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基于基因表达数据库的急性髓系白血病细胞焦亡预后分析及GZMB调节机制研究 被引量：4
1
作者 党庆秀 李洋 +2 位作者 郭嫣婷 沈洋灵 顾伟英 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第18期3376-3383,共8页
目的:通过生物信息分析与实验相结合探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞焦亡相关基因在AML患者的预后价值,并验证AML治疗的新靶点。方法:在基因表达谱数据库(TCGA、GTEx)中选取AML细胞焦亡相关基因表达数据,采用R语言... 目的:通过生物信息分析与实验相结合探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞焦亡相关基因在AML患者的预后价值,并验证AML治疗的新靶点。方法:在基因表达谱数据库(TCGA、GTEx)中选取AML细胞焦亡相关基因表达数据,采用R语言筛选AML患者和健康对照组中细胞焦亡差异表达基因。对差异的基因进行单因素Cox及Lasso回归分析并构建预后模型。应用单因素和多因素Cox回归分析风险模型、临床特征与AML患者预后的相关性。Kaplan-Meier法分析预后模型中GZMB表达量与患者生存率的关系,将AML患者分成GZMB高表达组和低表达组并进行基因集富集分析(GSEA)。并采用Western blot验证AML中GZMB/Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡。结果:45个焦亡相关基因在AML患者组和正常组中存在差异表达(P<0.05)。其中7个基因(BAK1、CASP3、GZMB、GPX4、NLRP2、GSDMB和GSDMA)被纳入风险模型构建。年龄、FAB分型、风险评分与AML患者预后相关(P<0.05),且风险评分是AML的独立危险因素(P<0.05)。GZMB高表达组的总生存率显著低于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。GSEA富集分析显示GZMB主要参与了细胞因子信号通路、NK细胞、B细胞、T细胞免疫调节等信号途径(P<0.05,FDR≤25%)。Western blot实验结果初步证实AML中存在GZMB/Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡调节途径。结论:通过生物信息学方法,构建了7个细胞焦亡相关基因的AML预后模型,GZMB高表达与AML发生发展及不良预后相关,并参与GZMB/Caspase-3/GSDME途径介导的细胞焦亡。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 TCGA GTEx 细胞焦亡 gzmb
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冠心病细胞焦亡基因的生物信息学筛选及临床验证
2
作者 杨玉静 吴振敏 +5 位作者 李晖 赵越 钟笑凌 王子霞 张鑫强 邓倩昀 《中国实验诊断学》 2025年第8期954-962,共9页
目的 通过整合生物信息学分析与临床验证,筛选冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)细胞焦亡关键基因,并评估其作为生物标志物的诊断价值。方法 基于GEO数据库GSE113079数据集筛选差异表达基因,结合LASSO回归与随机森林算法确定关键基因。纳入... 目的 通过整合生物信息学分析与临床验证,筛选冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)细胞焦亡关键基因,并评估其作为生物标志物的诊断价值。方法 基于GEO数据库GSE113079数据集筛选差异表达基因,结合LASSO回归与随机森林算法确定关键基因。纳入2023年5月至2024年8月在广东省人民医院就诊的CHD患者630例及健康体检对照246例,采用实时定量PCR检测外周血样本目标基因表达水平,分析其与临床分型、血管病变支数及Gensini评分的相关性。结果 筛选出5个关键基因(PRKACA、CHMP6、GZMB、APIP、GZMA)。其中PRKACA、GZMB、GZMA在CHD患者中显著下调(均P<0.001),ROC曲线下面积(AUC)分别为0.862(95%CI,0.835~0.888)、0.943(95%CI,0.927~0.959)、0.777(95%CI,0.744~0.810)。亚组分析显示,GZMB与GZMA在急性冠脉综合征亚组中表达差异显著(P<0.05),随着Gensini评分的增加,GZMB、GZMA表达量呈下降趋势。结论 外周血PRKACA、GZMB、GZMA可作为CHD诊断的生物标志物,其表达水平与疾病严重程度相关,为早期诊断和个体化治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 冠心病 细胞焦亡 生物标志物 PRKACA gzmb GZMA
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Th-POK及其相关因子在胃癌组织中的表达及临床意义
3
作者 蒋晨 蒋丽丽 +1 位作者 黄丽芳 李国华 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2016年第6期495-499,共5页
