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H-2A火箭退役:日本传统火箭的“最后一舞”
1
作者 张雪松 《太空探索》 2025年第9期44-49,共6页
2025年6月29日,日本H-2A火箭在种子岛航天中心发射升空,将日本GOSAT-GW卫星送入太阳同步轨道。这是H-2A火箭的第50次也是最后一次发射,H-2A火箭从此正式退役。H-2A火箭的总体设计相当传统,没能在航天商业化时代成为弄潮儿,但它作为日本... 2025年6月29日,日本H-2A火箭在种子岛航天中心发射升空,将日本GOSAT-GW卫星送入太阳同步轨道。这是H-2A火箭的第50次也是最后一次发射,H-2A火箭从此正式退役。H-2A火箭的总体设计相当传统,没能在航天商业化时代成为弄潮儿,但它作为日本主力运载火箭,长期以来是日本航天的顶梁柱。随着下一代H-3火箭的服役,H-2A系列火箭在平淡中默默退场。 展开更多
关键词 GOSAT-GW卫星 h-2A火箭 日本 退役
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H-2Kb限制性AGR2蛋白CTL表位肽的鉴定及抗黑色素瘤作用
2
作者 汤海潮 于兆进 魏敏杰 《解剖科学进展》 2025年第2期257-261,共5页
目的筛选黑色素瘤肿瘤相关抗原AGR2蛋白来源的H-2K^(b)限制性CTL表位肽,并鉴定其抗肿瘤效应。方法Western blot和细胞流式术分别验证AGR2蛋白和H-2K^(b)基因在小鼠黑色素瘤细胞系B16-F0的表达情况;琼脂糖凝胶电泳筛选得到H-2K^(b)基因... 目的筛选黑色素瘤肿瘤相关抗原AGR2蛋白来源的H-2K^(b)限制性CTL表位肽,并鉴定其抗肿瘤效应。方法Western blot和细胞流式术分别验证AGR2蛋白和H-2K^(b)基因在小鼠黑色素瘤细胞系B16-F0的表达情况;琼脂糖凝胶电泳筛选得到H-2K^(b)基因型的小鼠;利用超基序方案SYFPEITHI和IEDB数据库相结合的计算机模拟方法预测得到H-2K^(b)限制性AGR2-CTL表位肽,并利用分子操作环境(MOE)模拟了H-2K^(b)限制性AGR2-CTL表位肽与H-2K^(b)分子的对接,使用Elispot进一步验证其免疫活性。构建小鼠移植瘤模型验证H-2K^(b)限制性AGR2-CTL表位肽体内抗肿瘤效应,并通过考察小鼠体重、肝肾质量指数、以及血生化指标进行初步安全性评估。结果AGR2-CTL表位肽AGR2_(4-12)能够促进干扰素-γ分泌,提高CD8^(+)T细胞比例,而对CD4+T细胞比例无影响,显著抑制小鼠移植瘤生长,且在小鼠体内并无明显毒性。结论AGR2_(4-12)为H-2K^(b)限制性AGR2蛋白优势CTL表位肽,且具有显著的体内抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 AGR2 表位肽 h-2Kb限制性
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可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化 被引量：3
3
作者 钱亚云 刘静 +3 位作者 张伟 潘兴元 龚卫娟 季明春 《实用临床医药杂志》 CAS 2008年第4期1-4,共4页
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-... 目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。 展开更多
关键词 h-2K^d h-2K^d—BSP融合蛋白 可生物素化序列
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芪蛎消瘿汤对NOD.H-2h4小鼠甲状腺IL-23/IL-17轴的调控影响 被引量：10
4
作者 杨潇 高天舒 +2 位作者 曲金桥 周喜玉 徐佳 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1347-1352,共6页
目的:从辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的调控角度,探讨芪蛎消瘿汤治疗自身免疫甲状腺炎(AIT)的作用机制。方法:雌性8周龄NOD.H-2h4小鼠,随机分成4组。正常组(NC)饲以双蒸水,模型组(MC)、常规剂量中药组(ZY1)和3倍剂量中药组(ZY3)自由饮用... 目的:从辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的调控角度,探讨芪蛎消瘿汤治疗自身免疫甲状腺炎(AIT)的作用机制。方法:雌性8周龄NOD.H-2h4小鼠,随机分成4组。正常组(NC)饲以双蒸水,模型组(MC)、常规剂量中药组(ZY1)和3倍剂量中药组(ZY3)自由饮用含0.05%碘化钠水8周成模后,再灌胃给药8周。RIA法测血清TT3、TT4,IRMA法测血清TSH;光镜下观察甲状腺细胞形态;免疫组化法及RT-PCR法分别检测甲状腺IL-6、TGF-β表达;Western Blot法检测甲状腺RORγt、RORα、STAT3蛋白表达。结果:各组间血清TT3、TT4及TSH值比较无统计学差异;与NC组比较,MC组AIT的发生率,IL-6、TGF-βmRNA及蛋白表达,RORγt、RORα、STAT3表达显著升高(P<0.01);与MC组比较,ZY1组IL-6、TGF-β、RORα、STAT3、RORγt表达均明显下降(P<0.01),ZY3组IL-6、TGF-β的整合光密度值及RORα、STAT3表达明显下降(P<0.01),ZY3组RORγt表达下降(P<0.05)。结论:芪蛎消瘿汤可能通过下调IL-6、TGF-β、RORγt、RORα、STAT3的表达而调控IL-23/IL-17炎症轴起到治疗AIT的作用。 展开更多
