提供参考依据。方法对流感样病例开展流行病学调查,并采集其咽拭子标本进行核酸检测,对阳性标本进行病毒分离。随后对分离得到的毒株进行全基因组测序,利用生物信息学软件分析基因进化特征。结果此次聚集性疫情共报告19例病例,其中16例(84.21%)核酸检测呈甲型H3N2流感病毒阳性,成功分离7株病毒毒株。7株分离株与疫苗株A/Darwin/6/2021同属3C.2a1b.2a2进化分支。与疫苗株A/Darwin/6/2021相比,7株分离株的8个基因节段核苷酸同源性为97.37%~99.50%,氨基酸同源性为94.90%~100.00%。7株分离株血凝素HA蛋白共发生17个氨基酸位点突变,其中4个突变位点位于抗原决定簇,神经氨酸酶NA蛋白发生3个氨基酸位点突变,但这些突变不涉及NA酶活性及其抑制剂耐药位点。此外,多个蛋白糖基化和磷酸化位点发生改变。结论引起本次学校聚集性疫情的病原体是甲型H3N2流感病毒,应加强学校疫情监测并严格执行防控措施。 展开更多
关键词 甲型h3n2流感病毒 聚集性疫情 全基因组分析
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H3N2亚型猪流感病毒HA1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1
12
作者 司维 谭茜宇 +3 位作者 徐玲芸 罗廷荣 李晓宁 顾金燕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1739-1749,共11页
【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04... 【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04/2005(H3N2))毒株的HA1片段,采用同源重组方法构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1,经PCR和测序鉴定正确后将重组阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。对HA1蛋白表达条件(诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行优化,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白。将获得的重组蛋白与QuickAntibody-Mouse3W佐剂混合后以肌内注射方式免疫BALB/c小鼠,制备H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,并通过ELISA、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体的效价、反应性及特异性进行鉴定。【结果】本研究成功构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1;H3N2亚型SIV HA1重组蛋白在1 mmol/L IPTG 26℃诱导10 h时表达量最高,且主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量大小约为39.5 ku。成功制备5株H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,效价均为1∶1 638 400。Western blotting和IFA鉴定结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别真核表达的H3N2亚型SIV HA1蛋白,与H1N1亚型SIV、H7N9亚型禽流感病毒(AIV)等其他亚型流感病毒的HA1蛋白均不发生反应,具有良好的反应性及特异性。【结论】本研究成功表达并纯化了免疫原性良好的H3N2亚型SIV HA1蛋白,制备了反应性及特异性良好的鼠源多克隆抗体,为深入研究H3N2亚型SIV HA1蛋白的生物学功能提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪流感病毒(SIV) h3n2亚型 HA1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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深圳市龙岗区2023年甲型H3N2流感病毒遗传进化特征分析
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作者 林泽仁 金玉娟 +6 位作者 陈应坚 李刚 王猛 王琼瑶 李静媚 廖汉青 周健明 《中国热带医学》 北大核心 2025年第6期790-796,共7页
