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不同危险度MDS患者PBMC中BCL-xL、HERV-K gag水平及对病情向急性白血病转换的预测价值
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作者 孙璨 杜姗姗 +2 位作者 郭敏 周静秋 章莉 《检验医学与临床》 2026年第2期230-237,共8页
目的研究不同危险度骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中B淋巴细胞瘤-X基因长片段(BCL-xL)、人内源性逆转录病毒-K gag(HERV-K gag)水平及对MDS患者病情向急性髓系细胞白血病(AML)转换的预测价值。方法选取2020年1月至... 目的研究不同危险度骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中B淋巴细胞瘤-X基因长片段(BCL-xL)、人内源性逆转录病毒-K gag(HERV-K gag)水平及对MDS患者病情向急性髓系细胞白血病(AML)转换的预测价值。方法选取2020年1月至2024年1月成都市第七人民医院和四川大学华西医院收治的218例MDS患者作为研究对象,随访1年,根据病情向AML转换情况,将其分为转换组、未转换组。收集MDS患者基线资料。使用倾向性评分匹配(PSM)降低组间偏倚。比较不同危险度(较低危、较高危)MDS患者及转换组和未转换组PBMC中BCL-xL mRNA、HERV-K gag mRNA水平。采用多因素Logistic回归分析MDS患者病情向AML转换的影响因素,根据危险度(较低危、较高危)分层,对回归分析结果进行敏感性检验。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析PBMC中BCL-xL mRNA、HERV-K gag mRNA单独及联合预测MDS患者病情向AML转换的价值。结果218例MDS患者中有1例失访,其余217例患者均获得随访,其中61例转换为AML(转换组),AML转换率为28.11%,另156例纳入未转换组。按照1∶1 PSM后共筛选出61例患者纳入转换组和61例患者纳入未转换组,2组各项基线资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。较高危MDS患者PBMC中BCL-xL mRNA水平明显低于较低危患者,HERV-K gag mRNA水平明显高于较低危患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。转换组患者PBMC中BCL-xL mRNA水平明显低于未转换组,HERV-K gag mRNA水平明显高于未转换组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,PBMC中BCL-xL mRNA水平升高是MDS患者病情向AML转换的独立保护因素(P<0.05),HERV-K gag mRNA水平升高是MDS患者病情向AML转换的独立危险因素(P<0.05),且在较低危、较高危患者中,PBMC中BCL-xL mRNA水平升高仍是MDS患者病情向AML转换的独立保护因素(P<0.05),PBMC中HERV-K gag mRNA水平升高仍是MDS患者病情向AML转换的独立危险因素(P<0.05),提示研究结果较为稳定。ROC曲线分析结果显示,PBMC中BCL-xL mRNA、HERV-K gag mRNA单独及联合预测MDS患者病情向AML转换的曲线下面积(AUC)分别为0.754、0.762、0.874,二者联合预测的AUC明显大于PBMC中BCL-xL mRNA、HERV-K gag mRNA单独预测的AUC(Z=2.257,P=0.024;Z=2.246,P=0.025)。结论不同危险度MDS患者PBMC中BCL-xL mRNA、HERV-K gag mRNA水平存在明显差异,PBMC中BCL-xL mRNA、HERV-K gag mRNA水平与MDS患者病情向AML转换有关,且二者联合检测能提高对MDS患者病情向AML转换的预测能力,二者均可为临床随访管理和治疗决策提供重要的参考信息。 展开更多
关键词 危险度 骨髓增生异常综合征 外周血单个核细胞 B淋巴细胞瘤-X基因长片段 人内源性逆转录病毒-K gag基因 急性白血病 转换 预测价值
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陆地棉gag基因家族的鉴定与分析
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作者 王旭明 赵夏夏 +5 位作者 布热比亚·亚合普 翟亚巍 杨高峰 郭志刚 马云珍 张友平 《棉花学报》 北大核心 2025年第3期185-193,I0003-I0006,共13页
