目的:研究G蛋白耦联受体激酶相互作用分子1(G-protein-coupled receptor kinase interacting protein 1,GIT1),细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinases1 and 2,ERK1/2)在脊髓缺血再灌注损伤过程中的作用。方法:...目的:研究G蛋白耦联受体激酶相互作用分子1(G-protein-coupled receptor kinase interacting protein 1,GIT1),细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinases1 and 2,ERK1/2)在脊髓缺血再灌注损伤过程中的作用。方法:电镜观察缺血30min再灌注不同时间段[A组(对照组)再灌注0min、B组再灌注30min、C组再灌注2h、D组再灌注8h]脊髓组织标本的形态学改变,Westernblot检测各组脊髓标本中ERK1/2和GIT1的表达及其磷酸化,免疫共沉淀分析GIT1同活化的ERK1/2(phospho-ERK1/2,pERK1/2)相互作用的变化,免疫组织化学分析pERK1/2在神经细胞内的定位表达。结果:电镜结果显示D组脊髓神经细胞出现早期凋亡的征象;Western blot结果显示pERK1/2的表达、GIT1的磷酸化在C、D二组较对照组明显增加且均随再灌注时间延长呈明显增加的趋势;免疫共沉淀结果显示GIT1-pERK1/2结合力在C、D两组较对照组明显增加;免疫组织化学结果显示pERK1/2明显滞留于C、D两组的脊髓神经细胞胞浆区内。结论:缺血再灌注损伤过程中ERK1/2的活化以及在胞核外区域的滞留可能导致了脊髓神经细胞的凋亡,而GIT1作为细胞浆内局部黏附蛋白同pERK1/2的结合可能导致了其在胞浆区的滞留。展开更多
