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GST-NAP融合蛋白可溶性表达及柱上切割GST标签
被引量:
8
1
作者
黄夏冰
康巧珍
+2 位作者
傅国
汲振余
刘鑫
《郑州大学学报(理学版)》
CAS
北大核心
2015年第4期94-98,共5页
利用基因工程的方法,以实验室保存的p MAL-C2X-NAP质粒为模板,PCR扩增NAP基因,构建重组质粒p GEX-NAP.重组质粒通过酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),再经IPTG低温诱导获得可溶性GST-NAP融合蛋白,最后利用谷胱甘肽琼脂糖...
利用基因工程的方法,以实验室保存的p MAL-C2X-NAP质粒为模板,PCR扩增NAP基因,构建重组质粒p GEX-NAP.重组质粒通过酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),再经IPTG低温诱导获得可溶性GST-NAP融合蛋白,最后利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂进行纯化,Prescission蛋白酶进行柱上切割去除GST标签.结果表明,p GEX-NAP重组质粒构建正确,在大肠杆菌中经IPTG低温诱导表达,可获得大量可溶性GST-NAP融合蛋白.Prescission蛋白酶柱上切割去除GST标签后,经Western Blot验证NAP蛋白能被兔抗NAP多克隆抗体特异识别.
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关键词
gst-nap
重组质粒
蛋白表达
GST标签
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职称材料
题名
GST-NAP融合蛋白可溶性表达及柱上切割GST标签
被引量:
8
1
作者
黄夏冰
康巧珍
傅国
汲振余
刘鑫
机构
郑州大学生命科学学院分子免疫学实验室
河南省医药科学研究院
出处
《郑州大学学报(理学版)》
CAS
北大核心
2015年第4期94-98,共5页
基金
重大新药创制科技重大专项基金项目
编号2012ZX09103301-022
+2 种基金
国家自然科学基金资助项目
编号U1204817
81373119
文摘
利用基因工程的方法,以实验室保存的p MAL-C2X-NAP质粒为模板,PCR扩增NAP基因,构建重组质粒p GEX-NAP.重组质粒通过酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),再经IPTG低温诱导获得可溶性GST-NAP融合蛋白,最后利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂进行纯化,Prescission蛋白酶进行柱上切割去除GST标签.结果表明,p GEX-NAP重组质粒构建正确,在大肠杆菌中经IPTG低温诱导表达,可获得大量可溶性GST-NAP融合蛋白.Prescission蛋白酶柱上切割去除GST标签后,经Western Blot验证NAP蛋白能被兔抗NAP多克隆抗体特异识别.
关键词
gst-nap
重组质粒
蛋白表达
GST标签
Keywords
gst-nap
recombinant plasmid
protein expression
GST-tag
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GST-NAP融合蛋白可溶性表达及柱上切割GST标签
黄夏冰
康巧珍
傅国
汲振余
刘鑫
《郑州大学学报(理学版)》
CAS
北大核心
2015
8
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