【目的】转座子是基因组进化的重要驱动力,但陆地棉中gag基因家族的功能尚未明确。本研究旨在鉴定陆地棉中的gag基因家族成员,分析其结构特征、进化关系及表达模式,为探究其在棉花生长发育和逆境响应中的功能奠定基础。【方法】基于陆... 【目的】转座子是基因组进化的重要驱动力,但陆地棉中gag基因家族的功能尚未明确。本研究旨在鉴定陆地棉中的gag基因家族成员,分析其结构特征、进化关系及表达模式,为探究其在棉花生长发育和逆境响应中的功能奠定基础。【方法】基于陆地棉遗传标准系TM-1基因组,利用HMMER软件、NCBI-CDD数据库和Pfam数据库鉴定gag基因家族成员;通过生物信息学工具分析其理化性质、亚细胞定位和染色体分布;利用ClustalX和MEGA X构建系统进化树;通过PlantCARE分析启动子顺式作用元件及结合RepeatMasker和LTR_retriever分析LTR转座子的分布特征;利用转录组数据和实时定量聚合酶链式反应分析部分gag基因的表达模式,探索gag基因的功能。【结果】鉴定出陆地棉166个gag基因,其中A亚组基因数量多于D亚组。系统进化分析显示,该家族可分为2大类(9个亚类),基因结构多样。大多数Ghgag基因存在于LTR转座子。启动子分析发现大量与生长发育、激素响应及逆境胁迫相关的顺式作用元件。表达模式表明,部分基因在特定组织(如胚珠、纤维)或逆境(高温、盐胁迫)中较高水平表达,如Ghir_A09G013490和Ghir_D04G004460。【结论】gag基因家族在陆地棉中具有结构和功能多样性,其进化与LTR转座子活动密切相关。部分成员可能参与非生物胁迫响应及胚珠发育调控,为棉花遗传改良提供了潜在靶点。 展开更多
关键词 陆地棉 gag基因 生物信息学 表达模式
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基于HIV-1 AEgp145基因的多载体疫苗在小鼠体内单独及与gag基因疫苗联合免疫研究
3
作者 郝彦哲 马琦 +4 位作者 杨靖 李红霞 张晓光 何小周 冯霞 《病毒学报》 北大核心 2025年第3期784-791,共8页
在前期研究中,我们构建了表达HIV-1 AEgp145的多种载体疫苗,包括质粒p VR、5型35型嵌合型腺病毒载体(Ad5F35)及修饰的痘苗病毒安卡拉株载体(MVA),在小鼠体内单独免疫两次或多种疫苗联合均显示良好的免疫原性。本研究主要探讨上述疫苗单... 在前期研究中,我们构建了表达HIV-1 AEgp145的多种载体疫苗,包括质粒p VR、5型35型嵌合型腺病毒载体(Ad5F35)及修饰的痘苗病毒安卡拉株载体(MVA),在小鼠体内单独免疫两次或多种疫苗联合均显示良好的免疫原性。本研究主要探讨上述疫苗单独及与表达HIV-1 gag基因的Ad5-HIVgag疫苗联合单次免疫的效果。首先对上述疫苗进行了验证,三种疫苗分别单次免疫小鼠,另设Ad5F35-AEgp145及r MVA-AEgp145分别与Ad5-HIVgag同时免疫。结果显示,免疫后2周各疫苗组AEgp145特异性细胞免疫反应均达峰值,以Ad5F35-AEgp145组及Ad5F35-AEgp145联合Ad5-HIVgag组最强,显著高于其他组,在免疫后24周仍维持较高水平。这两个实验组在免疫后2周HIV-1 gp120特异性结合抗体可被检出,之后一直维持在较高的水平;并于4~16周检测到AE亚型中和抗体,其他疫苗组抗体水平较低或检测不出。以上结果提示,Ad5F35-AEgp145单独或与Ad5-HIVgag联合单次免疫能在小鼠体内诱导强而持久的特异性细胞和体液免疫应答。 展开更多
关键词 HIV疫苗 腺病毒载体 痘苗病毒安卡拉株载体 AEgp145基因 gag基因
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慢病毒载体介导Gag-Caspase-8诱导三阴性乳腺癌原代细胞凋亡及S期阻滞
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作者 王敏 李习平 +8 位作者 檀军 邱梅 侯泽宇 田莹 罗鸿莹 范超文 齐玲 俞琦 谢薇 《山东大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期25-34,共10页
目的探讨携Gag-Caspase-8慢病毒样颗粒对三阴性乳腺癌原代细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及作用机制。方法收集临床人乳腺癌标本3例,通过改良组织块培养法培养人乳腺癌原代细胞,通过HE染色、免疫组化及免疫荧光鉴定所培养的细胞是否... 目的探讨携Gag-Caspase-8慢病毒样颗粒对三阴性乳腺癌原代细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及作用机制。方法收集临床人乳腺癌标本3例,通过改良组织块培养法培养人乳腺癌原代细胞,通过HE染色、免疫组化及免疫荧光鉴定所培养的细胞是否为高纯度三阴性人乳腺癌原代细胞;慢病毒转染构建携Gag-Caspase-8慢病毒样颗粒,细胞分为PBS组、Gag-VLPs组和Gag-CASP8-VLPs组。采用MTT法评估细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,AO/EB染色检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,蛋白质免疫印迹考察凋亡相关蛋白表达。结果临床肿瘤标本经HE染色确定为乳腺癌病理组织,免疫组化鉴定乳腺癌原代细胞特异性分子标记物CA153阳性高表达,并通过计算阳性细胞比例评估细胞纯度约为98%,免疫荧光检测结果显示,HER2、ER、PR均阴性表达,证明所培养的细胞为高纯度三阴性人乳腺癌原代细胞;Western blotting检测发现构建的Gag-VLPs和Gag-CASP8-VLPs内有慢病毒载体特异性分子标志物P24表达,证明慢病毒样颗粒包装成功。