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The U-box ubiquitin ligase TUD1 promotes brassinosteroid-induced GSK2 degradation in rice 被引量:7
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作者 Dapu Liu Xiaoxing Zhang +11 位作者 Qingliang Li Yunhua Xiao Guoxia Zhang Wenchao Yin Mei Niu Wenjing Meng Nana Dong Jihong Liu Yanzhao Yang Qi Xie Chengcai Chu Hongning Tong 《Plant Communications》 SCIE CSCD 2023年第2期107-118,共12页
Brassinosteroids(BRs)are a class of steroid hormones with great potential for use in crop improvement.De-repression is usually one of the key events in hormone signaling.However,how the stability of GSK2,the central n... Brassinosteroids(BRs)are a class of steroid hormones with great potential for use in crop improvement.De-repression is usually one of the key events in hormone signaling.However,how the stability of GSK2,the central negative regulator of BR signaling in rice(Oryza sativa),is regulated by BRs remains elusive.Here,we identify the U-box ubiquitin ligase TUD1 as a GSK2-interacting protein by yeast two-hybrid screening.We show that TUD1 is able to directly interact with GSK2 and ubiquitinate the protein.Phenotypes of the tud1 mutant are highly similar to those of plants with constitutively activated GSK2.Consistent with this finding,GSK2 protein accumulates in the tud1 mutant compared with the wild type.In addition,inhibition of BR synthesis promotes GSK2 accumulation and suppresses TUD1 stability.By contrast,BRs can induce GSK2 degradation but promote TUD1 accumulation.Furthermore,the GSK2 degradation process is largely impaired in tud1 in response to BR.In conclusion,our study demonstrates the role of TUD1 in BR-induced GSK2 degradation,thereby advancing our understanding of a critical step in the BR signaling pathway of rice. 展开更多
关键词 BRASSINOSTEROID TUD1 gsk2 signal transduction UBIQUITINATION
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薯蓣皂苷通过GSK3β/Nrf2/HO-1通路改善尿酸诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的作用及机制研究 被引量:5
2
作者 周丽娟 张伟梁 +3 位作者 刘瑞琦 冯嘉树 黄颖娟 伍新林 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期342-348,共7页
目的探讨薯蓣皂苷(dioscin)对尿酸(uric acid,UA)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激损伤的影响及分子机制。方法将HK-2细胞分为正常组、模型组(尿酸刺激造模)、条件对照组(尿酸+DMSO)和薯蓣皂苷组(尿酸+薯蓣皂苷)。通过尿酸诱导HK-... 目的探讨薯蓣皂苷(dioscin)对尿酸(uric acid,UA)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激损伤的影响及分子机制。方法将HK-2细胞分为正常组、模型组(尿酸刺激造模)、条件对照组(尿酸+DMSO)和薯蓣皂苷组(尿酸+薯蓣皂苷)。通过尿酸诱导HK-2细胞氧化应激损伤模型;采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞活性氧(ROS)水平,Real-time PCR法检测糖原合成激酶3(GSK3β)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)在mRNA水平的表达,Western Blot法检测GSK3β、磷酸化糖原合成激酶3(p-GSK3β)、Nrf2及HO-1在蛋白水平的表达。结果经尿酸刺激后,HK-2细胞的活力明显下降,ROS水平明显升高(均P<0.001)。经薯蓣皂苷治疗后,HK-2细胞的活力增加,ROS水平明显降低(均P<0.001)。在蛋白及mRNA水平上,尿酸刺激后Nrf2和HO-1的表达均下降,薯蓣皂苷干预后Nrf2和HO-1表达均明显增加(均P<0.001)。在蛋白水平上,模型组细胞p-GSK3β/GSK3β比值较正常组明显下降,经薯蓣皂苷干预后p-GSK3β/GSK3β比值升高(均P<0.001)。结论薯蓣皂苷可能是通过促进GSK3β的磷酸化,激活Nrf2/HO-1通路,从而缓解尿酸诱导的HK-2细胞氧化应激损伤。 展开更多