关键词 芪蛎消瘿汤 NOD h-2h4小鼠 自身免疫甲状腺炎 IL-6 TGF-β RORΓT RORα STAT3
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MicroRNA-155在碘致NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎发病中的变化研究 被引量：7
5
作者 刘通 于振乾 +5 位作者 邹红锦 刘姗姗 范晨玲 滕卫平 单忠艳 李玉姝(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期936-941,共6页
目的:观察高碘诱发NOD.H-2 h4小鼠发生自发性自身免疫性甲状腺炎(SAT)动物模型中Th1及Th2细胞的动态变化及甲状腺、脾脏、肝脏、肾脏中mi R-155的动态改变,探讨mi R-155对碘致自身免疫性甲状腺炎(AIT)的可能影响及作用机制。方法:4周龄N... 目的:观察高碘诱发NOD.H-2 h4小鼠发生自发性自身免疫性甲状腺炎(SAT)动物模型中Th1及Th2细胞的动态变化及甲状腺、脾脏、肝脏、肾脏中mi R-155的动态改变,探讨mi R-155对碘致自身免疫性甲状腺炎(AIT)的可能影响及作用机制。方法:4周龄NOD.H-2 h4雌性小鼠随机分为对照组及高碘饮水组。高碘组饲以含0.05%碘化钠的无菌水,对照组饲以无菌双蒸水,于实验开始后第0、2、4、6、8、10、12周麻醉处死。留取甲状腺,制备石蜡切片行HE染色;酶联免疫吸附试验测定血清甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)水平;流式细胞仪检测脾脏单个核细胞悬液Th1、Th2细胞表达水平;实时定量RT-PCR检测脾细胞中Th1和Th2细胞转录因子T-bet及GATA-3,细胞因子IFN-γ及IL-4的m RNA表达水平及甲状腺、脾脏、肝脏、肾脏mi RNA-155表达水平。结果:发生SAT的小鼠血清Tg Ab滴度较对照组升高(P<0.05)。脾细胞中Th1细胞比例及T-bet,IFN-γm RNA表达量自6周后较对照组升高(P<0.05)。脾脏、甲状腺miR-155表达量分别自8周及10周后较对照组升高(P<0.05)。脾脏mi R-155水平与Tg Ab滴度显著正相关(r=0.825,P<0.01),与Th1细胞比例显著正相关(r=0.872,P<0.01);甲状腺mi R-155水平与TgAb滴度显著正相关(r=0.575,P<0.01);与Th1细胞比例显著正相关(r=0.642,P<0.01)。结论:发生SAT的NOD.H-2 h4小鼠脾脏Th1细胞比例显著升高,提示Th1细胞可能参与该模型AIT的发生发展,占免疫优势地位。脾脏及甲状腺mi R-155水平与Tg Ab滴度及Th1细胞比例显著正相关,提示mi R-155可能通过影响Th1细胞在AIT的发生发展中发挥作用。 展开更多
关键词 NOD.h-2 h4小鼠 自身免疫性甲状腺炎 microRNA-155 TH1细胞
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小鼠肝素酶H-2K^b限制性CTL表位预测及其MHC-I亲和力分析 被引量：6
6
作者 汤旭东 万瑛 +5 位作者 陈婷 熊震 陈陵 余松涛 罗元辉 杨仕明 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第9期820-822,共3页
目的预测肿瘤转移相关基因肝素酶的CTL表位,为探索基于肝素酶的抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序、量化基序结合人工神经网络方案开发的H-2Kb限制性CTL表位预测软件,对小鼠肝素酶蛋白的CTL表位进行预测,然后人工合成相... 目的预测肿瘤转移相关基因肝素酶的CTL表位,为探索基于肝素酶的抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序、量化基序结合人工神经网络方案开发的H-2Kb限制性CTL表位预测软件,对小鼠肝素酶蛋白的CTL表位进行预测,然后人工合成相关待测表位肽,再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力进行检测。结果采用机算机网络系统,预测了5条小鼠肝素酶抗原表位,即mHpa234~241(LGEDFVEL),mHpa351~358(FAAGFMWL),mHpa519~526(FSYGFFVI),mHpa386~393(VDENFEPL),mHpa398~405(LSLLFKKL),MHC亲合力实验表明,与阴性对照肽对比,随着预测肽浓度增加,H-2Kb的表达逐渐增加,与MHC-Ⅰ类分子的亲和力亦逐渐增强,当预测肽浓度达到30μmol/L时,其荧光系数(FI)均大于1.5。结论通过计算机软件预测到的5条小鼠肝素酶CTL表位与MHC-Ⅰ类分子均有较高的结合亲和力,为该表位的下一步体内鉴定及基于小鼠肝素酶抗原表位的肿瘤免疫治疗奠定基础。 展开更多
