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题名鼠透明带3(ZP3)融合蛋白表达以及抗血清制备
被引量：4
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作者
张富春
钱东
林仁勇
马纪
马正海
钟哲
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机构
新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点开放实验室
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出处
《生物技术》
CAS
CSCD
2002年第4期11-13,共3页
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基金
国家生物工程中心"863"青年基金 ( 981 0 0 90 1 )
国家自然科学基金 ( 39960 0 4 7)
高等学校骨干教师资助项目 (GG - 0 71 - 1 0 75 5 - 31 0 7)
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文摘
鼠透明带 3(mZP3)作为精子的初级受体 ,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白 ,抗鼠透明带 3抗体能够阻断精卵的结合 ,达到不育的效果 ,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA ,分离mRNA ,反转录获得cDNA ,将cDNA连接到测序载体pUCm -T质粒上 ,通过序列测定和分析得到正确的mZP3cDNA。经内切酶EcoRI和XhoI处理 ,将mZP3cDNA克隆至融合蛋白表达载体pGEX - 4T - 1中 ,在T4DNA连接酶的作用下构建出融合表达载体pGEX -mZP3,转化大肠杆菌BL - 2 1菌株 ,利用IPTG诱导后获得可溶性的蛋白质产物 ,经过SDS -PAGE鉴定 ,表达的融合蛋白GST -mZP3分子质量约为 72kD左右 ,纯化的融合蛋白免疫兔子 ,获得效价为1∶1 0 0 0的抗血清 ,Westernblot检测抗血清具有针对mZP3融合蛋白的专一性 。
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关键词
mZP3
CDNA
质粒GST-mZP3
原核表达
融合蛋白
抗血清
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Keywords
zona pellucida 3
cDNA
gst-zp3
prokaryotic expression
fusion protein
antisera
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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