关键词 薯蓣皂苷 尿酸 HK-2细胞 GSK3β/Nrf2/HO-1通路 氧化应激
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青藤碱调节GSK3β/Nrf2/HO-1及NF-κB信号通路对帕金森病小鼠的神经保护作用 被引量:2
3
作者 张玲玉 何长宏 +3 位作者 赵忠正 倪浩杰 易浪 董燕 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期607-614,共8页
目的基于GSK3β/Nrf2/HO-1及NF-κB信号通路探讨青藤碱(Sinomenine,SIN)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠的干预作用及机制。方法将C57BL/6小鼠,随机分为6组:正常组、模型组、阳性药组(左旋多巴,75 mg·kg^(-1))及青藤碱低... 目的基于GSK3β/Nrf2/HO-1及NF-κB信号通路探讨青藤碱(Sinomenine,SIN)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠的干预作用及机制。方法将C57BL/6小鼠,随机分为6组:正常组、模型组、阳性药组(左旋多巴,75 mg·kg^(-1))及青藤碱低、中、高剂量组(20、40、80 mg·kg^(-1)),每组8只。腹腔注射20 mg·kg^(-1)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),每天1次,共造模5 d。在注射MPTP后1 h进行灌胃给药,每天1次,共12 d。在给药第11天对小鼠进行爬杆实验,第12天进行转棒实验,测试小鼠行为学变化。采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6含量;RT-qPCR法检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平;Western Blot法检测脑组织中TH、Nrf2、HO-1、p-GSK3β、GSK3β、p-IκB、IκB、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠的自动转身潜伏期(T-turn)明显延长(P<0.05),掉落次数显著增多(P<0.001);脑组织中TH蛋白表达水平显著降低(P<0.01),IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平显著升高(P<0.001);血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05,P<0.01);脑组织中p-GSK3β/GSK3β、Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.001),p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著升高(P<0.001)。与模型组比较,青藤碱中、高剂量组小鼠的T-turn明显缩短(P<0.05,P<0.001),掉落潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),掉落次数显著减少(P<0.001),脑组织中TH蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.001),血清TNF-α水平明显降低(P<0.05);各给药组小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平均显著降低(P<0.001),血清IL-1β、IL-6水平显著降低(P<0.01,P<0.001),脑组织中p-GSK3β/GSK3β、Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著降低(P<0.001)。结论青藤碱可通过调节帕金森病小鼠脑内GSK3β/Nrf2/HO-1和NF-κB通路,增强抗氧化应激能力和抑制神经炎症,从而发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 青藤碱 帕金森病 GSK3β/Nrf2/HO-1通路 NF-κB通路 神经炎症 氧化应激 小鼠
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基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响
4
作者 黄贺明 于贺美 韩晴 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期1668-1672,共5页
目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,... 目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。 展开更多
关键词 细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路 芪黄苁蓉通便散贴敷 肾衰竭 肠道菌群 肾功能
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定心方Ⅰ号方通过调控GSK3β/Nrf2/HO-1通路防治大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制研究 被引量:10