关键词 鼠肝素酶 CTL表位 h-2K^b限制性
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小鼠H-2半相合非清髓同种异基因造血干细胞移植模型的建立及其相关研究 被引量：3
7
作者 李俭杰 张毅 +4 位作者 张明伟 侯春梅 吴英 毛宁 艾辉胜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期655-660,共6页
为了探讨小鼠主要组织相容性抗原 (H 2 )半相合非清髓移植中预处理方案的可行性、移植后的造血重建、嵌合体水平及GVHD的发生情况 ,以CB6F1小鼠为受鼠 ,分为 3组 ,移植前 5天开始给予预处理 ,A组给予清髓(10 .5Gy)预处理方案 ,B组给予... 为了探讨小鼠主要组织相容性抗原 (H 2 )半相合非清髓移植中预处理方案的可行性、移植后的造血重建、嵌合体水平及GVHD的发生情况 ,以CB6F1小鼠为受鼠 ,分为 3组 ,移植前 5天开始给予预处理 ,A组给予清髓(10 .5Gy)预处理方案 ,B组给予全身照射 (2Gy) +Ara C +Cy ,C组为全身照射 (2Gy) +Ara C +Cy +Flu ,对所有受鼠均未进行GVHD防治。所有受鼠在第 0天经尾静脉注射C5 7BL 6小鼠混合细胞悬液 (2× 10 7骨髓细胞 +1×10 7脾细胞 ) ,然后观察其造血恢复、植入及移植物抗宿主病 (GVHD)的情况。结果表明 :A组植入结果始终为完全供者型嵌合体 ,B和C组则为混合型或完全供者型嵌合体 ,其中B组混合嵌合体保持在 80 %以下 ,且在移植 5 0天以后有下降趋势 ,而C组嵌合体水平保持在 80 %以上 ,其嵌合接近或为完全供者型 ,移植 5 0天以后仍保持稳定。由于没有给予GVHD防治措施 ,各组均发生不同程度的GVHD ,其中A组受鼠GVHD的发生率和死亡率明显高于B和C两组 (P≤ 0 .0 1) ,但B和C两组之间无显著差异。结论 :以氟达拉宾为主的非清髓预处理方案 ,能够在受者体内形成稳定且持久的植入 ,并通过在受者体内形成混合性嵌合体 ,诱导供体对受体的特异免疫耐受 ,减少或避免GVHD的发生。 展开更多
关键词 非清髓同种异基因造血干细胞移植 h-2半相合小鼠 动物模型 移植物抗宿主病
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应用ELISPOT方法筛选确定HIV-1 B／C亚型疫苗六种抗原的H-2^d限制的T细胞表位 被引量：2
8
作者 齐香荣 高瑛瑛 +4 位作者 陆柔剑 邓瑶 孟昕 谭文杰 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期34-43,共10页
为了筛选和确定用于检测表达HIV-1 B'/C亚型病毒6种抗原(gp160、gag、polr、evt、at和nef)的艾滋病疫苗免疫小鼠后H-2d限制的特异性T细胞表位,本研究使用表达上述6种抗原的复制型DNA疫苗和非复制型重组痘苗病毒疫苗联合免疫BALB/c小... 为了筛选和确定用于检测表达HIV-1 B'/C亚型病毒6种抗原(gp160、gag、polr、evt、at和nef)的艾滋病疫苗免疫小鼠后H-2d限制的特异性T细胞表位,本研究使用表达上述6种抗原的复制型DNA疫苗和非复制型重组痘苗病毒疫苗联合免疫BALB/c小鼠,通过矩阵设计将HIV-1 B(C)亚型6种相应抗原全序列肽库分别混合成肽池,使用肽池对免疫小鼠进行IFN-γELISPOT检测,根据检测结果确定肽库中特异反应的优势表位肽。结果显示:筛选到七条针对Gag的特异表位肽,其中有5条与文献报道相同,另2条为新表位肽;筛选到3条针对Pol蛋白特异表位肽,其中一条为新表位肽;筛选到2条针对gp160特异表位肽,其中一条为新表位肽;在Nef肽库中筛选到一条新的表位肽;从Tat肽库中筛选到3条表位肽,这三条肽在肽库中是连续的序列,都包含(或部分包含)网上公布的表位序列;在Rev肽库中没有筛选到能够产生阳性反应的特异性表位肽。本研究使用IFN-γELISPOT方法筛选和确定了可用于检测表达HIV-1 B'/C亚型病毒6种抗原(gp160、gag、pol、revt、at和nef)的艾滋病疫苗免疫小鼠后H-2d限制的特异性T细胞表位。 展开更多
关键词 HIV-1 B/C亚型 IFN-Γ ELISPOT T细胞表位 h-2^d限制
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芪蛎消瘿汤对NOD.H-2h4小鼠甲状腺CD4＋T细胞亚群影响的实验研究 被引量：10
9
作者 杨潇 高天舒 +2 位作者 周喜玉 徐佳 曲金桥 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2014年第6期149-153,共5页
