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大鳞副泥鳅和泥鳅GNB2L1基因的克隆、表达及系统进化分析
1
作者 徐玲花 严镇钧 +1 位作者 李琼 曹芳 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期243-251,共9页
由G蛋白D2亚基类似物1基因（GNB2L1）编码的蛋白激酶C受体（RACKl）是一个高度保守的锚定蛋白，属于WD40结构域蛋白家族成员，在细胞信号转导等生命过程中发挥着重要作用。本文采用RACE技术和基因克隆技术分别对大鳞副泥鳅（Paramisgurn... 由G蛋白D2亚基类似物1基因（GNB2L1）编码的蛋白激酶C受体（RACKl）是一个高度保守的锚定蛋白，属于WD40结构域蛋白家族成员，在细胞信号转导等生命过程中发挥着重要作用。本文采用RACE技术和基因克隆技术分别对大鳞副泥鳅（Paramisgurnusdabryanus）和泥鳅（Misgurnusanguillicaudatus）精巢组织的GNB2L1基因cDNA序列进行了克隆。序列分析表明，大鳞副泥鳅GNB2L1基因cDNA序列全长1115bp，开放阅读框（ORF）长965bp，编码317个氨基酸；泥鳅GNB2L1基因cDNA序列的开放阅读框长965bp，编码317个氨基酸；两种泥鳅GNB2L1基因编码的蛋白与其他鱼类的RACK1蛋白的同源性为94％～97％，且不同进化地位物种的GNB2L1基因均由8个外显子和7个内含子组成。以GNB2LI基因为标记基因，构建的鱼类系统发育树显示，大鳞副泥鳅和泥鳅在进化上的亲缘关系最近。RT．PCR结果显示，GNB2LI基因在大鳞副泥鳅成体各组织中均有表达，且在脑组织的表达量高于其他组织。以上结果表明，GNB2L1基因为一个进化保守基因，可能在大鳞副泥鳅的细胞活动中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 泥鳅 G蛋白D2亚基类似物1基因(gnb2l1) 蛋白激酶C受体(RACK1) 组织表达
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GNB2L1在宫颈癌中的表达及与患者预后的相关性分析 被引量：3
2
作者 马泽坤 李金秋 +5 位作者 买迪努尔·买买提 素比努尔·吾布力卡斯木 祁光伟 郑博源 阿仙姑·哈斯木 林晨 《新疆医科大学学报》 CAS 2022年第5期479-485,共7页
目的研究鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β多肽2样蛋白1(GNB2L1)在宫颈癌组织中的表达情况与临床病理学特征及预后的相关性。方法收集2010年6月—2013年3月新疆医科大学第一附属医院妇科收治的132例宫颈鳞癌(CSCC)患者、56例宫颈上皮内瘤变(CIN)... 目的研究鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β多肽2样蛋白1(GNB2L1)在宫颈癌组织中的表达情况与临床病理学特征及预后的相关性。方法收集2010年6月—2013年3月新疆医科大学第一附属医院妇科收治的132例宫颈鳞癌(CSCC)患者、56例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者宫颈组织及32例无宫颈疾病患者正常宫颈(NC)组织,采用免疫组化、qRT-PCR、Western blot方法检测CSCC、CIN、NC组织中GNB2L1和mRNA表达水平,分析与临床病理学特征及预后的相关性。基因测序检测CSCC组织中GNB2L1基因拷贝数的变化。Western blot、qRT-PCR检测GNB2L1在宫颈癌细胞C33a、SiHa及正常宫颈上皮细胞H8中的表达情况。STRING数据库构建基因调控网络;RNA干扰调控技术下调子宫颈癌SiHa和C33a细胞中GNB2L1基因表达后,BODIPY染色检测SiHa、C33a细胞内脂质含量的变化。Kaplan-Meier和logrank试验分析GNB2L1蛋白的表达水平与患者总生存期的相关性。结果与CIN和NC组织相比,CSCC组织中GNB2L1的mRNA与蛋白质表达水平较高,差异具有统计学意义(P<0.01),且GNB2L1过表达与细胞分化程度(P=0.001)、临床分期(P=0.017)、淋巴结转移(P=0.049)密切相关。与GNB2L1低表达患者相比,GNB2L1高表达患者的总生存时间更短(P=0.002)。