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作者 刘晓瑜 顾民华 +4 位作者 徐煜凌 何培坤 洪睦铿 陈育尧 贾钰华 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1265-1270,共6页
目的探究定心方Ⅰ号方(Dingxin RecipeⅠ,DXRⅠ)防治大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的机制。方法将36只大鼠随机分为假手术组,MIRI模型组,胺碘酮组,定心方Ⅰ号方低、中、高剂量组。假手术组、MIR... 目的探究定心方Ⅰ号方(Dingxin RecipeⅠ,DXRⅠ)防治大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的机制。方法将36只大鼠随机分为假手术组,MIRI模型组,胺碘酮组,定心方Ⅰ号方低、中、高剂量组。假手术组、MIRI模型组及胺碘酮组给予生理盐水灌胃,定心方Ⅰ号方各组大鼠分别给予不同剂量的定心方Ⅰ号方灌胃,连续灌胃7 d。在末次给药2 h后,采取结扎左前降支30 min后再复灌1 h的方法复制大鼠缺血再灌注模型。胺碘酮组大鼠术前10 min尾静脉注射5 mg·kg-1盐酸胺碘酮注射液。复制模型成功后取材,HE染色检测心脏组织病理形态学变化,采用相关试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶(Creatine kinase isoenzymes,CK-MB)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(Rat Cardiac TroponinⅠ,cTn-Ⅰ)、还原型谷胱甘肽(Reduced glutathione,GSH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD),Western Blot法检测心脏组织中糖原合成酶激酶-3(synthase kinase-3β,GSK3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3(Phosphorylated synthase kinase-3β,p-GSK3β)、转录因子NF-E2相关因子(Nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf-2)、血红素氧合酶(Heme oxygenase-1,HO-1)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X Protein,Bax)等蛋白的表达水平。结果HE染色结果显示,与假手术组比较,MIRI模型组心肌细胞出现了水肿和坏死,伴有局部出血和中性粒细胞浸润,而不同浓度的定心方Ⅰ号方可改善上述病理变化;相关检测试剂盒测定结果显示,与假手术组比较,MIRI模型组中的CK-MB、LDH、cTn-Ⅰ和MDA浓度明显升高(P<0.01),GSH和SOD活性明显下降(P<0.01),而定心方Ⅰ号方中、高剂量组可不同程度地抑制CK-MB、LDH、cTn-Ⅰ和MDA的表达(P<0.05,P<0.01),升高GSH和SOD活性(P<0.05,P<0.01);Western Blot结果显示,与MIRI模型组比较,不同浓度的定心方Ⅰ号方均可以抑制p-GSK3和Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),且中、高剂量组均可促进Nrf-2、HO-1和Bcl-2蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论定心方Ⅰ号方可以缓解心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制GSK3β磷酸化,激活Nrf2/HO-1通路,进而抑制氧化应激有关。 展开更多
关键词 定心方Ⅰ号方 心肌缺血再灌注损伤 氧化应激 GSK3β/Nrf2/HO-1信号通路 大鼠
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广义斯坦纳系GS_(k+1)(2,k,v,g)的一个构造方法及简单应用 被引量:1
6
作者 吴佃华 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2002年第4期50-53,共4页
给出了广义斯坦纳系GSk+1(2,k,v,g)的一个递推构造方法,并给出了当k=4时该方法的一个简单应用.
关键词 GSk+1(2 k v g) 广义斯坦纳系 常重量码 k-^**GD 递推构造方法 区组 H-设计
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HBV通过Nrf2/GSK3β信号通路下调PTEN的表达 被引量:4
7
作者 阮晔琳 蒋永芳 +3 位作者 王文龙 马静 贺波 陈梦璇 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1009-1014,共6页
目的:探讨HBV感染对第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达的影响,以及可能的分子作用机制。方法:将HepG2细胞和HepG2.2.15细胞于适宜条件下培养48 h,采... 目的:探讨HBV感染对第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达的影响,以及可能的分子作用机制。方法:将HepG2细胞和HepG2.2.15细胞于适宜条件下培养48 h,采用蛋白质印迹法检测HepG2和HepG2.2.15细胞中PTEN,核因子红细胞介素2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和磷酸化糖原合成酶激酶3β(phosphatace glycogen synthetase kinase-3β,pGSK3β)蛋白质表达。