目的:从CD4+T细胞亚群角度,探讨芪蛎消瘿汤治疗自身免疫甲状腺炎(AIT)的作用机制。方法:60只SPF级NOD.H-2h4小鼠,随机分成以下4组:正常(NC)组、模型(MC)组、常规剂量芪蛎消瘿汤组(ZY1,20.8 g·kg-1)、和3倍剂量芪蛎消瘿汤组(ZY3,62.... 目的:从CD4+T细胞亚群角度,探讨芪蛎消瘿汤治疗自身免疫甲状腺炎(AIT)的作用机制。方法:60只SPF级NOD.H-2h4小鼠,随机分成以下4组:正常(NC)组、模型(MC)组、常规剂量芪蛎消瘿汤组(ZY1,20.8 g·kg-1)、和3倍剂量芪蛎消瘿汤组(ZY3,62.4 g·kg-1),正常组饲以双蒸水,其余各组自由饮用含0.05%碘化钠水8周,8周后自发形成AIT动物模型,再给处理因素8周后处死小鼠,留取各组NOD.H-2h4小鼠血清、甲状腺。放免法(RIA法)测小鼠血清总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4),固相化学发光酶免疫法(IRMA法)测定小鼠血清促甲状腺激素(TSH);光镜下观察甲状腺细胞形态;免疫组化法测定小鼠甲状腺γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素-4(IL-4)蛋白表达;RT-PCR法检测小鼠甲状腺INF-γ,IL-4mRNA表达;Western blot法测定小鼠甲状腺组织叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)蛋白表达。结果:各组间血清TT3,TT4及TSH值比较无明显差异。HE染色显示MC组甲状腺组织淋巴细胞浸润,MC组AIT的发生率明显高于NC组(P<0.01)。MC组INF-γ,IL-4 mRNA及蛋白表达较NC组显著下降(P<0.01);与MC组比较,ZY1,ZY3组INF-γ,IL-4的蛋白表达升高(分别P<0.01,P<0.05);且ZY1组,ZY3组INF-γ,IL-4mRNA表达显著升高(P<0.01)。MC组甲状腺组织Foxp3的蛋白表达量较NC组明显下降(P<0.01);ZY1,ZY3组Foxp3表达较MC组明显升高(P<0.01)。结论:芪蛎消瘿汤治疗AIT的机制可能与上调INF-γ,IL-4,Foxp3的表达,影响NOD.H-2h4小鼠Th1,Th2,Treg细胞亚群水平相关。 展开更多
关键词 芪蛎消瘿汤 NOD h-2h4小鼠 自身免疫甲状腺炎 Γ-干扰素 白细胞介素-4 叉头翼状螺旋转录因子
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富碘中药复方与碘过量对碘缺乏NOD.H-2^(h4)小鼠甲状腺Th17细胞分化影响的比较 被引量：5
10
作者 周喜玉 高天舒 +3 位作者 杨潇 崔鹏 曲金桥 徐佳 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1520-1524,共5页
目的比较富碘中药复方与碘过量对碘缺乏NOD.H-2h4小鼠甲状腺IL-23/IL-17炎症轴的影响。方法选雌性8周龄NOD.H-2h4小鼠,给低碘饲料,饮双蒸水,喂养90天后制成自身免疫甲状腺炎易感碘缺乏甲状腺肿模型,后随机分成4组:正常对照组(NC)、模型... 目的比较富碘中药复方与碘过量对碘缺乏NOD.H-2h4小鼠甲状腺IL-23/IL-17炎症轴的影响。方法选雌性8周龄NOD.H-2h4小鼠,给低碘饲料,饮双蒸水,喂养90天后制成自身免疫甲状腺炎易感碘缺乏甲状腺肿模型,后随机分成4组:正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、富碘中药复方组[(HIE),海藻15g,昆布15g,海带7.5g,碘含量1900.36μg/L]和碘过量组[(IE)含碘1900μg/L的去离子水,用碘酸钾配制]。再给处理因素90 d后处死小鼠。放射免疫分析法(RIA法)测小鼠血清总T3(TT3)、总T4(TT4)。IRMA法测定小鼠血清促甲状腺激素(TSH)。光镜下观察甲状腺滤泡形态。用免疫组化方法测定甲状腺间质细胞CD68及IL-17的表达。实时定量(RT-PCR)法检测NOD小鼠甲状腺IL-17mRNA和IL-23mRNA表达。Western blot蛋白印迹杂交法测定小鼠甲状腺IL-17和IL-23的蛋白表达。结果给处理因素90 d后,各组间血清TT3﹑TT4及TSH值比较均无明显差异(P﹥0.05)。NC,MC,IE及HIE组小鼠自身免疫甲状腺炎的发生率分别为:2/10,0/10,9/10,3/10。与IE组相比,HIE组的甲状腺间质细胞CD68的表达水平(整合光密度0.28±0.07 vs 0.13±0.06)明显降低(P﹤0.01);HIE组小鼠甲状腺组织中IL-17的表达水平(整合光密度0.21±0.07vs 0.19±0.05)明显降低(P﹤0.01)。HIE组IL-17mRNA及IL-23mRNA平均相对表达量(1.31±0.06;1.43±0.50),明显低于IE组(2.39±0.05;2.21±0.70),P均<0.05。HIE组的IL-17及IL-23的蛋白表达量(0.73±0.02;0.27±0.02),明显低于IE组(0.80±0.03;0.36±0.03),P均﹤0.05。结论与单纯碘过量相比,富碘中药复方能明显降低碘缺乏NOD.H-2h4小鼠碘致自身免疫甲状腺炎的发生率,其机理可能与富碘中药复方能明显抑制碘补充过程中甲状腺内IL-23、IL-17的高表达有关。 展开更多