与NC组织(215100±7276)copies/ng相比,CSCC组织(297200±10815)copies/ng中的GNB2L1 DNA拷贝数显著升高(P=0.009)。qRT-PCR与Western blot结果显示,与H8细胞比较,C33a、SiHa细胞中GNB2L1的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。下调GNB2L1表达后,BODIPY检测结果显示,与正常对照组和阴性对照组比较,实验组细胞内脂质含量明显减少。结论GNB2L1在宫颈癌组织中高表达可能是CSCC患者独立的预后因素,过表达GNB2L1可能促进肿瘤的进展,有望成为CSCC患者潜在的预后生物标志物。 展开更多
关键词 宫颈癌 鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β多肽2样蛋白1(gnb2l1)
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过表达Gnb2l1基因对体外节律基因mPer1表达的影响 被引量：1
3
作者 朱雨 邹晏 +3 位作者 江舟 汪宇辉 刘延友 王正荣 《四川生理科学杂志》 2010年第1期20-23,共4页
目的:评价过表达Gnb2l1基因对节律基因mPer1表达的影响。方法:用PMA刺激NIH3T3细胞,使节律基因稳定表达后,用脂质体介导方法将质粒pcDNA3.1/Gnb2l1转染至NIH3T3细胞,并以空载体质粒pcDNA3.1/vector为对照。利用RT-PCR技术检测不同时间点... 目的:评价过表达Gnb2l1基因对节律基因mPer1表达的影响。方法:用PMA刺激NIH3T3细胞,使节律基因稳定表达后,用脂质体介导方法将质粒pcDNA3.1/Gnb2l1转染至NIH3T3细胞,并以空载体质粒pcDNA3.1/vector为对照。利用RT-PCR技术检测不同时间点Gnb2l1 mPer1在NIH3T3细胞中的表达水平,研究过表达Gnb2l1基因对mPer1基因表达的影响。结果:采用RT-PCR技术显示成功转染,实验组比对照组Gnb2l1表达量明显增高(p<0.05)。并且发现实验组的mPer1表达量比对照组明显增高,但是经过余弦分析发现两组相比mPer1的表达周期无明显改变。结论:成功过表达Gnb2l1基因使节律基因mPer1表达量增加,中值增高(p=0.038)。 展开更多
关键词 时间生物学 节律基因 gnb2l1基因 per1基因 转染
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光线诱导下大鼠体内Gnb2l1基因及其蛋白节律性表达的研究
4
作者 张宇 薛建新 +2 位作者 汪宇辉 刘延友 王正荣 《四川生理科学杂志》 2007年第4期145-147,共3页
目的:观察Gnb2l1基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。方法:12D/12L光暗循环下,采用半定量RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的Gnb2l1,Per1 mRNA的变化规律;采用Western Blot方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中Gnb2l1编码蛋白、... 目的:观察Gnb2l1基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。方法:12D/12L光暗循环下,采用半定量RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的Gnb2l1,Per1 mRNA的变化规律;采用Western Blot方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中Gnb2l1编码蛋白、PER1蛋白在不同时间点的变化。结果:12D/12L光暗循环下,大鼠脑组织及肝脏组织中Gnb2l1 mRNA和节律基因Per1mRNA及其蛋白产物均呈近日节律。结论:在大鼠体内,Gnb2l1基因及其编码的蛋白存在着近日振荡,其相位在节律基因Per1之前。由于Gnb2l1基因编码的蛋白RACK1是一种重要的接头分子,参与了PKC信号通路,而Per1基因的启动子又可以被PKC通路激活,加之前期试验证实RACK1能与PER1蛋白相互作用,因此RACK1蛋白很可能在有Per1参与的节律基因分子振荡环路的反馈机制中起到了重要的作用。 展开更多