将空白质粒(EV)和表达Nrf2的质粒pWXL-Nrf2分别瞬时转染HepG2和HepG2.2.15细胞,用25 nmol/L的LiCl直接干预HepG2细胞和HepG2.2.15细胞,均培养48 h后采用蛋白质印迹法分别检测各组HepG2和HepG2.2.15细胞中Nrf2,pGSK3β和PTEN蛋白表达情况。结果:与HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞中PTEN的表达明显下降,而Nrf2和pGSK3β蛋白表达增加(均P<0.05)。转染p WXL-Nrf2质粒后,细胞的Nrf2和p GSK3β蛋白明显升高,而PTEN蛋白表达明显下降(均P<0.05)。GSK3β抑制剂LiCl处理后,Nrf2和pGSK3β蛋白表达上调,PTEN蛋白表达明显下调(均P<0.05)。结论:HBV可能通过Nrf2/GSK3β信号通路下调PTEN表达,这或为肝细胞癌的靶向治疗提供新思路。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 Nrf2/GSK3β信号通路 PTEN 肝细胞癌
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Zeste基因增强子同源物2抑制剂减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的神经元氧化应激和铁死亡 被引量:2
8
作者 柳亚珍 孙海伟 +4 位作者 汪继 朱建良 马丽梅 肖盐 刘励军 《中国急救医学》 CAS CSCD 2023年第6期472-480,共9页
目的探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126在神经元缺血-再灌注损伤中的作用及机制。方法采用海马神经元HT22细胞制备氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型。细胞分为正常对照组(Control组)、OGD/R模型组(OGD/R组)和OGD/R模型+低、中、... 目的探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126在神经元缺血-再灌注损伤中的作用及机制。方法采用海马神经元HT22细胞制备氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型。细胞分为正常对照组(Control组)、OGD/R模型组(OGD/R组)和OGD/R模型+低、中、高浓度EZH2抑制剂组(OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组)。采用CCK-8法、流式细胞术检测各组HT22细胞损伤,相应试剂盒检测细胞氧化应激指标活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值。通过荧光探针C11 BODIPY 581/591和FerroOrange检测细胞内铁死亡指标脂质过氧化物(Lipid ROS)和Fe^(2+)含量。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记法(Western blot)实验检测细胞EZH2、NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达。结果与Control组比较,OGD/R组HT22细胞活力降低,细胞死亡率升高,细胞内ROS水平升高,MDA含量增加,GSH/GSSG比值减少,Lipid ROS、Fe^(2+)含量增加,EZH2的mRNA和蛋白表达升高,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均降低(P值均<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组HT22细胞活力均升高,细胞死亡率均下降,细胞内ROS水平均下降,MDA含量均减少,GSH/GSSG比值均增加,Lipid ROS、Fe^(2+)含量均减少,EZH2的mRNA和蛋白表达均降低,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均升高(P值均<0.05)。结论EZH2抑制剂GSK126可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤,其机制可能与NRF2/HO-1通路抑制氧化应激和SLC7A11/GPX4通路抑制铁死亡有关。 展开更多
关键词 Zeste基因增强子同源物2(EZH2) GSK126(EZH2抑制剂) 氧糖剥夺/再灌注(OGD/R) 铁死亡
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玉泉丸对糖尿病肾病大鼠GSK⁃3β/Nrf2通路及YKL⁃40表达的影响 被引量:14
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作者 陈烨 贾崇高 +1 位作者 唐英骞 王昱 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期61-66,共6页
