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生殖支原体GroEL蛋白的生物信息学分析、表达纯化及致炎分析
1
作者 陈丽 苏晓玲 +5 位作者 罗浩荡 王婧芸 廖道庸 甘甜 于建威 何军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4084-4097,共14页
为了解生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)GroEL蛋白的致病机制,本研究运用生物信息学软件对MgGroEL蛋白结构和功能进行预测和分析,构建pET-28a-GroEL重组质粒,使用0.2 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过Ni-亚氨基二乙酸(iminodicitic ac... 为了解生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)GroEL蛋白的致病机制,本研究运用生物信息学软件对MgGroEL蛋白结构和功能进行预测和分析,构建pET-28a-GroEL重组质粒,使用0.2 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过Ni-亚氨基二乙酸(iminodicitic acid,IDA)柱亲和纯化获得Mg rGroEL蛋白。将浓度为2μg/mL的Mg rGroEL蛋白作用于人单核细胞白血病THP-1细胞,通过ELISA检测细胞上清液中炎症因子IL-1β和TNF-α的含量,使用全自动化学发光仪检测细胞上清液中炎症因子IL-6的含量,通过细胞免疫荧光和Western blotting观察NF-κB信号通路激活情况。结果表明,Mg GroEL蛋白是含有543个氨基酸的酸性带负电荷蛋白,相对分子质量为58.44 kDa,等电点为5.68,分子式为C_(2568)H_(4300)N_(700)O_(825)S_(8),为稳定的亲水性蛋白;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主;MgGroEL蛋白存在12个B细胞优势抗原表位和10个T细胞优势抗原表位。与肺炎支原体、无乳支原体、关节炎支原体、猪肺炎支原体和牛支原体的GroEL蛋白高度同源;Mg rGroEL蛋白能激活THP-1细胞NF-κB信号通路并促进IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌。这些结果表明Mg GroEL具有较好的抗原性,能诱导宿主细胞发生炎症反应,本研究为进一步研究GroEL蛋白在Mg中的功能及其致病机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 生殖支原体 groel蛋白 原核表达 生物信息学 炎症
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基于groEL基因检测云南家鼠鼠疫疫源地鼠类动物感染米库尔新埃立克体情况 被引量：1
2
作者 韦蓉 李紫薇 +5 位作者 罗云燕 汪娜 刘淑清 李进春 卢江丽 尹家祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期689-695,共7页
目的调查云南家鼠鼠疫疫源地鼠类动物感染米库尔新埃立克体情况。方法以云南省梁河县、芒市和弥勒市鼠疫疫源地为采样点,使用夹夜法捕捉鼠类动物,并收集脾脏样本。采用巢式PCR技术检测脾脏样本中米库尔新埃立克体特异性groEL基因,并对... 目的调查云南家鼠鼠疫疫源地鼠类动物感染米库尔新埃立克体情况。方法以云南省梁河县、芒市和弥勒市鼠疫疫源地为采样点,使用夹夜法捕捉鼠类动物,并收集脾脏样本。采用巢式PCR技术检测脾脏样本中米库尔新埃立克体特异性groEL基因,并对阳性产物进行Sanger双向序列测定。应用χ2检验或Fisher确切概率法分析不同疫源地、生境、鼠种、性别间鼠类动物感染米库尔新埃立克体的情况。结果检测656份鼠类动物样本,在黄胸鼠、斯氏家鼠、北社鼠和青毛巨鼠上检出米库尔新埃立克体阳性12份,阳性率为1.83%。不同疫源地、生境、鼠种、性别间鼠类动物感染米库尔新埃立克体的阳性率均无统计学差异(P>0.05)。基于groEL基因的遗传进化分析,12份阳性样本核酸序列内部的同源性在99.5%~100%,米库尔新埃立克体核酸序列处于同一分支,为ClusterⅣ型。结论云南家鼠鼠疫疫源地4种鼠类动物存在米库尔新埃立克体低度感染。 展开更多
关键词 米库尔新埃立克体 groel基因 阳性率 鼠类 家鼠鼠疫疫源地
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结核分枝杆菌GroEL1蛋白表达、纯化及结构和功能的生物信息学分析
3
作者 魏婧 郭方正 +3 位作者 宋亚敏 李柏青 许涛 汪洪涛 《包头医学院学报》 CAS 2024年第7期23-31,52,共10页