Gag-CASP8-VLPs干预三阴性人乳腺癌原代细胞24、48 h后,与对照组PBS和Gag-VLPs相比,倒置显微镜下观察到细胞皱缩、体积减小、贴壁能力下降且漂浮细胞增多;MTT检测显示,Gag-CASP8-VLPs组显著抑制了人乳腺癌原代细胞的生长(P<0.01),并呈时间依赖性;细胞划痕实验观察到,Gag-CASP8-VLPs组可显著抑制人乳腺癌原代细胞的迁移能力(P<0.05);流式细胞术检测发现,Gag-CASP8-VLPs组S期细胞数量显著增高(P<0.01),细胞阻滞于S期;AO/EB染色及流式细胞术检测发现,Gag-CASP8-VLPs组可诱导细胞发生凋亡(P<0.01);Western blotting结果显示,Gag-CASP8-VLPs组三阴性乳腺癌原代细胞内Gag-Caspase-8、Pro caspase-8、Activecaspase-8和Caspase-3凋亡相关蛋白表达显著增高(P<0.01)。结论慢病毒介导Gag-Caspase-8将活化的Caspase-8导入三阴性乳腺癌原代细胞,通过激活下游Caspase-3,诱导细胞凋亡,并使细胞停滞在S期,从而抑制细胞增殖和迁移。 展开更多
关键词 慢病毒载体 gag-Caspase-8 三阴性人乳腺癌原代细胞 CASPASE-8 S期阻滞
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祛痘凝胶对轻度青春期痤疮患者GAGS评分的影响
5
作者 王俊磊 《中文科技期刊数据库(引文版)医药卫生》 2025年第5期128-131,共4页
探究分析祛痘凝胶对轻度青春期痤疮患者GAGS评分的影响。方法 选择医院中2024年1月至2024年7月期间的轻度青春期痤疮患者100例,按照随机数字法分组为观察组以及对照组每组50例。观察组患者接受祛痘凝胶治疗,对照组患者使用玫芦消痤膏治... 探究分析祛痘凝胶对轻度青春期痤疮患者GAGS评分的影响。方法 选择医院中2024年1月至2024年7月期间的轻度青春期痤疮患者100例,按照随机数字法分组为观察组以及对照组每组50例。观察组患者接受祛痘凝胶治疗,对照组患者使用玫芦消痤膏治疗,对比两组患者GAGS评分在治疗前后的差异,对比两组患者治疗4周后毛孔与红色绝对分值情况。结果 治疗后两组患者的GAGS评分显著的低于治疗前(P<0.05),治疗后观察组患者的GAGS评分显著低于对照组(P<0.05),治疗后4周后两组患者的毛孔与红色区域绝对分值均显著低于治疗前(P<0.05),治疗后4周观察组患者的毛孔与红色区域绝对分值均显著低于对照组(P<0.05)。结论 祛痘凝胶治疗轻度青春期痤疮患者效果良好,GAGS评分明显降低,值得推广。 展开更多
关键词 祛痘凝胶 青春期 轻度痤疮 gagS评分
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HIV-1 Gag蛋白的高效表达调控研究
6
作者 毛春生 金宁一 +5 位作者 郭志儒 王宏伟 马奉龙 司兴奎 李萍 殷震 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期108-108,共1页
LTR位于HIV前病毒同DNA基因组的两末端,Gag基因位于5′端LTR的下游。LTR对转录的调控作用主要是由5′端LTR进行的。LTR具有启动子的作用,在结构上具有真核启动子的典型特征。另外,HIV-1 Gag蛋白还有能够自我装配成病毒样粒子(virus like... LTR位于HIV前病毒同DNA基因组的两末端,Gag基因位于5′端LTR的下游。LTR对转录的调控作用主要是由5′端LTR进行的。LTR具有启动子的作用,在结构上具有真核启动子的典型特征。另外,HIV-1 Gag蛋白还有能够自我装配成病毒样粒子(virus like particle,VLP)并从细胞中释放出来的重要特性。 我们利用痘苗病毒表达系统。 展开更多
关键词 gag蛋白 表达调控 重组痘苗病毒 HIV-1 病毒样粒子 启动子 高效表达 表达系统 gag基因 重组病毒
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HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定 被引量:5
7
作者 王道毅 刘勇 +6 位作者 郝彦玲 马民强 傅晶晶 李海山 王贻杰 陈静娴 邵一鸣 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2004年第1期1-4,共4页
目的 探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法 分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codon... 目的 探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法 分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果 P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论 HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性 。 展开更多
