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大豆GmNF-YA3与GmWRKY39启动子结合特异性分析
1
作者 高歌 孙睿加 +1 位作者 于月华 倪志勇 《大豆科学》 北大核心 2025年第3期20-26,共7页
为探究GmNF-YA3的抗旱作用机理,本研究对GmNF-YA3与GmWRKY39基因是否存在靶向作用关系进行了分析。利用在线网站对已克隆的GmWRKY39基因启动子序列进行生物信息学分析,将GmWRKY39上游2000 bp启动子连接到pHis2和pGreenⅡ0800-LUC载体上,... 为探究GmNF-YA3的抗旱作用机理,本研究对GmNF-YA3与GmWRKY39基因是否存在靶向作用关系进行了分析。利用在线网站对已克隆的GmWRKY39基因启动子序列进行生物信息学分析,将GmWRKY39上游2000 bp启动子连接到pHis2和pGreenⅡ0800-LUC载体上,将GmNF-YA3基因的开放阅读框(ORF)构建到pGADT7和pGreenⅡ62-SK载体上。利用酵母单杂交实验与双荧光素酶实验,鉴定并验证了GmNF-YA3的下游调控靶基因。生物信息学分析结果表明GmWRKY39启动子片段含有6个CCAAT-box元件和必备核心保守元件CAAT-box和TATA-box,含有2种与植物激素反应相关的顺式元件,9种与光响应相关的顺式元件等。酵母单杂交实验和双荧光素酶实验结果表明GmNF-YA3在体外和体内均能够结合GmWRKY39启动子,并且增强GmWRKY39启动子的活性。结果证明GmNF-YA3可以转录激活大豆GmWRKY39表达。研究为探究大豆GmNF-YA3响应干旱胁迫的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 核转录因子 gmnf-ya 双荧光素酶 酵母单杂 下游靶基因
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大豆GmNF-YA13互作蛋白的筛选及鉴定 被引量：1
2
作者 刘灿 于月华 倪志勇 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期21-28,共8页
大豆GmNF-YA13蛋白是一个核转录因子Y(NF-Y),在干旱和高盐响应过程中均发挥重要作用。为研究其抗旱和耐盐的作用机理,寻找GmNF-YA13的互作蛋白,构建pGBKT7-GmNF-YA13诱饵载体,采用酵母双杂交筛选大豆酵母文库,并进行X-α-gal染色验证。... 大豆GmNF-YA13蛋白是一个核转录因子Y(NF-Y),在干旱和高盐响应过程中均发挥重要作用。为研究其抗旱和耐盐的作用机理,寻找GmNF-YA13的互作蛋白,构建pGBKT7-GmNF-YA13诱饵载体,采用酵母双杂交筛选大豆酵母文库,并进行X-α-gal染色验证。结果显示:酵母双杂交获得85个阳性克隆,测序分析后得到36个候选的互作蛋白。功能预测显示互作蛋白主要参与生长发育、胁迫响应、能量代谢、转录调控和信号转导等生物过程。选择GmUVR8、GmCML41、GmFbox13和GmFBA与诱饵pGBKT7-GmNF-YA13进行一对一验证,只有GmFBA能与GmNF-YA13发生相互作用,预示GmNF-YA13功能的发挥需要GmFBA的参与。该结果可为NF-YA抗逆分子网络的研究提供基础。 展开更多
关键词 核转录因子 gmnf-ya13 酵母双杂交 互作蛋白
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大豆GmNF-YA11基因克隆及特征分析 被引量：6
3
作者 白玉翠 王萍 +1 位作者 倪志勇 于月华 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期719-725,共7页
NF-Y类转录因子是真核生物中普遍存在的一种转录因子复合物,在植物胚胎发育、光合作用、开花时间调控、逆境胁迫响应等诸多方面起重要作用,因此研究NF-Y类转录因子对提高大豆抗逆性有重要意义。为初步了解大豆GmNF-YA11基因的基本特征... NF-Y类转录因子是真核生物中普遍存在的一种转录因子复合物,在植物胚胎发育、光合作用、开花时间调控、逆境胁迫响应等诸多方面起重要作用,因此研究NF-Y类转录因子对提高大豆抗逆性有重要意义。为初步了解大豆GmNF-YA11基因的基本特征并为后续实验提供理论基础,本研究从大豆中克隆GmNF-YA11基因,其cDNA序列为1 553 bp,包含1个912 bp的开放阅读框,编码1个含303个氨基酸的蛋白质,分子量为34.06 kD,等电点为9.50;GmNF-YA11基因组包含5个外显子和4个内含子。进化树分析发现GmNF-YA11和GmNF-YA13在同一个分支上。转录活性分析表明,GmNF-YA11转录因子并不具有转录激活功能。组织特异性表达模式分析表明,GmNF-YA11在检测的所有组织中均有表达,在花中的表达量最低,而在种子中的表达量最高。 展开更多