目的:应用基因工程技术和生物信息学方法对结核分枝杆菌GroEL1进行原核表达与纯化及其结构和功能预测,分析该抗原在新型结核疫苗的应用价值。方法:采用PCR技术体外扩增GroEL1基因,并克隆至pET28a质粒中,测序筛选构建成功的pET28a-GroEL... 目的:应用基因工程技术和生物信息学方法对结核分枝杆菌GroEL1进行原核表达与纯化及其结构和功能预测,分析该抗原在新型结核疫苗的应用价值。方法:采用PCR技术体外扩增GroEL1基因,并克隆至pET28a质粒中,测序筛选构建成功的pET28a-GroEL1载体,将其载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株中,IPTG诱导表达重组GroEL1蛋白,利用镍亲和层析柱纯化。从UniProt数据库中获取H37Ra株GroEL1核苷酸和氨基酸序列;分别运用Protparam、TMHMM-2.0、Protscale、NetChop-3.1、Psortb、SignalP-4.1工具预测GroEL1蛋白的理化性质、跨膜螺旋、亲/疏水性、磷酸化位点、亚细胞定位,信号肽;NetNGlyc-1.0和YinOYang-1.2预测其糖基化位点;SOPMA和Swissmodel预测蛋白的二级结构和三级结构;Clustalw对同源序列进行比对。String预测相互作用蛋白,IEBD和ABCpred预测蛋白的B细胞抗原表位。结果:成功构建重组pET28a-GroEL1载体,GroEL1蛋白在大肠杆菌中部分以可溶形式表达。镍亲和层析柱纯化重组GroEL1蛋白,其纯度达90%以上。Western blot鉴定证实重组GroEL1蛋白具有良好的免疫反应性。结核分枝杆菌H37Ra株GroEL1基因全长1620 bp,编码539个氨基酸,分子量55.88 kD,等电点为4.98,预测显示该蛋白亲水性较强、性质稳定,无跨膜区,有37个可能的磷酸化修饰位点和8个O-糖基化位点,属于非分泌蛋白,定位在细胞质,二级结构显示α-螺旋占53.43%,延伸链占11.87%,β-转角占7.61%,无规则卷曲占27.09%,有多个B细胞抗原表位及多个与GroEL1蛋白相互作用蛋白。结论:成功表达并纯化重组GroEL1蛋白,运用生物信息学成功预测GroEL1蛋白的结构和功能,为结核病的预防、诊断和治疗奠定基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 groel1 原核表达 纯化 生物信息学分析
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乳鼠志贺杆菌分泌蛋白GroEL多克隆抗体的制备与鉴定
4
作者 刘梦琦 贾雪娇 +4 位作者 刘洋 刘长城 李小凤 胡屹硕 赵微 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期137-143,共7页
目的制备志贺杆菌分泌蛋白GroEL多克隆抗体,为探究乳鼠志贺杆菌上清蛋白GroEL在乳鼠肠道内的功能奠定基础。方法利用分子克隆技术构建原核表达蛋白质粒Pet28a(+)-GroEL,转化Escherichia coil BL21(DE3)后采用不同浓度IPTG诱导表达,优化... 目的制备志贺杆菌分泌蛋白GroEL多克隆抗体,为探究乳鼠志贺杆菌上清蛋白GroEL在乳鼠肠道内的功能奠定基础。方法利用分子克隆技术构建原核表达蛋白质粒Pet28a(+)-GroEL,转化Escherichia coil BL21(DE3)后采用不同浓度IPTG诱导表达,优化诱导时间和温度,确定最佳蛋白表达条件;利用His标签亲和层析法纯化GroEL蛋白。将纯化蛋白与佐剂按照等比例充分混合后免疫C57BL/6小鼠,制备多克隆抗体血清,采用ELISA检测血清抗体的效价、灵敏度及特异性。构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-GroEL并转染293T细胞,48 h后采用制备的GroEL多克隆抗体进行Western blot验证。结果Pet28a(+)-GroEL转化E.coil BL21(DE3)菌在28℃、0.4 mmol/L IPTG诱导12h获得最佳蛋白表达,表达的重组蛋白分子质量约为63 ku,纯化后的蛋白浓度为0.735 mg/mL。Western blot检测显示该蛋白能被抗His标签鼠单克隆抗体识别。ELISA检测显示制备的抗GroEL多克隆抗体血清效价为1∶128000;Western blot检测显示该抗体可识别GroEL蛋白。结论重组表达的GroEL蛋白具有抗原性,制备的鼠抗GroEL多克隆抗体血清具有特异性且效价高,为研究乳鼠志贺杆菌GroEL蛋白与肠道病毒之间的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 志贺菌 groel蛋白 蛋白纯化 多克隆抗体制备 轮状病毒
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钩端螺旋体groEL基因原核表达及其产物免疫保护作用 被引量：5
5