关键词 时间生物学 近日节律 gnb2l1 Period1
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构建以RACK1为核心口腔鳞状细胞癌差异基因间相互作用的关系网路 被引量：6
5
作者 郑建伟 利小平 +5 位作者 董俊英 曾宪丽 梁友龙 韩帮峰 杨德群 罗刚 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第18期2911-2916,共6页
背景:RACK1与口腔鳞状细胞癌的发生发展密切相关,但肿瘤的发生发展不是一个基因或蛋白决定的,是多基因、多分子呈网络结构,多步骤、多阶段共同作用的长期复杂过程,各肿瘤基因之间相互协同作用促使肿瘤细胞形成和发展。因此要揭示口腔鳞... 背景:RACK1与口腔鳞状细胞癌的发生发展密切相关,但肿瘤的发生发展不是一个基因或蛋白决定的,是多基因、多分子呈网络结构,多步骤、多阶段共同作用的长期复杂过程,各肿瘤基因之间相互协同作用促使肿瘤细胞形成和发展。因此要揭示口腔鳞状细胞癌的作用机制将不能局限于单个蛋白或基因,而要着眼于与口腔鳞状细胞癌差异蛋白或基因相关的信号网络通路,研究整个信号通路中相关蛋白或基因的表达变化,进而分析研究这些分子之间的相互作用机制。目的:筛选出的口腔鳞状细胞癌相关差异基因,使用STRING数据库通过生物信息学的方法构建它们之间的相互作用关系网络,为后续实验提供线索。方法:根据作者所在课题组前期口腔鳞状细胞癌的经典蛋白组学实验结果和基因表达谱芯片实验的数据结果,选择表达一致且差异相对较大的基因作为实验的差异基因。将筛选的差异基因输入STRING数据库进行分析,找出差异基因对应蛋白之间的可能作用关系,构建相互作用网络结构图。结果与结论:口腔鳞状细胞癌的19个差异基因对应蛋白相互间构成一个复杂的作用网络,各差异蛋白间通过多条相互作用通路进行调节,RACK1蛋白是整个网络的节点蛋白。GNB2L1的编码蛋白RACK1蛋白通过WD40重复蛋白亚基(编号COG2319)和β-G蛋白亚基(编号KOG0279)与其他差异蛋白的亚基间相互作用。其中WD40重复蛋白(编号COG2319)与其中5个差异蛋白直接作用并构建了10条相互作用通路,β亚基G蛋白(编号KOG0279)与其中8个差异蛋白直接作用并构建了11条相互作用通路。说明通过STRING数据库分析构建了这19个差异基因相互作用的结构网络图发现RACK1蛋白的2个亚基共与8个相关差异蛋白直接作用,产生18条相互作用通路。在这个网络结构中RACK1蛋白是中心,提示其是口腔鳞状细胞癌的一个关键节点蛋白。 展开更多
关键词 实验动物 组织构建实验模型 口腔鳞状细胞癌 差异基因 差异蛋白 RACK1 gnb2l1 STRING数据库 网络调节 作用通路 国家自然科学基金
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RACK1干扰质粒的构建及其干扰效率的鉴定
6
作者 邹晏 鲁芳 +4 位作者 刘延友 汪宇辉 甘露 付天明 王正荣 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期117-120,共4页
目的构建高效针对RACK1(Gnb2l1基因)的干扰质粒,为进一步研究RACK1功能构建有效平台。方法采用M-folder生物软件选择2个Gnb2l1干扰位点,根据位点序列合成2个干扰片段及1个阴性对照片段,定向克隆入pGenesil-1干扰载体并测序验证。将干扰... 目的构建高效针对RACK1(Gnb2l1基因)的干扰质粒,为进一步研究RACK1功能构建有效平台。方法采用M-folder生物软件选择2个Gnb2l1干扰位点,根据位点序列合成2个干扰片段及1个阴性对照片段,定向克隆入pGenesil-1干扰载体并测序验证。将干扰及对照质粒分别转染至NIH3T3细胞后,实时定量RT-PCR鉴定干扰效率。结果实时定量RT-PCR结果显示,干扰质粒转染组的Gnb2l1mRNA量分别为未转染组的58%和7%,阴性对照质粒转染组与未转染组一致,提示干扰质粒pGene-sil-1/Gnb2l1-Ⅱ干扰效率达到90%以上。结论成功构建并筛选到具有显著干扰效率的干扰质粒,为进一步研究RACK1及其伴侣分子的功能联系奠定了基础。 展开更多
关键词 生物节律 干扰质粒 RNA干扰 RT—PCR gnb2l1基因
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