目的探讨玉泉丸对糖尿病肾病大鼠GSK⁃3β/Nrf2通路及肾小球内皮损伤标志物YKL⁃40表达的影响。方法采用高脂高糖饲料喂养结合一次性腹腔注射链脲佐菌素制备大鼠糖尿病肾病模型,大鼠随机分为正常组,模型组,玉泉丸低、中、高(4、8、12 g/kg... 目的探讨玉泉丸对糖尿病肾病大鼠GSK⁃3β/Nrf2通路及肾小球内皮损伤标志物YKL⁃40表达的影响。方法采用高脂高糖饲料喂养结合一次性腹腔注射链脲佐菌素制备大鼠糖尿病肾病模型,大鼠随机分为正常组,模型组,玉泉丸低、中、高(4、8、12 g/kg)剂量组和二甲双胍(50 mg/kg)组(阳性对照),每组10只。全自动生化分析仪检测血糖、甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素和24 h尿微量白蛋白水平,HE染色观察肾组织病理学变化并评分,ELISA检测血清YKL⁃40、TNF⁃α、IL⁃6、内皮素(ET)水平及肾组织SOD、CAT活性和MDA水平,免疫组织化学法检测肾组织YKL⁃40表达,Western blot检测肾组织GSK⁃3β、p⁃GSK⁃3β、Nrf2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾组织病理学评分,血糖,甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素、24 h尿微量白蛋白水平,YKL⁃40、TNF⁃α、IL⁃6、ET、MDA水平和YKL⁃40阳性表达指数升高(P<0.01),SOD、CAT活性,p⁃GSK⁃3β/GSK⁃3β、Nrf2蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,玉泉丸低、中、高剂量组和二甲双胍组大鼠肾组织病理学评分、血糖、甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素、24 h尿微量白蛋白、YKL⁃40、TNF⁃α、IL⁃6、ET、MDA水平和YKL⁃40阳性表达指数降低(P<0.01),SOD、CAT活性、p⁃GSK⁃3β/GSK⁃3β和Nrf2蛋白表达升高(P<0.01)。结论玉泉丸可降低糖尿病肾病大鼠肾小球内皮损伤标志物YKL⁃40表达,减轻氧化应激和炎症反应,可能与激活GSK⁃3β/Nrf2通路有关。 展开更多
关键词 玉泉丸 糖尿病肾病 GSK⁃3β/Nrf2 YKL⁃40
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基于TRPM2/Akt/GSK3β通路探讨24-乙酰泽泻醇A保护脑缺血再灌注损伤脑微血管内皮细胞的机制 被引量:5
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作者 李惠红 邓云飞 +3 位作者 魏伟 詹增土 林丽斌 薛偕华 《康复学报》 CSCD 2023年第4期317-324,共8页
目的:探讨24-乙酰泽泻醇A(24A)改善小鼠脑缺血再灌注后脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的作用机制。方法:将45只雄性10周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、24A组,每组15只。模型组、24A组采用20 min双侧颈总动脉结扎后再... 目的:探讨24-乙酰泽泻醇A(24A)改善小鼠脑缺血再灌注后脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的作用机制。方法:将45只雄性10周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、24A组,每组15只。模型组、24A组采用20 min双侧颈总动脉结扎后再灌注的方法构建小鼠脑缺血再灌注损伤(CI/RI)模型,假手术组小鼠只分离颈总动脉和迷走神经,不结扎。24 A组采用24 A灌胃,剂量为30 mg/(kg·d);假手术组和模型组则给予等体积的生理盐水进行灌胃,3组均灌胃1次/d,连续干预7 d。分别采用神经功能缺损评分(mNSS)评估小鼠神经功能受损程度;采用新物体识别测试(NORT)和水迷宫(MWM)评价小鼠认知功能;采用免疫荧光法检测内皮细胞CD31表达;采用Western blot法检测脑组织闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、瞬时受体电位离子通道-2(TRPM2)、磷酸化苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶-3(p-GSK3β)蛋白表达水平。结果:①神经功能:与假手术组比较,模型组mNSS在第1、3、5、7天均明显升高(P<0.05);与模型组比较,24A组第3、7天mNSS明显降低(P<0.05)。②认知功能:与假手术组比较,模型组NORT 1、24 h识别指数明显降低(P<0.05);与模型组比较,24A组NORT 1、24 h识别指数明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组干预后第2~4天逃避潜伏期明显延长,穿越目标平台次数明显减少(P<0.05);与模型组比较,24A组干预后第3、4天逃避潜伏期明显缩短,穿越目标平台次数明显增加(P<0.05)。③内皮细胞CD31、ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达:假手术组CD31荧光表达较为密集,呈现红色荧光;与假手术组比较,模型组CD31荧光表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,24A组CD31荧光表达明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显下降(P<0.05);与模型组比较,24A组ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显升高(P<0.05)。④p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达:与假手术组比较,模型组p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2表达明显增加,p-Akt、p-GSK3β表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,24A组p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2蛋白表达水平明显下降,p-Akt、p-GSK3β表达明显增加(P<0.05)。结论:24A可有效改善CI/RI小鼠的神经功能、认知功能,降低炎症反应,改善BMECs损伤,其机制可能与TRPM2/Akt/GSK3β通路的调控有关。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 脑缺血再灌注 24-乙酰泽泻醇A 脑微血管内皮细胞 TRPM2/AKT/GSK3β通路