作者 李小余 王银环 +1 位作者 严杰 程东庆 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期164-170,共7页
目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株groEL基因原核重组表达系统,了解重组表达的GroEL蛋白(rGroEL)对金地鼠的免疫保护作用。方法:采用高保真PCR扩增问号钩体赖株groEL基因并测序,常规方法构建groEL基因原核表达系统... 目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株groEL基因原核重组表达系统,了解重组表达的GroEL蛋白(rGroEL)对金地鼠的免疫保护作用。方法:采用高保真PCR扩增问号钩体赖株groEL基因并测序,常规方法构建groEL基因原核表达系统。采用SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检查rGroEL表达情况及其可溶性,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL。观察rGroEL免疫金地鼠对问号钩体赖株感染的保护率。采用MAT法检测免疫动物血清与我国流行问号钩体血清群交叉凝集效价。结果:所克隆的groEL基因核苷酸和氨基酸序列与GenBank中相应基因完全相同。所构建的groEL基因原核表达系统能表达可溶性rGroEL。100和200μgrGroEL对金地鼠的免疫保护率分别为50.0%和75.0%。rGroEL免疫金地鼠血清可不同程度地凝集各问号钩体血清群。结论:GroEL蛋白是问号钩体属特异性保护性抗原,可用于制备通用性钩体基因工程疫苗。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 groel蛋白质 遗传学 重组 遗传 基因表达 序列分析 DNA 免疫法 被动 groel基因 原核表达 免疫保护
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山羊无浆体16S rRNA、MSP4和GroEL(HSP60)基因的克隆测序及分析 被引量：6
6
作者 周作勇 王芝英 +2 位作者 胡世君 彭开政 聂奎 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期415-421,共7页
对疑似感染山羊的无浆体16SrRNA基因、主要表面蛋白4(MSP4)和编码HSP60的GroEL基因进行克隆测序及系统发育分析。发现所克隆的无浆体16SrRNA、MSP4和GroEL基因序列长度分别为1 464、870、977bp,GenBank登录号分别为JX898992、JX898990和... 对疑似感染山羊的无浆体16SrRNA基因、主要表面蛋白4(MSP4)和编码HSP60的GroEL基因进行克隆测序及系统发育分析。发现所克隆的无浆体16SrRNA、MSP4和GroEL基因序列长度分别为1 464、870、977bp,GenBank登录号分别为JX898992、JX898990和JX898991。所获得的无浆体16SrRNA序列及GroEL序列与公布的羊无浆体南非OVI株(16SrRNA:AF414870;GroEL:AF441131)同源性最高,分别为98.8%和99.8%,而MSP4序列与重庆忠县羊无浆体ZX17株(HQ840746)同源性最高,达100%。系统发育分析显示,本试验获得的无浆体16SrRNA、MSP4和GroEL基因序列均被聚类到羊无浆体群。本试验首次同时克隆分析了山羊无浆体16S rRNA、MSP4和GroEL基因序列,从分子水平证实羊无浆体在重庆存在,建议在进行无浆体种类鉴定时,最好同时选择2个或2个以上物种鉴定基因进行克隆分析,以确保研究结果更可靠。 展开更多
关键词 山羊无浆体 16S RRNA MSP4 groel 序列分析
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烟草转GroEL基因抗双生病毒的研究 被引量：5
7
作者 吴丹 张保龙 +2 位作者 倪万潮 王荣富 张云华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期260-264,共5页
双生病毒是全球性的重要植物病毒,为提高植物对此病毒的抗性,分离了烟粉虱体内GroEL基因,将其连接到棉花韧皮部特异启动子PGHNBS下游,构建到植物表达载体PBI121上,采用农杆菌介导法转化烟草,获得抗性苗。对抗性植株进行PCR、RT-PCR和病... 双生病毒是全球性的重要植物病毒,为提高植物对此病毒的抗性,分离了烟粉虱体内GroEL基因,将其连接到棉花韧皮部特异启动子PGHNBS下游,构建到植物表达载体PBI121上,采用农杆菌介导法转化烟草,获得抗性苗。对抗性植株进行PCR、RT-PCR和病毒侵染检测,结果表明:GroEL基因已经整合到烟草基因组中,并且在转录水平上表达。病毒侵染检测结果显示转基因烟草植株中没有检测到病毒,证明韧皮部特异表达GroEL基因抗双生病毒是可行的。 展开更多