关键词 HIV-1/CN54 gag蛋白/P55 gag蛋白/P24表达纯化鉴定
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按痘苗病毒优势密码子改造HIV-1 gag基因提高表达水平的研究 被引量:10
8
作者 张相民 辛伟 +5 位作者 王世峰 李仁清 陆柔剑 王文玲 吕亦晨 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期210-216,共7页
为确定痘苗病毒密码子偏向性与基因表达的关系及其在痘苗病毒与宿主细胞相互作用过程中的作用,按痘苗病毒的优势密码子对HIV-1gag基因进行改造,并对合成基因与野生型HIV-1gag基因在痘苗病毒载体系统的表达水平进行了研究。结果显示:①... 为确定痘苗病毒密码子偏向性与基因表达的关系及其在痘苗病毒与宿主细胞相互作用过程中的作用,按痘苗病毒的优势密码子对HIV-1gag基因进行改造,并对合成基因与野生型HIV-1gag基因在痘苗病毒载体系统的表达水平进行了研究。结果显示:①各目的基因分别正向插入了痘苗病毒TK区7.5k启动子下游;②免疫荧光检测显示,改造前后的gag基因均能够很好地在痘苗病毒中表达;③Westernblot检测显示,在相同感染量时,改造后的gag基因具有更高的表达水平;④流式细胞术检测显示,密码子改造后的gag基因较野生型gag基因表达水平提高约17%。上述结果表明:按照痘苗病毒优势密码子进行外源基因改造,可作为提高外源基因在痘苗病毒中表达的策略,同时提示,密码子偏向性是痘苗病毒与宿主细胞相互作用的重要调控因素。 展开更多
关键词 痘苗病毒 基因表达 HIV-1 gag基因 密码子偏向性 优势密码子 载体系统
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HIV-1 gag基因和gp120基因转化番茄及转基因植株再生 被引量:9
9
作者 余云舟 金宁一 +3 位作者 王罡 季静 王萍 李昌 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第2期37-40,共4页
构建了HIV 1的gag基因、gp1 2 0基因及gag gp1 2 0嵌合基因的植物双元表达载体。通过农杆菌介导法将HIV 1的gag基因、gp1 2 0基因和gag gp1 2 0嵌合基因导入番茄 ,获得抗性转化再生植株。PCR检测和Southern杂交鉴定目的基因已整合到再... 构建了HIV 1的gag基因、gp1 2 0基因及gag gp1 2 0嵌合基因的植物双元表达载体。通过农杆菌介导法将HIV 1的gag基因、gp1 2 0基因和gag gp1 2 0嵌合基因导入番茄 ,获得抗性转化再生植株。PCR检测和Southern杂交鉴定目的基因已整合到再生植株基因组中 ,获得了转基因植株。GUS染色及Northern杂交结果表明目的基因已得到表达。本实验首次进行了HIV 1抗原基因转化番茄的研究 ,为利用番茄生产艾滋病新型口服疫苗打下了良好的基础。 展开更多
关键词 番茄 gag基因 gpl20基因 遗传转化 再生植株
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内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株gag基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测 被引量:8
10
作者 王宇 刘淑英 +1 位作者 韩敏 李建云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期272-276,共5页
提取内源性绵羊肺腺瘤病毒内蒙古分离株(NM)总DNA,参照GenBank中内源性绵羊肺腺瘤病毒enJS56A1株gag基因序列设计1对引物。应用PCR技术特异性地扩增出病毒的gag基因片段,将其克隆到pMD19-T载体中进行测序得到完整的gag基因序列,并用DNAS... 提取内源性绵羊肺腺瘤病毒内蒙古分离株(NM)总DNA,参照GenBank中内源性绵羊肺腺瘤病毒enJS56A1株gag基因序列设计1对引物。应用PCR技术特异性地扩增出病毒的gag基因片段,将其克隆到pMD19-T载体中进行测序得到完整的gag基因序列,并用DNAStar软件进行序列分析,分析结果表明,与内源性南非代表毒株enJS56A1(AF153615)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为98.9%。推导出的氨基酸同源性为98.4%。与外源性美国代表株JSRV21(AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为89.6%,氨基酸同源性为94.8%。利用生物信息学软件对其蛋白结构进行预测,结果表明gag-enJSRV-NM为一结构松散的蛋白分子,这也是我国首次报道的内源性绵羊肺腺瘤病毒的gag基因的全序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 内源性绵羊肺腺瘤病毒 gag基因 克隆 序列分析 结构预测