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萝卜硫素通过下调Cox-2/Akt/GSK3β信号传导抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖 被引量:2
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作者 杨丽亚 刘彩玉 《中国麻风皮肤病杂志》 2019年第8期476-479,504,共5页
目的:明确萝卜硫素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡的影响及其对Cox-2/Akt/GSK3β信号传导相关蛋白水平的影响。方法:体外培养皮肤鳞状细胞癌A431细胞株,分为不同剂量(30μM,60μM,120μM)萝卜硫素组、单纯顺铂组及顺铂+萝卜硫... 目的:明确萝卜硫素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡的影响及其对Cox-2/Akt/GSK3β信号传导相关蛋白水平的影响。方法:体外培养皮肤鳞状细胞癌A431细胞株,分为不同剂量(30μM,60μM,120μM)萝卜硫素组、单纯顺铂组及顺铂+萝卜硫素组,采用CCK8法、流式细胞术分别检测A431细胞相对存活率及凋亡率,Western Blot检测了A431细胞中Survivin、Casepase-3、Cox-2、Akt、p-Akt、GSK3β及p-GSK3β蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,60μM及120μM萝卜硫素组、单纯顺铂组及顺铂+萝卜硫素组细胞相对存活率显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率显著增高(均P<0.05),Survivin、Cox-2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),而Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);120μM萝卜硫素组与顺铂组比较,细胞相对存活率、细胞凋亡率,Survivin、Cox-2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达水平及Caspase-3蛋白表达,无明显统计学差异(P>0.05)。结论:萝卜硫素可通过诱导A431细胞凋亡、抑制细胞增殖发挥抗肿瘤作用,其机制可能与抑制Cox-2/Akt/GSK3β信号通路活化有关。 展开更多
关键词 萝卜硫素 人皮肤鳞状细胞癌细胞 增殖 凋亡 Cox-2/Akt/GSK3β信号通路
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GSK3β/eEF2K信号通路对小鼠肺纤维化过程的影响
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作者 覃超群 黄斌 +5 位作者 阳芳 王昌明 肖影 莫艳菊 廖艺 高枫 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期32-37,共6页
目的:探讨糖原合成酶激酶-3(GSK3β)/真核延伸因子激酶2(eEF2K)信号通路对肺纤维化进程的影响,为临床治疗肺纤维化寻找新的思路。方法:采用一次性气管注射法构建C57BL/6雄性小鼠博莱霉素肺纤维化模型,造模14 d后将动物分成模型组、阴性... 目的:探讨糖原合成酶激酶-3(GSK3β)/真核延伸因子激酶2(eEF2K)信号通路对肺纤维化进程的影响,为临床治疗肺纤维化寻找新的思路。方法:采用一次性气管注射法构建C57BL/6雄性小鼠博莱霉素肺纤维化模型,造模14 d后将动物分成模型组、阴性抑制组与抑制组(n=5),另设空白组不作处理。抑制组使用腹腔注射TDZD-8(4 mg/kg),阴性抑制组腹腔注射二甲基亚砜(DMSO)溶液,28 d后处死采集指标。采用苏木精-伊红染色法检测小鼠肺脏病变情况;试剂盒水解法检测肺组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量;采用Western blot法检测肺脏中GSK3β、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、eEF2K、p-eEF2K(Ser70)、p-eEF2K(Ser392)、p-eEF2K(Ser470)、基质金属蛋白酶-2前体蛋白(pro-MMP-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达水平,使用免疫组织化学法检测肺脏中MMP-2、胶原蛋白I(Col I)、胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)的表达。结果:与空白组相比,模型组中GSK3β、p-GSK3β、p-eEF2K(Ser70)、p-eEF2K(Ser392)、p-eEF2K(Ser470)、pro-MMP-2、MMP-2、Col I、ColⅢ、α-SMA蛋白表达水平升高,eEF2K蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组相比,抑制组GSK3β、p-GSK3β、p-eEF2K(Ser70)、p-eEF2K(Ser392)、p-eEF2K(Ser470)、pro-MMP-2、MMP-2、Col I、ColⅢ、α-SMA蛋白表达降低,eEF2K蛋白表达升高(P<0.05)。结论:GSK3β能通过Ser70、Ser392、Ser470这3个位点磷酸化激活eEF2K,增加纤维化指标含量,促进肺纤维化形成,加重肺组织病变。 展开更多
关键词 肺纤维化 小鼠 GSK3β/eEF2K MMP-2 TDZD-8