关键词 烟粉虱 双生病毒 groel基因 烟草 转化
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基于GroEL基因的实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立及评价 被引量：4
8
作者 谈忠鸣 李志峰 +6 位作者 吴斌 胡建利 祁贤 顾玲 鲍倡俊 汤奋扬 朱叶飞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1121-1124,共4页
目的建立一种敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,用于检测临床标本中的恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体GroEL蛋白基因序列设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法。并从灵敏度、特异度、重复性及临床标本的检测能力等方面对本... 目的建立一种敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,用于检测临床标本中的恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体GroEL蛋白基因序列设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法。并从灵敏度、特异度、重复性及临床标本的检测能力等方面对本方法进行综合评价。结果建立的实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性,可检测出恙虫病东方体Gilliam、Karp、Kato和Kawasaki株。建立的标准曲线循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈现良好的线性关系(r=0.99),灵敏度分析显示样品最低检出浓度为21.8拷贝/μL。批内及批间重复性实验变异系数均小于1.5%,显示本方法具有良好的重复性。对本实验室保存的82份临床标本进行检测,并与常规巢式PCR方法比较,本方法检测出26份阳性标本中的25份,检出率为96.15%。结论本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有较高的敏感性、特异性和稳定性,可用于临床病人及暴发疫情的实验室快速检测。 展开更多
关键词 恙虫病东方体 荧光定量PCR groel蛋白基因 临床标本
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迟缓爱德华菌分子伴侣蛋白GroEL原核表达及免疫特性 被引量：3
9
作者 张志强 葛成 +6 位作者 杜万年 于秀剑 康元环 单晓枫 潘晓艺 史秋梅 刘莉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2161-2165,2172,共6页
GroEL是细菌内分子伴侣蛋白,参与细菌多种生命活动,在布鲁菌、链球菌研究中,GroEL蛋白展示了良好的疫苗潜力。前期利用迟缓爱德华菌抗体Pull-down技术筛选到GroEL蛋白,揭示了该蛋白的潜在应用价值,本试验以迟缓爱德华菌GroEL蛋白作为研... GroEL是细菌内分子伴侣蛋白,参与细菌多种生命活动,在布鲁菌、链球菌研究中,GroEL蛋白展示了良好的疫苗潜力。前期利用迟缓爱德华菌抗体Pull-down技术筛选到GroEL蛋白,揭示了该蛋白的潜在应用价值,本试验以迟缓爱德华菌GroEL蛋白作为研究对象,利用大肠杆菌表达系统表达纯化GroEL重组蛋白(rGroEL),进一步通过动物模型评估rGroEL的免疫效果。结果显示,rGroEL能够激发小鼠产生高水平的特异性抗体,具有较好的免疫原性,免疫小鼠对迟缓爱德华菌感染具有较好的抵抗力,相对保护率达95%。斑马鱼感染试验结果表明,rGroEL免疫对迟缓爱德华菌感染具有一定保护效果,保护率为60%。用rGroEL免疫斑马鱼可以产生针对嗜水气单胞菌的免疫保护力,保护率可达45%。本试验初步探索了迟缓爱德华菌重组蛋白rGroEL的免疫特性,为研制迟缓爱德华菌亚单位疫苗和核酸疫苗提供了依据。 展开更多
关键词 迟缓爱德华菌 groel 免疫保护力
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烟粉虱内共生菌groEL基因的原核表达条件研究 被引量：2
10
作者 谭周进 谢丙炎 +2 位作者 肖启明 杨宇红 冯兰香 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期57-61,共5页