关键词 NOD.h-2^h4小鼠 碘过量 自身免疫甲状腺炎 富碘中药复方 TH17细胞
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H-2K^b-BSP融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：5
11
作者 钱丽 钱书兵 钱关祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期30-32,共3页
目的 构建可生物素化Ｈ－２Ｋ～ｂ－ ＢＳＰ融合基因的表达载体。方法 采用 ＰＣＲ技术，从 ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（＋） Ｋ～ｂ中扩增出Ｈ－２Ｋ～ｂ基因的胞外区，拼接上依赖 ＢｉｒＡ酶的可生物素化序列后，克隆人ｐＥＴ－４２ｂ... 目的 构建可生物素化Ｈ－２Ｋ～ｂ－ ＢＳＰ融合基因的表达载体。方法 采用 ＰＣＲ技术，从 ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（＋） Ｋ～ｂ中扩增出Ｈ－２Ｋ～ｂ基因的胞外区，拼接上依赖 ＢｉｒＡ酶的可生物素化序列后，克隆人ｐＥＴ－４２ｂ（＋）高效表达载体进行诱导表达。并对表达产物进行纯化与复性。结果 成功地构建了融合表达载体ｐＥＴ－Ｈ－２Ｋ～ｂ－ＢＳＰ，对表达产物进行纯化与复性，并应用仅识别完整构象的抗Ｋ～ｂ分子的单克隆抗体对复性后产物进行了检测。证明表达产物已部分恢复了构象。结论 获得Ｈ－２Ｋ～ｂ－ ＢＳＰ融合蛋白的高效表达，为研究在原核系统中表达、纯化与复性，以及进一步利用亲和素在体外构建ＭＨＣ－Ｉ类分子四聚体，探讨免疫识别机制奠定了基础。 展开更多
关键词 h-2K^b 基因表达 纯化 复性
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H-2D^b四聚体的制备及其在检测LCMV特异性CD8^＋T细胞中的应用 被引量：3
12
作者 刘毅 徐丽慧 +2 位作者 曾学思 孙建方 何贤辉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期278-284,共7页
MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生... MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生物素化酶BirA底物肽(BSP)融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。在LCMV GP_(33-41)抗原肽(KAVYNFATC,KAV)和人β_2-微球蛋白存在时,通过稀释法复性获得H-2D^b/KAV单体。该单体经生物素化并纯化后与PE-链亲和素按4:1的比例混合,即形成四聚体。通过流式细胞术检测经KAV肽免疫的C57BL/6小鼠体内的LCMV特异性CD8^+T细胞的频率.结果表明在外周血、引流淋巴结和脾脏中均可检测到一定频率的LCMV特异性CD8^+T细胞,其中以对外周血标本染色的效果最佳。成功建立了小鼠H-2D^b四聚体制备技术平台,为监测及分析基于H-2D^b基因型小鼠的实验性免疫治疗创造了条件。 展开更多
关键词 h-2D^b MHC四聚体 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒 原核表达
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实验小鼠H-2抗原单克隆抗体的效价研究 被引量：2
13
作者 谭萍萍 谢青莲 +4 位作者 岳作军 翁忠辉 成志恒 白琴华 金玫蕾 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第2期74-76,共3页
目的　研究实验小鼠H - 2抗原单克隆抗体在初建时和经冷冻保存后的效价变化规律 ,为长期保存小鼠H - 2抗原单抗及规模性推广这一遗传监测方法奠定技术基础。方法　制备 6种抗小鼠H 2抗原的单克隆抗体 ,将具备一定抗体效价 (16 0倍以上 ... 目的　研究实验小鼠H - 2抗原单克隆抗体在初建时和经冷冻保存后的效价变化规律 ,为长期保存小鼠H - 2抗原单抗及规模性推广这一遗传监测方法奠定技术基础。方法　制备 6种抗小鼠H 2抗原的单克隆抗体 ,将具备一定抗体效价 (16 0倍以上 )的细胞株保存在 - 196℃的液氮中 ,数月后将复苏后的部分细胞株培养 4 8h后 ,取其上清液用微量细胞毒试验法测定抗体的效价 ,并与其原有效价进行比较。结果　单抗初建时效价达到 16 0倍以上的细胞株占总株数的 37%～ 5 3% ,H 2K抗体复苏后效价持平的细胞株占 13% ,效价下降的为 74 % ,效价上升的是 13% ;H 2D抗体效价持平的细胞株占 5 3% ,下降的为 31% ,上升的是 16 %。复苏后的抗体效价大部分与原效价持平或略有下降 ,个别的会有所提高。结论　单克隆抗体的效价略低于同种单价特异性抗血清 ;能否使冻存后的抗体保持原有的效价是抗体能否大量生产并推广的关键 ;要长期保存和生产H 2抗原单抗 ,应加强克隆和检测工作 ,建立稳定的制备、保存和检测系统 。 展开更多