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Ribonuclease H-like gene SMALL GRAIN2 regulates grain size in rice through brassinosteroid signaling pathway 被引量:5
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作者 Yunshuai Huang Hui Dong +19 位作者 Changling Mou Ping Wang Qixian Hao Min Zhang Hongmin Wu Fulin Zhang Tengfei Ma Rong Miao Kai Fu Yaping Chen Ziyan Zhu Cheng Chen Qikai Tong Zhuoran Wang Shirong Zhou Xi Liu Shijia Liu Yunlu Tian Ling Jiang Jianmin Wan 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2022年第10期1883-1900,共18页
Grain size is a key agronomic trait that determines the yield in plants.Regulation of grain size by brassinosteroids(BRs)in rice has been widely reported.However,the relationship between the BR signaling pathway and g... Grain size is a key agronomic trait that determines the yield in plants.Regulation of grain size by brassinosteroids(BRs)in rice has been widely reported.However,the relationship between the BR signaling pathway and grain size still requires further study.Here,we isolated a rice mutant,named small grain2(sg2),which displayed smaller grain and a semi-dwarf phenotype.The decreased grain size was caused by repressed cell expansion in spikelet hulls of the sg2 mutant.Using map-based cloning combined with a Mut Map approach,we cloned SG2,which encodes a plant-specific protein with a ribonuclease H-like domain.SG2 is a positive regulator downstream of GLYCOGEN SYNTHASE KINASE2(GSK2)in response to BR signaling,and its mutation causes insensitivity to exogenous BR treatment.Genetical and biochemical analysis showed that GSK2 interacts with and phosphorylates SG2.We further found that BRs enhance the accumulation of SG2 in the nucleus,and subcellular distribution of SG2 is regulated by GSK2 kinase activity.In addition,Oryza sativa OVATE family protein 19(OsOFP19),a negative regulator of grain shape,interacts with SG2 and plays an antagonistic role with SG2 in controlling gene expression and grain size.Our results indicated that SG2 is a new component of GSK2-related BR signaling response and regulates grain size by interacting with Os OFP19. 展开更多
关键词 BR signaling grain size gsk2 Oryza sativa OsOFP19 SG2
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Zeste基因增强子同源物2抑制剂GSK126调控U87细胞株来源胶质瘤干细胞的干性特征 被引量:1
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作者 赵国政 张卫 +1 位作者 冯鸣 周幽心 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期2390-2392,共3页