为了获得较多的GroEL蛋白,深入研究其性质,对烟粉虱内共生菌groEL基因表达的条件进行了研究.结果表明:诱导groEL基因原核表达的最佳IPTG浓度为100μmol/L;在35℃诱导培养,能够获得较高的蛋白表达量;最佳诱导培养时间为4～5h;最佳诱导培... 为了获得较多的GroEL蛋白,深入研究其性质,对烟粉虱内共生菌groEL基因表达的条件进行了研究.结果表明:诱导groEL基因原核表达的最佳IPTG浓度为100μmol/L;在35℃诱导培养,能够获得较高的蛋白表达量;最佳诱导培养时间为4～5h;最佳诱导培养的初始pH值为8.0;在振荡转速为120r/min、诱导培养时间为4～5h时,增大接种量,有利于原核基因的表达;添加少量的NH4+有利于提高groEL基因原核表达的量,但Ca2+、Fe3+、K+、Mg2+则抑制groEL基因的原核表达,其中Fe3+抑制作用最为强烈;NH4+含量过高也不利于groEL基因原核表达;在培养基中添加少量的葡萄糖,能够提高groEL基因原核表达,但葡萄糖含量较高时不利于groEL基因原核表达. 展开更多
关键词 烟粉虱 内共生菌 groel 原核表达 理化因素
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牛型布氏杆菌GroEL的克隆表达及其生物学特性研究 被引量：3
11
作者 韩先干 何随彬 +2 位作者 胡青海 丁铲 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第5期27-31,共5页
根据已发表的牛型布氏杆菌(Brucella abrotus)基因序列设计一对特异性引物,以B.abrotusA19株基因组为模板,通过PCR扩增GroEL基因,经T-A克隆后进行序列测定和分析。结果表明,GroEL基因全长1 641bp,编码546个氨基酸。将GroEL定向克隆至表... 根据已发表的牛型布氏杆菌(Brucella abrotus)基因序列设计一对特异性引物,以B.abrotusA19株基因组为模板,通过PCR扩增GroEL基因,经T-A克隆后进行序列测定和分析。结果表明,GroEL基因全长1 641bp,编码546个氨基酸。将GroEL定向克隆至表达载体pET32a中,构建重组表达质粒pET32a-LGroEL,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得重组表达蛋白His-GroEL,大小为81 kDa。经Western blot检测,牛布氏杆菌阳性血清中有GroEL抗体存在,表明该蛋白具有免疫原性。对重组表达蛋白His-GroEL进行酶促活性检测,结果表明该蛋白在体外具有催化ATP水解的酶活性和促进乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)复性的功能。 展开更多
关键词 布氏杆菌 groel 表达 酶活检测
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新疆绵羊种布鲁氏菌GroEL基因的克隆及序列分析 被引量：3
12
作者 刘辉 陈创夫 +2 位作者 许程剑 王远志 韩亚杰 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第6期683-686,共4页
参考牛种布鲁氏菌的GroEL(热休克蛋白)基因设计引物,扩增出新疆绵羊种布鲁氏菌GroEL基因片段,将其片段克隆到T载体上测序。结果表明:新疆源布鲁氏菌GroEL基因片段长1641bp,编码546个氨基酸,与羊种(B.melitensis)、猪种(B.suis)以及牛种(... 参考牛种布鲁氏菌的GroEL(热休克蛋白)基因设计引物,扩增出新疆绵羊种布鲁氏菌GroEL基因片段,将其片段克隆到T载体上测序。结果表明:新疆源布鲁氏菌GroEL基因片段长1641bp,编码546个氨基酸,与羊种(B.melitensis)、猪种(B.suis)以及牛种(B.abortus)GroEL基因的核苷酸序列同源性分别为99.88%、99.82%、99.88%,推导的氨基酸序列同源性在99%以上,显示了很强的保守性。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 groel基因 克隆 序列分析
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玉米蚜体内参与传毒的共生菌groEL基因的克隆和原核表达 被引量：8
13
作者 林林 吴云锋 崔晓峰 《中国病毒学》 CSCD 2003年第1期54-57,共4页
以玉米蚜杨凌生物型为材料,设计特异性引物采用PCR的方法在国内首先克隆了一种玉米蚜体内参与传毒的共生菌groEL基因,序列测定结果表明:玉米蚜杨凌生物型共生菌groEL基因全长为1647bp.编码548个氨基酸,登录Genebank,序列号为AF387863。... 以玉米蚜杨凌生物型为材料,设计特异性引物采用PCR的方法在国内首先克隆了一种玉米蚜体内参与传毒的共生菌groEL基因,序列测定结果表明:玉米蚜杨凌生物型共生菌groEL基因全长为1647bp.编码548个氨基酸,登录Genebank,序列号为AF387863。构建了该基因的原核表达载体,用pBV221表达出63KDa的非融合目的蛋白,用pET-30a表达出69KDa的融合蛋白,二者均有较高的表达量。 展开更多