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IL-2和绵羊梅迪-维斯纳病病毒核心蛋白Gag核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答 被引量:6
11
作者 丁忠庆 沈荣显 +2 位作者 相文华 赵丽荣 赵立平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期204-207,共4页
构建绵羊梅迪-维斯纳病病毒(MVV)核心蛋白Gag核酸疫苗并与IL-2联合免疫小鼠,为评价其诱导的体液和细胞免疫应答。将MVV gag基因与羊IL-2基因分别插入到核酸疫苗载体质粒pcDNA5.0中,构建真核表达质粒pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2,并经酶... 构建绵羊梅迪-维斯纳病病毒(MVV)核心蛋白Gag核酸疫苗并与IL-2联合免疫小鼠,为评价其诱导的体液和细胞免疫应答。将MVV gag基因与羊IL-2基因分别插入到核酸疫苗载体质粒pcDNA5.0中,构建真核表达质粒pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2,并经酶切以及测序鉴定。分别用阳性质粒pcDNA5.0-Gag、空载体pcDNA5.0及pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2共免疫BALB/C小鼠,采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体以及IFN-γ和IL-4水平,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖。结果表明pcDNA5.0-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IFN-γ、IL-4水平高于pcDNA5.0-Gag免疫组,与空载体pcDNA5.0对照组相比有显著差异(P<0.01)。且pcDNA5.0-Gag单独免疫组及与IL-2联合免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数均高于空载体pcDNA5.0对照组。因此,构建真核表达质粒pcDNA5.0-Gag和pcDNA5.0-IL-2,用其联合免疫BALB/C小鼠所诱导的免疫反应以特异性细胞免疫应答为主,同时可产生体液免疫,且IL-2发挥了免疫佐剂的作用,为进一步将其用于MVV的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊梅迪-维斯纳病病毒 gag基因 IL-2 核酸疫苗
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人免疫缺陷病毒II型gag基因在毕赤酵母中表达条件的研究 被引量:4
12
作者 李子健 金宁一 +4 位作者 江文正 张立树 赵健绮 金洪涛 王宏 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期135-137,共3页
目的 :提高人免疫缺陷病毒 II型 ( HIV- 2 ROD) gag基因在毕赤酵母中的表达量。方法 :研究了转化子生长的培养条件 ,包括不同的甲醇诱导浓度、诱导时间、溶解氧、摇瓶转速及不同 p H值对人 HIV- 2 gag表达的影响。表达产物进一步通过盐... 目的 :提高人免疫缺陷病毒 II型 ( HIV- 2 ROD) gag基因在毕赤酵母中的表达量。方法 :研究了转化子生长的培养条件 ,包括不同的甲醇诱导浓度、诱导时间、溶解氧、摇瓶转速及不同 p H值对人 HIV- 2 gag表达的影响。表达产物进一步通过盐析和 Sephadex G- 1 0 0分子筛层析柱层析分离纯化。结果 :最佳表达条件是 1 .0 %甲醇诱导 ,诱导时间 3d,大于 85 %的溶解氧 ,摇瓶转速2 5 0 r·min-1,p H6.0~ 6.5 ,目的蛋白表达量达到 2 1 mg· L-1。同时 ,经纯化后得到了纯度大于95 %的目的蛋白。结论 :获得了 HIV- 2 RODgag重组蛋白在巴斯德毕赤酵母系统中分泌表达的最佳表达条件。 展开更多
关键词 HIV-2 基因 gag 毕赤酵母 基因表达
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绵羊肺腺瘤病毒NM株前病毒gag基因的克隆与序列分析 被引量:6
13
作者 刘淑英 马学恩 李景鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期54-57,共4页