目的了解深圳市龙岗区2023年季节性甲型H3N2流感的遗传多样性和进化动力学,为龙岗区甲型H3N2流感防控提供科学依据。方法对2023年龙岗区5家哨点医院监测和233起学校聚集疫情的流感样病例(influenzalike illness,ILI)咽拭子样本进行核酸... 目的了解深圳市龙岗区2023年季节性甲型H3N2流感的遗传多样性和进化动力学,为龙岗区甲型H3N2流感防控提供科学依据。方法对2023年龙岗区5家哨点医院监测和233起学校聚集疫情的流感样病例(influenzalike illness,ILI)咽拭子样本进行核酸检测和病毒分离,依据2023年H3N2阳性样本流行规律,从全年4个季度中,共选取10株甲型H3N2流感病毒代表株进行全基因组测序和蛋白结构预测,利用生物信息学软件FastTree、AlphaFold2、NetNGlyc分析基因进化特征及评估疫苗效力(vaccine efficacy,VE)。结果2023年,辖区检测ILI样本2841份,甲型H3N2流感阳性率为16%(461/2841),在青中年流感阳性群体(15~<55岁)中占据优势。选取的10株病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白基因属于3C.2a1b.2a.2a.1b和3C.2a1b.2a.2a.3a.1,NA基因属于B.2和B.4.3;其中9株毒株各自的HA进化关系与神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白进化关系存在差异,可能涉及基因重配。HA抗原位点出现A表位N138D、B表位I156K和D表位I208F突变,VE(100%)值范围74%~84%。糖基化位点分析发现HA与NA共有7个具有较强潜力的保守位点,包括NST24-26、NGT38-40、NCT79-81、NVT181-183、NGS301-303、NIT61-63和NGT234-236。NA序列未出现对奥司他韦的耐药变异位点。结论2023年龙岗区甲型H3N2病毒基因组经历1次分支演化,由于抗原漂移,可能导致疫苗效力降低。亟需新型广谱疫苗,并提升对辖区流感传播的防控与宣传力度;同时,有必要启动甲型流感病毒基因组监测网络建设,为重症流感的临床诊治提供具有潜在价值的基础信息。 展开更多
关键词 h3n2流感病毒 全基因组测序 蛋白结构预测 疫苗效力
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北京市门头沟区2023年2例流感样病例甲型H3N2病毒全基因组分析
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作者 何川 涂畅煌 +1 位作者 王晨旭 王志越 《疾病预防控制通报》 2025年第2期49-53,共5页
目的分析北京市门头沟区2023年2例流感样病例检出的甲型H3N2病毒的全基因组分子特征,为当地流感防控提供科学依据。方法提取2023年第1周和第5周检出的2份甲型H3N2病毒阳性样本的病毒RNA,使用Illumina高通量测序平台测定全基因组,并通过D... 目的分析北京市门头沟区2023年2例流感样病例检出的甲型H3N2病毒的全基因组分子特征,为当地流感防控提供科学依据。方法提取2023年第1周和第5周检出的2份甲型H3N2病毒阳性样本的病毒RNA,使用Illumina高通量测序平台测定全基因组,并通过DNASTAR、MEGA等生物信息学软件进行系统进化分析和分子特征研究。结果2023年门头沟区2例流感样病例检出的甲型H3N2病毒归属于3C.2a1b.2a.1a.1分支,对比2022—2023年WHO推荐疫苗株A/Darwin/9/2021,HA基因发生9处突变;对比2021—2022年WHO推荐疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020,HA基因发生3处突变。未检出与神经氨酸酶抑制剂和核酸内切酶抑制剂耐药相关的突变。结论2023年门头沟区2例流感样病例检出的甲型H3N2病毒与WHO推荐疫苗株A/Darwin/9/2021在抗原性上存在一定差异,可能影响疫苗匹配度及免疫保护效果,与WHO推荐疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020具有一定的免疫交叉保护作用。建议加强流感病毒基因监测,持续评估流行株的变异趋势,为疫苗优化和流感防控策略提供数据支持。 展开更多
关键词 甲型h3n2病毒 分子特征 进化树 亚分支
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武汉市某小学一起甲型H3N2流感暴发的流行病学调查
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作者 宁惊鸣 忻骥 +2 位作者 郭慧 夏林 汪鹏 《实用预防医学》 2025年第7期865-868,共4页
目的调查武汉市某小学一起甲型流感病毒引起的暴发疫情,为校园内流感疫情防控提供科学依据。方法通过现场调查、问卷调查,结合临床表现及实验室检测结果,对该校疫情流行病学特征进行描述性分析和病例对照研究,罹患率的比较采用χ^(2)检... 目的调查武汉市某小学一起甲型流感病毒引起的暴发疫情,为校园内流感疫情防控提供科学依据。方法通过现场调查、问卷调查,结合临床表现及实验室检测结果,对该校疫情流行病学特征进行描述性分析和病例对照研究,罹患率的比较采用χ^(2)检验。结果2023年2月15日—3月12日,共60例病例,无教职工发病,学生罹患率为8.11%(60/740)。首发病例发病时间在2月20日,3月2日达到发病高峰。南北教学楼罹患率差异有统计学意义(χ^(2)=6.520,P=0.011),北教学楼罹患率较高,呈现从1楼扩散至2、3楼的趋势;各班级罹患率差异有统计学意义(χ^(2)=76.205,P=0.000),三年级(1)班罹患率最高,为34.62%(18/52)。病例组和对照组近半年内流感疫苗接种率差异有统计学意义(OR=0.130,95%CI:0.003~0.912),表明接种流感疫苗是保护因素,接种过流感疫苗的学生患流感的概率是未接种学生的0.130倍。采集的28份咽拭子标本中9份RT-PCR检测为H3N2阳性。结论本起疫情为甲型H3N2流感病毒引起的暴发,及时发现病例行居家隔离治疗,提高流感疫苗接种率,可有效防控流感疫情。 展开更多