关键词 玉米蚜 内共生菌 groel 传毒 表达载体
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灰飞虱体内共生菌Wolbachia的groEL基因克隆及序列分析 被引量：1
14
作者 季英华 史文琦 +4 位作者 程兆榜 周彤 林玲 范永坚 周益军 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期119-123,共5页
利用特异性引物,首次在国内克隆获得灰飞虱(Laodelphax striatellusFalln)体内共生菌Wolbachia的groEL基因全长序列,其开放阅读框为1659bp,可编码552个氨基酸,GenBank登录号为:EF468716,与已发布的韩国分离物核苷酸一致性达99.9%,为... 利用特异性引物,首次在国内克隆获得灰飞虱(Laodelphax striatellusFalln)体内共生菌Wolbachia的groEL基因全长序列,其开放阅读框为1659bp,可编码552个氨基酸,GenBank登录号为:EF468716,与已发布的韩国分离物核苷酸一致性达99.9%,为进一步研究其与灰飞虱传播水稻条纹病毒的关系奠定了基础. 展开更多
关键词 灰飞虱 共生菌 WOLBACHIA 序列分析 groel
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烟粉虱内共生菌传毒相关groEL基因的克隆及其原核表达 被引量：2
15
作者 谭周进 谢丙炎 +2 位作者 肖启明 杨宇红 冯兰香 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期314-318,共5页
烟粉虱内共生菌 groEL基因编码一种 6 3kD的GroEL蛋白 ,利用一对特异性引物 ,通过PCR对长期培养在黄瓜上的烟粉虱体内 groEL基因进行了扩增 ,序列测定表明其长度为 16 6 8bp ,编码 5 5 5个氨基酸 ,与GenBank中烟粉虱内共生菌 groEL(AF13... 烟粉虱内共生菌 groEL基因编码一种 6 3kD的GroEL蛋白 ,利用一对特异性引物 ,通过PCR对长期培养在黄瓜上的烟粉虱体内 groEL基因进行了扩增 ,序列测定表明其长度为 16 6 8bp ,编码 5 5 5个氨基酸 ,与GenBank中烟粉虱内共生菌 groEL(AF130 4 2 1)的核苷酸同源性为 99.5 8%,仅 7个核苷酸发生了变异 ,二者氨基酸序列同源性为 99.2 8%,仅 4个氨基酸有别。构建了一个原核表达载体 ,表达得到了 展开更多
关键词 烟粉虱 内共生细菌 传毒相关基因 groel基因 基因克隆 原核表达 蚜虫
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16S rRNA和recA、groEL基因分类鉴定乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的比较 被引量：1
16
作者 徐海燕 吕嫱 +4 位作者 孙志宏 于洁 张家超 孟和毕力格 张和平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2237-2245,共9页
【目的】比较16S rRNA和recA、groEL基因部分序列用于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种分类鉴定的效果。【方法】对已鉴定的8株分离自传统发酵乳的乳酸乳球菌,选取recA和groEL基因片段,通过PCR扩增、测序,将测序得到的序列比对后构建系统... 【目的】比较16S rRNA和recA、groEL基因部分序列用于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种分类鉴定的效果。【方法】对已鉴定的8株分离自传统发酵乳的乳酸乳球菌,选取recA和groEL基因片段,通过PCR扩增、测序,将测序得到的序列比对后构建系统发育树,并与16S rRNA基因序列分析技术进行比较。【结果】比较分析不同菌株16S rRNA和recA、groEL基因的亲缘关系,recA、groEL基因可以准确地完成乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的区分和鉴定。【结论】recA和groEL基因序列分析可以实现乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的区分,因其具有快速、准确、稳定的特点,可适合于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种间的快速分类鉴定。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌乳酸亚种 乳酸乳球菌乳脂亚种 RECA基因 groel基因 分类鉴定