目的探讨胃癌组织中Th-POK、CD4、CD8、Th-POK相关因子RUNX3和颗粒酶B(GZMB)的表达及临床意义。方法收集2011年3月至2014年10月100例胃癌手术组织及配对癌旁组织标本。采用免疫组化PV-6000二步法检测胃癌及癌旁组织中Th-POK、CD4、CD8、... 目的探讨胃癌组织中Th-POK、CD4、CD8、Th-POK相关因子RUNX3和颗粒酶B(GZMB)的表达及临床意义。方法收集2011年3月至2014年10月100例胃癌手术组织及配对癌旁组织标本。采用免疫组化PV-6000二步法检测胃癌及癌旁组织中Th-POK、CD4、CD8、RUNX-3和GZMB蛋白的表达情况。分析Th-POK及其相关因子与胃癌临床病理特征的关系。结果 Th-POK和CD4在胃癌组织中的阳性表达率均高于癌旁组织(80%vs.67%,P<0.05;77%vs.60%,P<0.05),CD8和RUNX-3在癌旁组织中阳性表达率显著高于胃癌组织(80%vs.60%,P<0.01;86%vs.59%,P<0.01)。GZMB在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织,但差异无统计学意义(70%vs.61%,P>0.05)。Th-POK和RUNX3表达均与TNM分期有关(P<0.05),与年龄、性别、部位、分化程度及淋巴结转移无关(P>0.05)。Th-POK表达与CD4表达呈正相关(r=0.200,P<0.05),与RUNX3表达呈负相关(r=-0.373,P<0.001),与CD8及GZMB表达均无关(P>0.05)。结论胃癌组织Th-POK表达增强,其可能通过抑制RUNX3表达、减少CD8表达、促进CD4表达,从而促进胃癌的免疫逃逸。 展开更多
关键词 胃癌 Th-POK RUNX-3 CD4 CD8 颗粒酶B(gzmb) 免疫逃逸
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桔梗汤促进肺脏Th1细胞募集及拮抗肿瘤肺脏转移的作用机制研究 被引量：2
4
作者 孔令婉 王悦 +3 位作者 张玥 张珊 杨雯越 姚成芳 《中医药信息》 2023年第12期1-7,13,共8页
目的:探讨桔梗汤(platycodon decoction,PD)促进肺脏Th1细胞募集及拮抗肿瘤肺脏转移的作用机制。方法:24只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(CTRL组)和PD用药组(PD组),PD组灌胃PD 2.925 g/(kg·d);18只C57BL/6雌性小鼠随机分为正... 目的:探讨桔梗汤(platycodon decoction,PD)促进肺脏Th1细胞募集及拮抗肿瘤肺脏转移的作用机制。方法:24只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(CTRL组)和PD用药组(PD组),PD组灌胃PD 2.925 g/(kg·d);18只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(CTRL组)、B16黑色素瘤肺转移模型组(B16组)和PD治疗组(B16+PD组),除正常对照组外,B16组和B16+PD组小鼠尾静脉注射B16黑色素瘤细胞,其中PD治疗组前3 d开始灌胃PD。利用流式细胞术检测小鼠肺脏Th1细胞及其特征性趋化因子受体CXCR3和功能因子IFN-γ的表达变化;RT-qPCR技术和单细胞测序检测肺脏中CXCL9、CCL5、IFN-γ、GZMB的表达水平。结果:与未用药小鼠相比,连续灌胃桔梗汤10 d后,小鼠肺脏Th细胞比例和数量显著升高(P<0.001);Th细胞中CXCR3、IFN-γ表达阳性比例均明显上升(P<0.001,P<0.01);肺组织中CXCL9(P<0.001)、CCL5(P<0.05)、IFN-γ(P<0.01)、GZMB(P<0.05)表达升高。在B16黑色素瘤肺脏转移模型中,桔梗汤治疗可显著降低小鼠肺脏肿瘤克隆数(P<0.01)。与肿瘤模型组相比,桔梗汤治疗组小鼠肺脏CXCR3+Th细胞、IFN-γ+Th细胞比例和数量升高(P<0.001,P<0.01);肺脏肿瘤微环境中趋化因子CXCL9和CCL5的转录水平上调,肺脏Th1细胞IFN-γ、GZMB的转录水平也显著上调。结论:桔梗汤可通过增强肺脏趋化因子CXCL9、CCL5的表达,促进CXCR3+Th1细胞在肺脏肿瘤微环境中的募集,增强局部IFN-γ和GZMB的表达,改善肺脏免疫微环境,发挥拮抗肿瘤肺脏转移的药理作用。 展开更多
关键词 桔梗汤 TH1 IFN-Γ gzmb 抗肿瘤
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人颗粒酶B融合蛋白的原核表达及其免疫血清的制备
5
作者 汪文寰 冯方方 +6 位作者 蔡一奇 张婵琼 岑丹维 宋易玲 郭刚强 张丽芳 李文姝 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期234-238,共5页
目的在原核体系中表达人颗粒酶B(granzyme B,Gzm B)融合蛋白,并制备Gzm B免疫血清多克隆抗体。方法构建Gzm B原核表达重组质粒p ET32a-Gzm B,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组Gzm B(r Gzm B)蛋白,镍离子螯合亲和层析柱纯化表... 目的在原核体系中表达人颗粒酶B(granzyme B,Gzm B)融合蛋白,并制备Gzm B免疫血清多克隆抗体。方法构建Gzm B原核表达重组质粒p ET32a-Gzm B,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组Gzm B(r Gzm B)蛋白,镍离子螯合亲和层析柱纯化表达产物。以纯化的r Gzm B蛋白为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,共免疫3次,分别于免疫后2、4、6周经小鼠尾静脉采血,分离血清,间接ELISA法检测免疫血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平,并确定其抗体最大稀释度,免疫斑点试验检测免疫血清多克隆抗体对Gzm B的特异免疫结合特性。结果质粒p ET32aGzm B经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的r Gzm B蛋白相对分子质量为48 000;纯化的r Gzm B蛋白免疫小鼠血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平随免疫时间延长至第4周达到高峰,随后维持一定水平;抗体最大稀释度为1∶1 600;r Gzm B免疫血清能够特异地结合Gzm B,显示了其免疫结合特性。结论制备了r Gzm B蛋白和Gzm B小鼠免疫血清多克隆抗体,为后续开展Gzm B的靶向杀伤、靶向检测等应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 颗粒酶B 原核表达 多克隆抗体
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