关键词 甲型h3n2流感 暴发 罹患率 疫苗接种率 学校
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5种中药提取物抗小鼠体内H3N2型流感病毒的作用
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作者 朱颖 曹若彤 +4 位作者 黎永良 陈嘉志 沈伟花 杨妙红 杜志云 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期93-98,共6页
为研究5种中药(甘草、黄精、姬松茸、金银花及海藻)提取物及其复合配方提取物对慢性疲劳综合征小鼠提高免疫力抗H3N2型流感病毒感染的干预作用,采用束缚联合睡眠剥夺致免疫力低下法及小鼠滴鼻法建立慢性疲劳综合征小鼠感染H3N2型流感病... 为研究5种中药(甘草、黄精、姬松茸、金银花及海藻)提取物及其复合配方提取物对慢性疲劳综合征小鼠提高免疫力抗H3N2型流感病毒感染的干预作用,采用束缚联合睡眠剥夺致免疫力低下法及小鼠滴鼻法建立慢性疲劳综合征小鼠感染H3N2型流感病毒模型,其间每日给药物组小鼠灌胃200μL相应提取浓缩物(生药量300 mg/mL)。试验结束后测定脏器指数,检测脾脏淋巴细胞活性,观察肺泡结构、炎症细胞浸润等病理学变化。结果表明:与空白对照比较,模型组小鼠脾脏指数极显著升高至(4.43±0.14)%,胸腺指数、脾淋巴细胞增殖活性极显著降低,小鼠个体免疫力下降,经H3N2型病毒感染后肺部有水肿和出血现象,肺指数极显著升高至(14.52±1.54)%,发生肺部病变;经过给药后,5种中药复合配方提取物可促进H3N2型病毒小鼠体质量恢复,显著降低脾脏指数和提高胸腺指数,脾淋巴细胞增殖活性极显著提高至(47.64±4.43)%,增强小鼠免疫功能,并降低肺指数,对肺组织结构有较好的保护作用,可缓解和改善模型小鼠感染病毒症状。综上可见,5种中药复合配方提取物可通过增强小鼠的免疫力来提高小鼠抗H3N2型病毒的能力。 展开更多
关键词 小鼠 中药提取物 免疫力 h3n2型流感病毒 慢性疲劳综合征 脏器指数 脾淋巴细胞增殖活性
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连花清菲代用茶对甲型H3N2流感病毒感染雪貂的预防作用
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作者 彭冬冬 唐梓宁 +5 位作者 傅聪 赵易敏 李萌 陈相池 姜德建 刘学武 《中成药》 北大核心 2025年第5期1735-1740,共6页
目的 考察连花清菲代用茶对甲型H3N2流感病毒所致雪貂呼吸道感染的预防作用。方法 将28只雪貂随机分为正常组、模型组、磷酸奥司他韦颗粒组(6.9 mg/kg)、板蓝根颗粒组(1 g/kg)和连花清菲代用茶低、中、高剂量组(0.8、1.6、3.2 g/kg),每... 目的 考察连花清菲代用茶对甲型H3N2流感病毒所致雪貂呼吸道感染的预防作用。方法 将28只雪貂随机分为正常组、模型组、磷酸奥司他韦颗粒组(6.9 mg/kg)、板蓝根颗粒组(1 g/kg)和连花清菲代用茶低、中、高剂量组(0.8、1.6、3.2 g/kg),每组4只,各组连续灌胃给药7 d。于第4天给药前,经鼻滴入给予H3N2甲型流感病毒原液(病毒滴度6log2)。每日测量并记录雪貂肛温、体温及体质量,并进行症状评分;采用RT-qPCR法检测咽拭子病毒载量,利用流式细胞仪检测外周血中CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例;采用ELISA试剂盒检测肺组织TNF-α、IFN-γ水平;解剖取肺组织,进行肺指数和组织病理学检查。结果 与模型组比较,连花清菲代用茶高剂量组和磷酸奥司他韦颗粒组雪貂症状评分(包括鼻部症状和活跃度)、肺组织病理评分、体温、肺指数、肺组织IFN-γ和TNF-α水平、咽拭子病毒载量均降低(P<0.05,P<0.01),CD4^(+)T/CD8^(+)T细胞比例升高(P<0.01)。结论 连花清菲代用茶可抑制H3N2甲型流感病毒复制,减轻肺组织病变程度,其作用机制可能与抑制局部肺组织炎性介质分泌及提高机体免疫细胞功能有关。 展开更多
关键词 连花清菲代用茶 雪貂 h3n2甲型流感病毒 炎症因子 免疫细胞
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儿童清咽解热口服液与奥司他韦颗粒联合用药治疗儿童甲型H3N2流感的临床效果观察
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作者 辛星 《基层中医药》 2025年第8期42-46,共5页