关键词 实验小鼠 h-2抗原 单克隆抗体 效价 遗传 监测
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去氢骆驼蓬碱及衍生物H-2-104大鼠体内毒代动力学研究 被引量：2
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作者 陈蓓 许少全 +8 位作者 王常州 赵宝玉 柴志高 巴依安·阿合勒别克 朱鹏羽 张莉 赵军 马芹 高惠静 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第21期2178-2183,共6页
目的:利用HPLC建立大鼠血样中去氢骆驼蓬碱(HM)及衍生物9-丁基-1-甲基-N-(2-羟基)乙基-β-咔啉-3-甲酰胺(编号:H-2-104)的检测方法,考察重复给药的毒代动力学特征。方法:将Wistar大鼠随机分成HM低、中、高剂量组和H-2-104低、中、高剂量... 目的:利用HPLC建立大鼠血样中去氢骆驼蓬碱(HM)及衍生物9-丁基-1-甲基-N-(2-羟基)乙基-β-咔啉-3-甲酰胺(编号:H-2-104)的检测方法,考察重复给药的毒代动力学特征。方法:将Wistar大鼠随机分成HM低、中、高剂量组和H-2-104低、中、高剂量组(35,70,140 mg·kg^(-1)),每组8只。开展重复给药毒性实验,对首次给药至给药结束28 d后大鼠体内HM,H-2-104的毒代动力学特征进行研究,计算动力学参数。结果:HM及衍生物H-2-104均能检出,其线性范围均为66.67~500 ng·mL^(-1),出现良好的线性关系。该方法的专属性、准确度、精密度、提取回收率及稳定性均符合生物样本测定要求。研究发现给予HM后,大鼠体内Cmax与AUC0-t分别为(301.78±67.24)ng·mL^(-1)和(234.18±98.35)ng·mL^(-1)·h(低浓度),(478.65±99.74)ng·mL^(-1)和(710.03±208.93)ng·mL^(-1)·h(中浓度),(721.51±107.52)ng·mL^(-1)和(819.61±310.54)ng·mL^(-1)·h(高浓度);给予H-2-104后,大鼠体内Cmax与AUC0-t分别为(234.84±102.03)和(198.67±38.88)ng·mL^(-1)·h(低浓度),(298.73±87.52)ng·mL^(-1)和(676.55±210.83)ng·mL^(-1)·h(中浓度),(411.81±123.71)ng·mL^(-1)和(1004.86±426.05)ng·mL^(-1)·h(高浓度);给药后2个化合物的Tmax较快,并在4 h内消除。结论:HM及衍生物H-2-104各剂量组首、末次Cmax和AUC0-t均与剂量不成比例地增加,与剂量呈正相关性,呈非线性动力学特征。该研究所得结论初步阐明了HM及衍生物H-2-104在大鼠体内毒代动力学的行为,实验结果为其后续研究提供支持和参考。 展开更多
关键词 去氢骆驼蓬碱 衍生物h-2-104 HPLC法 毒代动力学 重复给药
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MicroRNA-146参与碘诱导NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎 被引量：6
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作者 赵娜 赵姝洁 李玉姝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1159-1162,共4页
目的:观察自身免疫性甲状腺炎(AIT)NOD.H-2h4小鼠microRNA-146(miR-146)的表达水平。方法:选取4周龄NOD.H-2h4雌性小鼠随机分为正常饮水(无菌双蒸水)组和高碘饮水(0.05%碘化钠水)组。甲状腺HE染色观察淋巴细胞浸润情况;获取CD4^+ T细胞... 目的:观察自身免疫性甲状腺炎(AIT)NOD.H-2h4小鼠microRNA-146(miR-146)的表达水平。方法:选取4周龄NOD.H-2h4雌性小鼠随机分为正常饮水(无菌双蒸水)组和高碘饮水(0.05%碘化钠水)组。甲状腺HE染色观察淋巴细胞浸润情况;获取CD4^+ T细胞及甲状腺组织small RNAs,RT-PCR检测miR-146表达水平;检测心、肝和肾中miR-146的表达水平。结果:高碘饮水组NOD.H-2h4小鼠甲状腺组织有不同程度的淋巴细胞浸润,甲状腺炎的发生率均高于对照组。与对照组相比,高碘饮水组小鼠脾脏CD4^+ T细胞和甲状腺中miR-146水平显著升高。高碘饮水组小鼠与对照组相比,心、肝和肾中miR-146的水平没有明显差别。结论:在NOD.H-2h4小鼠AIT模型中,甲状腺和脾脏CD4^+ T miR-146水平升高,可能参与自身免疫性甲状腺炎的发生和发展。 展开更多