参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的全基因序列,设计合成3对引物,对JSRVNM株的gag基因分3段进行PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳分析,分别呈3条531、888和949bp的特异条带,将其分别克隆入pMD 18T载体中,进行序列测定并拼接序列,得... 参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的全基因序列,设计合成3对引物,对JSRVNM株的gag基因分3段进行PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳分析,分别呈3条531、888和949bp的特异条带,将其分别克隆入pMD 18T载体中,进行序列测定并拼接序列,得到完整的gag基因序列。分析结果表明,与南非代表株(基因序列号NC 001494)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为89 0%,推导出的氨基酸同源性为90%。与美国代表株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为86 3%,氨基酸同源性为87%。 展开更多
关键词 gag基因 肺腺瘤病 绵羊 氨基酸同源性 序列比较 序列分析 病毒 基因序列 核苷酸 克隆
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山羊地方性鼻内肿瘤病毒gag蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量:5
14
作者 何亚鹏 张琪 +3 位作者 王景 周曼 付明哲 许信刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2300-2303,共4页
为获得纯化的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats,ENTV)gag蛋白和抗gag蛋白的多克隆抗体,根据GenBank已登录的ENTVgag基因序列,设计合成1对特异性引物,应用PCP扩增gag基因并连接于原核表达载体pET-28a(+)中,... 为获得纯化的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats,ENTV)gag蛋白和抗gag蛋白的多克隆抗体,根据GenBank已登录的ENTVgag基因序列,设计合成1对特异性引物,应用PCP扩增gag基因并连接于原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-gag,经鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。重组菌经IPTG诱导后成功表达相对分子质量约为69 000的重组蛋白,重组蛋白经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后免疫小鼠制备多克隆抗体。Western blot试验表明,重组蛋白能与制得的多克隆抗体反应,而与正常小鼠血清和山羊地方性鼻内肿瘤患羊血清不反应。本试验成功获得了纯化的ENTV gag蛋白和小鼠抗gag蛋白的多克隆抗体,为进一步研究gag蛋白在ENTV致病过程中的作用提供了材料。 展开更多
关键词 山羊地方性鼻内肿瘤病毒 gag蛋白 原核表达 多克隆抗体
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山羊地方性鼻内腺瘤病毒和内源性逆转录病毒gag变异区的克隆与分析 被引量:5
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作者 王小玉 冯迎春 +5 位作者 颜其贵 张国俊 陈瑜 韩国全 任玉鹏 郭万柱 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期29-32,共4页
根据病毒gag变异区的两端设计引物,PCR扩增ENTV及ERVs的gag变异区,TA克隆并测序,经比对分析发现,在ERVs的783位~803位的"CCT"重复序列,编码多聚脯氨酸"PPPPPPP",对应在ENTV gag中存在缺失突变和点突变,编码氨基酸为"PSL",生物信... 根据病毒gag变异区的两端设计引物,PCR扩增ENTV及ERVs的gag变异区,TA克隆并测序,经比对分析发现,在ERVs的783位~803位的"CCT"重复序列,编码多聚脯氨酸"PPPPPPP",对应在ENTV gag中存在缺失突变和点突变,编码氨基酸为"PSL",生物信息学预测该区域的变异位于一个重要的抗原决定簇中,对gag在ENTV和ERVs中的功能有较大影响,为进一步研究gag的抗原性及相关免疫学检测方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 山羊 鼻内肿瘤 山羊地方性鼻内肿瘤病毒 羊源内源性逆转录病毒 gag
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HIV-1 Gag蛋白在大肠杆菌表达系统中诱导和纯化条件的优化 被引量:3
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作者 傅晶晶 孙静 +4 位作者 陈佩 霍烛 范文玲 郝彦玲 刘勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1306-1311,共6页