关键词 大豆 gmnf-ya11 克隆 转录激活
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大豆GmNF-YA3基因结构及原核表达分析 被引量：2
4
作者 汪晓东 陈洋 +3 位作者 于月华 王仁勤 曲云壮 倪志勇 《作物杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期47-50,共4页
分析大豆Gm NF-YA3基因结构,构建Gm NF-YA3基因的原核表达载体并进行表达,以期获得带有GST标签的目的蛋白。通过Phytozome数据库对Gm NF-YA3基因组DNA序列进行生物信息学分析,序列比对结果表明,Gm NF-YA3基因组DNA序列长度为4 589bp,由... 分析大豆Gm NF-YA3基因结构,构建Gm NF-YA3基因的原核表达载体并进行表达,以期获得带有GST标签的目的蛋白。通过Phytozome数据库对Gm NF-YA3基因组DNA序列进行生物信息学分析,序列比对结果表明,Gm NF-YA3基因组DNA序列长度为4 589bp,由5个外显子和4个内含子组成。为了获得纯化的Gm NF-YA3蛋白,将保守域片段亚克隆到原核表达载体p GEX4T-1中,SDS-PAGE表明融合蛋白受异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导高水平表达,但主要以包涵体形式存在。本研究为进一步纯化和鉴定Gm NF-YA3蛋白及研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大豆 gmnf-ya3 原核表达 内含子
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大豆核因子GmNF-YA13基因的克隆及功能分析 被引量：1
5
作者 翟莹 李铭杨 +5 位作者 张军 于海伟 李珊珊 孙天国 赵艳 兰红宇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2023年第11期46-54,共9页
【目的】探究大豆核因子GmNF-YA13基因在大豆应对非生物胁迫中的生物学功能,为GmNF-YA13基因在抗逆育种中的应用奠定基础。【方法】以大豆北豆9号和烟草NC89的种子为供试材料,将大豆培养至第一片三出复叶展开后,分别进行干旱、高盐、低... 【目的】探究大豆核因子GmNF-YA13基因在大豆应对非生物胁迫中的生物学功能,为GmNF-YA13基因在抗逆育种中的应用奠定基础。【方法】以大豆北豆9号和烟草NC89的种子为供试材料,将大豆培养至第一片三出复叶展开后,分别进行干旱、高盐、低温和脱落酸(ABA)处理,通过实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)对GmNF-YA13在以上4种非生物胁迫下的相对表达量进行检测,并对GmNF-YA13进行克隆及生物信息学分析,将GmNF-YA13转化烟草,并对转基因烟草中抗逆相关基因(NtABA2、NtOsmotin、NtAPX2、NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3)的表达量进行qRT-PCR检测。【结果】干旱、高盐、低温和ABA处理均能不同程度诱导GmNF-YA13的表达,其中干旱胁迫和ABA处理对GmNF-YA13的诱导效果尤为显著。GmNF-YA13位于大豆基因组13号染色体,开放阅读框915 bp,编码含有304个氨基酸的蛋白质,该蛋白质分子量75.14 ku,等电点5.10。GmNF-YA13蛋白序列包含一个保守的DNA结合结构域。蛋白系统进化分析结果表明,GmNF-YA13与GmNF-YA7和拟南芥AtNF-YA1亲缘关系较近。启动子顺式作用元件预测分析结果表明,GmNF-YA13启动子区含有3个ABA响应元件ABRE、1个厌氧诱导元件ARE、1个防御和胁迫反应元件TC-rich repeats及1个干旱诱导的MYB转录因子结合位点MBS。