关键词 自身免疫性甲状腺炎 miR-146 CD4^+T细胞 NOD.h-2h4小鼠
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近交系小鼠H-2基因与接种乙型肝炎疫苗后无(弱)应答的相关性分析 被引量：1
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作者 马丽颖 钟熙 +3 位作者 梁争论 岳秉飞 贺争鸣 刘双环 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第7期678-684,共7页
目的分析近交系小鼠H-2基因与接种乙型肝炎疫苗后无(弱)应答的相关性,建立免疫无应答小鼠动物模型,从基因水平和细胞因子水平研究免疫无应答的遗传机制,为乙肝疫苗的研制及人类免疫无应答的研究提供理论依据。方法采用微量细胞毒法检测... 目的分析近交系小鼠H-2基因与接种乙型肝炎疫苗后无(弱)应答的相关性,建立免疫无应答小鼠动物模型,从基因水平和细胞因子水平研究免疫无应答的遗传机制,为乙肝疫苗的研制及人类免疫无应答的研究提供理论依据。方法采用微量细胞毒法检测不同近交系小鼠(DBA/1、BALB/c、NIH、SJL、C57BL/6、C57BL/10)的H-2单倍型;PCR法检测小鼠的H-2A和H-2E基因。用3种重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母、汉逊酵母、CHO细胞)和治疗性乙型肝炎疫苗(乙克)分别免疫6种不同品系近交系小鼠,采用ELISA法检测抗体水平,流式细胞术检测小鼠CD4^+、CD8^+、CD19^+T细胞和Treg细胞免疫前后的变化。结果不同近交系小鼠有不同的H-2单倍型。除封闭群小鼠NIH外,近交系小鼠SJL在A基因区内有两条200和500 bp的区带,其余均为1条区带;不同品系小鼠在H-2E基因区段均无异常表现。C57BL/10小鼠对乙肝疫苗表现为免疫无(弱)应答。结论 C57BL/10小鼠可作为免疫无应答实验动物模型,进行乙肝疫苗免疫无(弱)应答的相关性研究。建议在进行疫苗效力检测时先检测所用小鼠的H-2基因型,根据小鼠H-2基因的单倍型与免疫反应的相关性筛选实验用小鼠。 展开更多
关键词 近交系小鼠 乙型肝炎疫苗 免疫无应答 h-2基因
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Fcgr2b基因及H-2复合体对SLE模型小鼠IgG抗体产生的调节作用 被引量：1
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作者 米小轶 李柏林 +3 位作者 王妍 姜奕 宋继谒 广濑幸子 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期567-570,共4页
目的:分析Fcgr2b基因对SLE小鼠血清总IgG抗体产生的影响;Fcgr2b基因单独及Fcgr2b基因与H-2复合体共同作用对SLE小鼠血清IgG抗DNA抗体产生的调控。方法:建立(NZB×NZW)F1×NZW回交小鼠模型,用特异性荧光抗体染色,流式细胞术检测... 目的:分析Fcgr2b基因对SLE小鼠血清总IgG抗体产生的影响;Fcgr2b基因单独及Fcgr2b基因与H-2复合体共同作用对SLE小鼠血清IgG抗DNA抗体产生的调控。方法:建立(NZB×NZW)F1×NZW回交小鼠模型,用特异性荧光抗体染色,流式细胞术检测及PCR技术进行基因分型,以ELISA法测定血清总IgG及抗DNA抗体水平进行分析比较。采用扩增片段长度多态性(AmpFLP)分析NZB,NZW小鼠Fcgr2b基因启动子区是否有多态性。结果:(NZB×NZW)F1×NZW回交小鼠Fc-gr2b基因B/W型组血清总IgG水平明显高于W/W型组(P<0.0001)。Fcgr2b基因独作用时,回交小鼠Fcgr2b基因B/W型组与W/W型组间血清IgG抗DNA抗体水平差异不显著(P>0.05)。Fcgr2b基因与H-2复合体共同作用时,H-2复合体为d/z型时,无论Fcgr2b基因是B/W型或W/W型,其血清IgG抗DNA抗体水平明显高于含H-2复合体Z/Z型组(P<0.01);H-2复合体为d/z型时,含Fcgr2b基因B/W型组血清IgG抗DNA抗体水平明显高于W/W型组(P<0.01)。NZB小鼠Fcgr2b基因启动子区扩增片段长度短于非自身免疫病小鼠NZW,C57BL/6及BALB/c小鼠,提示可能存在碱基缺失。结论:血清总IgG水平由Fcgr2b基因调控;IgG抗DNA抗体产生主要由H-2复合体调控,Fcgr2b基因单独作用对该抗体产生的影响不明显,但与H-2复合体具有协同作用。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 IGG抗体 Fegr2b基因 h-2复合体
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小鼠肝素酶H-2Kb限制性CTL表位的实验鉴定 被引量：2
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作者 汤旭东 万瑛 +6 位作者 房殿春 陈陵 熊震 余松涛 师红磊 郭军 杨仕明 《实用临床医药杂志》 CAS 2008年第1期5-11,共7页