为探讨诱导温度对于HIV-1Gag在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响,将30oC和37oC诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素,比较溶解性的差异,并比较复性的不同。将30oC诱导的目的蛋白分别用2mol/L和8mol/L尿素溶... 为探讨诱导温度对于HIV-1Gag在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响,将30oC和37oC诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素,比较溶解性的差异,并比较复性的不同。将30oC诱导的目的蛋白分别用2mol/L和8mol/L尿素溶解后做层析分离,比较两者的分离效果。结果发现,与37oC相比,30oC诱导表达的蛋白能有效溶于低浓度尿素,并且更容易复性。与8mol/L尿素溶解相比,30oC诱导的包涵体用2mol/L尿素溶解后通过凝胶过滤和离子交换层析纯化能得到更好的分离效果。这提示低温诱导的Gag包涵体中可能含有更多类似天然态构象的蛋白,而低浓度尿素有利于保持包涵体中蛋白的天然态构象。从而为包涵体蛋白的诱导表达和分离纯化提供了参考。 展开更多
关键词 HIV-1 gag 包涵体 温度 变性剂 纯化
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1型和2型外壳蛋白构建的AAV载体携带HIV-1 gag诱导免疫反应的比较研究 被引量:4
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作者 刘红梅 余双庆 +4 位作者 冯霞 刘新蕾 董小岩 吴小兵 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期177-182,共6页
比较两种血清型的腺病毒伴随病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体携带HIV-1gag基因肌肉注射诱导小鼠免疫反应的特点。分别制备携带EGFP和HIV-1gag基因的重组AAV2/1(AAV1)和AAV2载体。小鼠肌肉注射rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP,观察注射局部... 比较两种血清型的腺病毒伴随病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体携带HIV-1gag基因肌肉注射诱导小鼠免疫反应的特点。分别制备携带EGFP和HIV-1gag基因的重组AAV2/1(AAV1)和AAV2载体。小鼠肌肉注射rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP,观察注射局部EGFP的表达。将rAAV1-gag和rAAV2-gag分别以0、3周初免/加强方式肌肉注射免疫BALB/c小鼠以及新西兰白兔。ELISA法检测抗HIV-1 Gag P24蛋白的特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测Gag特异性的CTL反应。结果表明,rAAV1-EGFP在小鼠肌肉的表达强度显著高于rAAV2-EGFP;用Western blot法和间接免疫荧光法检测rAAV1-gag和rAAV2-gag体外转染的293细胞,均可检测到HIV-1 Gag蛋白的表达;在小鼠体内rAAV1-gag和rAAV2-gag组均可检测到特异性P24抗体,抗体滴度rAAV1-gag组显著高于rAAV2-gag组;而无论rAAV1-gag组还是rAAV2-gag组,特异性CTL反应均较低,与阴性对照组相比均无显著性差异;两种载体免疫兔子也都可检测到特异性P24抗体,同样地,rAAV1-gag组显著高于rAAV2-gag组。结论:携带HIV-1gag基因的rAAV1或rAAV2以肌肉注射方式免疫小鼠主要诱导特异Gag的体液免疫反应;且rAAV1可诱导很强的抗HIV-1 Gag特异性抗体,抗体水平显著高于rAAV2。 展开更多
关键词 HIV-1 gag 腺病毒伴随病毒 免疫反应
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HIV-1B亚型gag基因密码子优化及其免疫原性的研究 被引量:3
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作者 冯霞 余双庆 +4 位作者 刘红梅 刘新蕾 王小利 周玲 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期190-195,共6页
从河南HIV-1流行区感染者中克隆HIV-1 B亚型gag基因,通过序列比对获得其一致性共有序列,对该共有序列按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Western blot方法比较优化前后gag基因体外表达量。发现对gag基因进行密码子优化可显著... 从河南HIV-1流行区感染者中克隆HIV-1 B亚型gag基因,通过序列比对获得其一致性共有序列,对该共有序列按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Western blot方法比较优化前后gag基因体外表达量。发现对gag基因进行密码子优化可显著提高其表达水平。将优化后的mod.gag基因插入重组腺病毒载体,构建了重组病毒rAdV-mod.gag。在BALB/c小鼠体内分别以108PFU及109PFUr AdV-mod.gag疫苗单独免疫两次均可产生较高水平的gag特异性细胞免疫反应。由此得出结论,对gag基因的密码子优化是成功的;表达优化后gag基因的重组腺病毒疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答。 展开更多