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抗大肠杆菌分子伴侣GroEL单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：1
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作者 张葵 李永明 +3 位作者 宋朝君 李琦 庄然 金伯泉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期155-157,共3页
目的制备抗大肠杆菌分子伴侣GroEL的单克隆抗体。方法超声裂解制备大肠杆菌DH5α菌体蛋白,免疫小鼠后用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用免疫沉淀方法分离大肠杆菌菌体蛋白中的目的条带,通过质谱分析,鉴定目的蛋白为GroEL。结果... 目的制备抗大肠杆菌分子伴侣GroEL的单克隆抗体。方法超声裂解制备大肠杆菌DH5α菌体蛋白,免疫小鼠后用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用免疫沉淀方法分离大肠杆菌菌体蛋白中的目的条带,通过质谱分析,鉴定目的蛋白为GroEL。结果菌体蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体33株,其中单克隆抗体1A5免疫沉淀得到的蛋白,经质谱鉴定为大肠杆菌分子伴侣GroEL。结论成功制备抗大肠杆菌分子伴侣GroEL分子的单克隆抗体,为进一步研究分子伴侣GroEL的结构和功能提供了新的手段。 展开更多
关键词 分子伴侣groel 单克隆抗体 免疫沉淀 质谱分析
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分子伴侣GroEL促进溶菌酶复性动力学 被引量：1
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作者 董晓燕 白姝 +1 位作者 刘晓光 孙彦 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1049-1053,共5页
建立了溶菌酶复性的表观动力学模型 ,研究了分子伴侣GroEL促进变性溶菌酶复性的动力学行为 ,包括酶浓度、三磷酸腺苷 (ATP)浓度、GroEL与酶的摩尔比对复性率和复性速率常数的影响 .酶浓度对复性速率常数的影响比对复性率的影响显著 ;酶... 建立了溶菌酶复性的表观动力学模型 ,研究了分子伴侣GroEL促进变性溶菌酶复性的动力学行为 ,包括酶浓度、三磷酸腺苷 (ATP)浓度、GroEL与酶的摩尔比对复性率和复性速率常数的影响 .酶浓度对复性速率常数的影响比对复性率的影响显著 ;酶的复性率和复性速率常数随ATP浓度的增大而提高 ;在蛋白质浓度一定的情况下 ,存在适宜的GroEL和ATP浓度 。 展开更多
关键词 复性 分子伴侣 groel 动力学模型 溶菌酶 蛋白质 变性
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利用串联亲和纯化技术分离大肠杆菌GroEL蛋白复合物 被引量：1
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作者 魏波 廖翔 +6 位作者 周围 王羽 李玉霞 高原 岳俊杰 梁龙 呼和巴特尔 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1848-1854,共7页
肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的致病菌,加深其致病机理的基础研究将为相关疫苗研究及疾病控制等提供新的思路和依据。串联亲和纯化(TAP)技术是最近发展的分离纯化天然状态蛋白质复合物进而研究蛋白质相互作用的新方法。用我们自... 肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的致病菌,加深其致病机理的基础研究将为相关疫苗研究及疾病控制等提供新的思路和依据。串联亲和纯化(TAP)技术是最近发展的分离纯化天然状态蛋白质复合物进而研究蛋白质相互作用的新方法。用我们自己构建的原核表达串联亲和标签载体,在大肠杆菌O157:H7中表达了标签融合蛋白GroEL-TAP,建立了非变性条件下制备蛋白复合物的方法,并且对串联亲和纯化过程中的相关实验条件进行了探索和优化,最终得到了高纯度的GroEL-TAP与天然GroEL形成的嵌合型多聚体复合物。这表明我们建立的串联亲和纯化技术能高度特异地纯化靶蛋白参与形成的复合物,为后续寻找O157:H7中毒力蛋白参与形成的复合物奠定了实验基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157:H7 串联亲和纯化(TAP) 分子伴侣groel
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