目的实验鉴定H-2Kb限制性小鼠肝素酶(mHpa)CTL表位。方法5条mHpa表位分别负载C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞,并进一步诱导产生表位特异性的效应细胞,采用标准4 h51Cr释放试验检测效应细胞对不同靶细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT检测... 目的实验鉴定H-2Kb限制性小鼠肝素酶(mHpa)CTL表位。方法5条mHpa表位分别负载C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞,并进一步诱导产生表位特异性的效应细胞,采用标准4 h51Cr释放试验检测效应细胞对不同靶细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果5条mHpa CTL表位中,仅mHpa398-405和mHpa519-526可以诱导小鼠产生特异性CTL,对同来源的B16黑色素瘤细胞、Lewis肺癌细胞和EL-4淋巴瘤细胞具有明显的免疫杀伤效应,而对H-2Kb阴性的P815肥大细胞瘤细胞不具有免疫杀伤效应,进一步研究发现,上述多肽特异性CTL对自体淋巴细胞和DC细胞不具有杀伤效应,另一方面,mHpa398-405和mHpa519-526还可促进效应细胞分泌IFN-γ的能力。结论mH-pa398-405、mHpa519-526为小鼠肝素酶来源且受H-2Kb限制性CTL表位,小鼠体内可以诱导产生表位特异性的CTL反应。 展开更多
关键词 肝素酶 h-2Kb限制性 抗原表位 肿瘤疫苗 细胞毒T淋巴细胞
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615小鼠H-2K^k基因cDNA的克隆及序列测定和分析 被引量：1
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作者 李龙江 龚浩 +3 位作者 陈俊杰 王若菡 温玉明 王昌美 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期313-315,共3页
目的 :克隆 6 15小鼠主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ分子抗原识别基因H_2Kk 并测序分析 ,为转基因治疗提供目的基因。方法 :采用RT_PCR法从 6 15小鼠肝组织总RNA中获得 1 4kb的H_2Kk 基因cDNA ,将其定向连接至PGEM3Zf(+)载体 ,转化E coli... 目的 :克隆 6 15小鼠主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ分子抗原识别基因H_2Kk 并测序分析 ,为转基因治疗提供目的基因。方法 :采用RT_PCR法从 6 15小鼠肝组织总RNA中获得 1 4kb的H_2Kk 基因cDNA ,将其定向连接至PGEM3Zf(+)载体 ,转化E coliJM10 9,限制性内切酶筛选出阳性克隆PGEM3Zf(+)_H_2KkcDNA ,末端终止法完成H_2KkcDNA的全序列测定。结果 :测得的H_2KkcDNA序列与文献报道序列同源性高达 99% ,编码MHCⅠ分子抗原识别部位的氨基酸残基的核苷酸序列完全相同。结论 :成功克隆了 6 15小鼠MHCⅠ分子抗原识别基因 。 展开更多
关键词 h-2K^k基因 序列测定 主要组织相容性复合体 克隆 小鼠 转基因治疗 肿瘤
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微波辐射合成2-苯基-1H,1'H-2',5-双苯并咪唑 被引量：3
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作者 马柏林 高娟丽 +1 位作者 闫宣凯 杨鹏飞 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期135-138,共4页
采用微波辅助,以3,4-二氨基苯甲酸和苯甲醛为原料,合成了2-苯基-1H,1'H-2',5-双苯并咪唑。探讨了物料比、微波输出功率、微波辐射时间和催化剂PPA与HCl比例对反应产率的影响。结果表明,第1步较佳反应条件为3,4-二氨基苯甲酸︰... 采用微波辅助,以3,4-二氨基苯甲酸和苯甲醛为原料,合成了2-苯基-1H,1'H-2',5-双苯并咪唑。探讨了物料比、微波输出功率、微波辐射时间和催化剂PPA与HCl比例对反应产率的影响。结果表明,第1步较佳反应条件为3,4-二氨基苯甲酸︰苯甲醛=1.0︰1.2,微波输出功率320W,间歇辐射30min;第2步较佳反应条件为5-(2-苯基-1H-苯并咪唑)甲酸︰邻苯二胺=1.0︰1.1,PPA/HCl=1︰1,微波输出功率500W,间歇辐射15min。该方法具有原料消耗少、操作简单、反应条件温和、易纯化、对环境无污染、产率高的优点。 展开更多
关键词 2-苯基-1H 1'h-2' 5-双苯并咪唑 微波 合成
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