目的评价儿童清咽解热口服液与奥司他韦颗粒联合治疗儿童甲型H3N2流感(普通型)的临床效果及安全性。方法选取青海省妇女儿童医院发热门诊自2023年11月—2024年2月收治的241例甲型H3N2流感(普通型)患儿为研究对象。采用SAS?9.4 PLAN程序... 目的评价儿童清咽解热口服液与奥司他韦颗粒联合治疗儿童甲型H3N2流感(普通型)的临床效果及安全性。方法选取青海省妇女儿童医院发热门诊自2023年11月—2024年2月收治的241例甲型H3N2流感(普通型)患儿为研究对象。采用SAS?9.4 PLAN程序进行区组等比随机化,产生随机数字表将患儿分为2组。对照组(120例)患儿使用奥司他韦颗粒。观察组(121例)患儿在对照组基础上予儿童清咽解热口服液治疗。治疗后,观察并比较2组患儿疾病总有效率,临床症状消失时间,白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化水平及不良反应发生情况。结果治疗后,观察组和对照组的治疗总有效率分别为98.35%和88.33%(P<0.05)。治疗期间,观察组患儿的完全退热时间和咽痛消失时间、流感症状缓减时间均较对照组缩短(均P<0.05)。治疗后,观察组患儿CRP、TNF-α、IL-6水平均比治疗前降低,且较对照组患儿降低更明显(均P<0.05),2组患儿均未有不良事件的发生。结论儿童清咽解热口服液与奥司他韦颗粒联合用药治疗甲型H3N2流感(普通型)可明显提高治疗总有效率,缩短病程,明显优于单用奥司他韦颗粒治疗的效果。 展开更多
关键词 甲型h3n2流感(普通型) 儿童清咽解热口服液 奥司他韦颗粒 临床效果 安全性
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猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法的建立 被引量：23
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作者 杨焕良 乔传玲 +3 位作者 陈艳 辛晓光 李一经 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期714-718,共5页
对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重... 对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重PCR特异性引物,建立了猪流感H1N1、H1N2和H3N2亚型病毒多重RT-PCR诊断方法。采用该方法对H1N1、H1N2、H3N2亚型猪流感病毒标准参考株进行RT-PCR检测,结果均呈阳性,对扩增得到的片段进行序列测定和BLAST比较,表明为目的基因片段。其它几种常见猪病病毒和其它亚型猪流感病毒的RT-PCR扩增结果都呈阴性。对107EID50/0.1mL病毒进行稀释,提取RNA进行敏感性试验,RT-PCR最少可检测到102EID50的病毒量核酸。对40份阳性临床样品的检测结果是H1N1、H1N2和H3N2亚型分别为16份、1份和20份,其它3份样品同时含有H1N1和H3N2亚型猪流感病毒,和鸡胚分离病毒结果100%一致。试验证明建立的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法是一种特异敏感的诊断方法,可用于临床样品的早期快速诊断和分型。 展开更多
关键词 猪流感 病毒 HIN1 HIN2 h3n2 多重RT-PCR
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广东地区流感H3N2毒株血凝素基因特征、进化和变异分析 被引量：16
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作者 黄平 钟静 +4 位作者 梁丽君 侯年妹 倪汉忠 武婕 张欣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期330-335,共6页
为揭示广东地区2007～2010年甲型H3N2毒株血凝素(HA)基因特征和变异,采用时空抽样方法抽样,检测广东2007～2010年甲型H3N2毒株HA基因核苷酸序列,同时检索全球HA基因序列作为对照,采用Lasergene7.1和Mega 5.05软件对HA基因核苷酸序列进... 为揭示广东地区2007～2010年甲型H3N2毒株血凝素(HA)基因特征和变异,采用时空抽样方法抽样,检测广东2007～2010年甲型H3N2毒株HA基因核苷酸序列,同时检索全球HA基因序列作为对照,采用Lasergene7.1和Mega 5.05软件对HA基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料,对变异毒株进行进化速度分析;同时进行抗原分析。结果发现,广东2007～2010年H3N2毒株HA基因同义进化(Ks)和错义进化(Ka)速度分别为2.06×10-3～2.23×10-3核苷酸/年和1.05×10-3～1.21×10-3核苷酸/年,HA1较HA2的错义突变速率要高3.13倍。与疫苗株A/Perth/16/2009的HA基因比较,2009年广东毒株同源性达到98.8%～99.7%、2010年同源性达到98.0%～98.4%。在广东2007～2010年毒株中,HA1五个抗原表位均有氨基酸位点变异,尤其是2010年毒株B区(N160K)和D区(K174R/N)的变异;此外,广东2010年毒株受体结合部位(RBS)还发生K189E/N/Q和T228A置换变异;两个糖基化位点变异影响到抗原性;目前使用的H3N2疫苗株与目前流行毒株的抗原性有差异。广东地区2007～2010年的毒株中,血凝抑制抗体的抗原分析结果有差异。结果提示,目前广东乃至全球甲型H3N2毒株HA1B区和D区均有氨基酸位点变异,RBS的两个位点发生置换,糖基化位点变异影响到表位A区和B区抗原性;与WHO推荐2011年流感H3N2毒株疫苗株比较,目前流行毒株HA基因有抗原位点变异。 展开更多
关键词 流感 h3n2毒株 HA基因 表位 进化 疫苗株
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