GmNF-YA13在大豆叶片中的相对表达量最高。同时构建GmNF-YA13植物表达载体,并将GmNF-YA13转化烟草,获得3株转基因烟草植株。转基因烟草中抗逆相关基因表达量检测结果显示,转基因烟草中的NtABA2、NtOsmotin和NtAPX2相对表达量均显著高于野生型烟草,转基因烟草中NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3的相对表达量与野生型烟草差异不显著。【结论】GmNF-YA13与大豆干旱、高盐、低温等非生物胁迫之间关系密切,GmNF-YA13可能通过促进抗逆相关基因表达量的升高以提高转基因烟草的抗逆性。 展开更多
关键词 大豆 核因子Y gmnf-ya13基因 非生物胁迫 抗逆基因 转基因烟草
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大豆GmWRKY52生物信息学分析及与GmNF-YA13互作研究
6
作者 刘灿 聂天明 +1 位作者 于月华 倪志勇 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期175-181,共7页
WRKY转录因子在植物生长发育及逆境调控过程发挥着重要作用。前期通过酵母双杂交筛选干旱处理后的大豆cDNA文库时发现GmWRKY52(NP_001237726.2)可能与GmNF-YA13蛋白存在互作,为明确二者是否存在互作,本研究克隆GmWRKY52基因并进行生物... WRKY转录因子在植物生长发育及逆境调控过程发挥着重要作用。前期通过酵母双杂交筛选干旱处理后的大豆cDNA文库时发现GmWRKY52(NP_001237726.2)可能与GmNF-YA13蛋白存在互作,为明确二者是否存在互作,本研究克隆GmWRKY52基因并进行生物信息学分析,利用酵母双杂交系统鉴定GmWRKY52和GmNF-YA13之间的互作关系。结果显示:GmWRKY52基因全长1 163 bp,编码1个由265个氨基酸组成的蛋白质,多序列比对和系统发育树分析结果说明GmWRKY52基因与野生大豆GsWRKY69(XP_028186817.1)亲缘关系较近。酵母双杂交结果表明GmWRKY52和GmNF-YA13蛋白不存在相互作用。研究结果说明GmWRKY52与GmNF-YA13蛋白在酵母细胞内并不发生互作。 展开更多
关键词 大豆 GmWRKY52 生物信息学分析 酵母双杂交 gmnf-ya13
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干旱诱导基因GmNF-YA7克隆及植物表达载体构建 被引量：4
7
作者 殷书欣 计俊杰 +4 位作者 肖情 李铭杨 何佳琦 张军 翟莹 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期43-48,共6页
为了鉴定大豆核因子YA(Nuclear Factor YA,NF-YA)与非生物胁迫的关系,本研究检测大豆干旱胁迫下GmNF-YA7和GmNF-YA8的表达量情况,克隆GmNF-YA7基因并构建植物表达载体,同时获得其转基因工程菌株。qRT-PCR结果显示,GmNF-YA7和GmNF-YA8均... 为了鉴定大豆核因子YA(Nuclear Factor YA,NF-YA)与非生物胁迫的关系,本研究检测大豆干旱胁迫下GmNF-YA7和GmNF-YA8的表达量情况,克隆GmNF-YA7基因并构建植物表达载体,同时获得其转基因工程菌株。qRT-PCR结果显示,GmNF-YA7和GmNF-YA8均可以被干旱胁迫诱导表达,且GmNF-YA7对干旱胁迫的应答更明显。从大豆中克隆出GmNF-YA7基因,其位于大豆8号染色体上,编码含有336个氨基酸的蛋白质,预测分子量为37.06 kDa,pI6.11。GmNF-YA7蛋白氨基酸序列中含有1个CBF保守结构域。亚细胞定位预测结果显示,GmNF-YA7定位于细胞核中。蛋白系统进化分析表明GmNF-YA7蛋白与拟南芥AtNF-YA1蛋白的亲缘关系较近。利用限制性内切酶Nde I和Sal I将GmNF-YA7与植物表达载体pRI101连接并转化农杆菌EHA105,获得转基因工程菌株。 展开更多
关键词 大豆 gmnf-ya7 干旱响应 植物表达载体 转基因工程菌
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