关键词 HIV-1 gag 密码子优化 重组腺病毒 CTL应答
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HIV-1gag基因重组痘苗病毒的构建和高效表达 被引量:9
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作者 毛春生 金宁一 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第6期561-569,共9页
Gag蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒(HIV-1)重要的结构蛋白,可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将HIV-1不同长度的长末端重复序列(LTR)和全长的gagORF置于痘病毒启动子控制下,经过同源重组、红细胞吸附试... Gag蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒(HIV-1)重要的结构蛋白,可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将HIV-1不同长度的长末端重复序列(LTR)和全长的gagORF置于痘病毒启动子控制下,经过同源重组、红细胞吸附试验筛选和间接免疫荧光试验鉴定,分离了6株重组痘苗病毒。免疫印迹(Westernblot)和免疫酶试验检测表明,6株病毒均能表达gag基因,其中以v16LG△2的Gag蛋白表达量最高,占细胞裂解物上清的5.19%,相当于14.7μg/106细胞,接近杆状病毒的表达产量。重组蛋白主要为p55gag蛋白前体,但也有一部分被加工,生成成熟蛋白p24gag、p17gag及其中间蛋白。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子(VLP)。 展开更多
关键词 HIV-1 gag蛋白 高效表达 重组痘苗病毒
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中国流行株HIV-1gag和hIL-2/hIL-6核酸疫苗构建与实验免疫研究 被引量:4
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作者 秦云龙 金宁一 +5 位作者 罗坤 李凡 王宏伟 王莉馨 张永生 殷震 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期5-8,共4页
目的探讨中国流行株 HIV- 1gag与 h IL - 2 /h IL - 6共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以核酸疫苗质粒 p IRES1neo为表达载体 ,构建重组核酸疫苗质粒 p IRES1- gag、p IRES1- gag- h IL- 2、p IRES1- gag- h IL- 6 ,通过间接免... 目的探讨中国流行株 HIV- 1gag与 h IL - 2 /h IL - 6共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以核酸疫苗质粒 p IRES1neo为表达载体 ,构建重组核酸疫苗质粒 p IRES1- gag、p IRES1- gag- h IL- 2、p IRES1- gag- h IL- 6 ,通过间接免疫荧光试验、Dot- EL ISA检测 gag/h IL - 2 /h IL - 6基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫 Balb/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化试验、CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞数量测定、细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL )特异性杀伤作用检测及血清抗体检测 ,结果构建的重组质粒转染 BHK细胞后可表达目的基因 ,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖、诱导特异性 CTL 反应 ,当和 h IL- 2 /h IL- 6共表达时免疫效果更加显著。讨论与 Gag蛋白共表达的 h IL- 2 /h IL- 6能够进一步增强免疫鼠的细胞免疫与体液免疫水平 ,构建的重组质粒为 HIV- 展开更多
关键词 HIV-1 gag蛋白 白细胞介素-2 白细胞介素-6
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