目的:观察果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126对U87来源胶质瘤干细胞(U87s)干性维持、成球及侵袭能力的影响。方法:通过中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库,验证EZH2表达对胶质瘤患者预后的影响,同时对比U87与U87s中EZH2的表... 目的:观察果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126对U87来源胶质瘤干细胞(U87s)干性维持、成球及侵袭能力的影响。方法:通过中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库,验证EZH2表达对胶质瘤患者预后的影响,同时对比U87与U87s中EZH2的表达水平。免疫磁珠筛选CD133阳性的U87s进行干细胞培养形成稳定传代的胶质瘤干细胞球。通过GSK126和Si-EZH2处理U87s构建GSK126处理组、Si-EZH2处理组、Si-EZH2+GSK126的联合处理组及空白组,来检测U87s干性维持、成球及侵袭能力,组间比较采用独立样本t检验。结果:高表达EZH2患者的生存期明显低于低表达EZH2患者(风险比=1.744,P<0.05)。胶质瘤干细胞中EZH2表达明显高于胶质瘤细胞(0.738±0.024比0.396±0.030,t=8.936,P<0.05)。Si-EZH2处理组的EZH2及下游H3K27me3的表达低于空白组(0.338±0.056比0.926±0.032,t=9.080,P<0.05;0.444±0.034比0.691±0.030,t=5.056,P<0.05)。同时Si-EZH2处理组的干细胞分子标记物CD133、NESTIN表达低于空白组(0.198±0.036比0.824±0.027,t=13.900,P<0.05;0.282±0.023比0.597±0.070,t=4.290,P<0.05)。而GSK126处理组和空白组的EZH2表达无差异,GSK126处理组的H3K27me3、CD133、NESTIN表达低于空白组(0.509±0.044比0.704±0.015,t=4.154,P<0.05;0.249±0.026比0.530±0.025,t=7.763,P<0.05;0.124±0.018比0.424±0.018,t=11.720,P<0.05)。Si-EZH2+GSK126的联合处理组EZH2表达低于GSK126处理组(0.380±0.056比0.735±0.052,t=4.646,P<0.05)。结论:EZH2在胶质瘤干细胞中高表达。GSK126可以通过竞争性抑制EZH2甲基转移酶,从而抑制了U87s的干性特征。 展开更多
关键词 胶质瘤干细胞 Zeste基因增强子同源物2 Zeste基因增强子同源物2抑制剂GSK126
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组蛋白甲基转移酶EZH2调控脓毒症诱导的T细胞功能障碍的作用及分子机制 被引量:1
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作者 李哲 赵冬旸 +1 位作者 周晓慧 唐伦先 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期357-361,共5页
目的探讨组蛋白甲基转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)调控脓毒症T淋巴细胞功能失调的作用及机制。方法按随机数字表法将24只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术(CLP)+二甲基亚砜(DMSO)组〕及EZH2选择性... 目的探讨组蛋白甲基转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)调控脓毒症T淋巴细胞功能失调的作用及机制。方法按随机数字表法将24只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术(CLP)+二甲基亚砜(DMSO)组〕及EZH2选择性抑制剂干预组(CLP+GSK126组),每组8只。采用CLP法制备脓毒症小鼠模型;假手术组小鼠不结扎穿刺盲肠,其余操作同CLP+DMSO组。CLP+DMSO组及CLP+GSK126组小鼠术后立即分别腹腔注射DMSO或GSK126(10 mg/kg)。术后24 h处死小鼠取肠系膜淋巴结,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞EZH2表达、T淋巴细胞凋亡率、细胞增殖标志物ki-67抗原阳性T淋巴细胞(ki-67^(+))比例、γ-干扰素阳性T淋巴细胞(IFN-γ^(+))比例、程序性死亡受体-1阳性T淋巴细胞(PD-1+)比例及程序性死亡配体-1阳性T淋巴细胞(PD-L1^(+))比例。结果与假手术组相比,CLP+DMSO组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞EZH2表达升高。与CLP+DMSO组相比,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结CD3+比例升高(0.70±0.02比0.50±0.07,P<0.01),表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞数量;同时,CLP+GSK126组淋巴结CD4^(+)及CD8^(+)细胞中ki-67^(+)比例显著上升(CD4^(+):0.74±0.05比0.63±0.04,CD8^(+):0.82±0.06比0.70±0.04,均P<0.05),表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结增殖活性较高的T淋巴细胞比例;另外,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞凋亡率与CLP+DMSO组比较差异无统计学意义〔CD4^(+):(21.53±2.87)%比(20.48±3.21)%,CD8^(+):(8.34±1.02)%比(7.71±1.38)%,均P>0.05〕,表明抑制EZH2对脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞凋亡无明显影响。与CLP+DMSO组相比,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结IFN-γ^(+)CD4^(+)、IFN-γ^(+)CD8^(+)比例也显著增加(IFN-γ^(+)CD4^(+):0.31±0.11比0.14±0.06,IFN-γ^(+)CD8^(+):0.30±0.10比0.13±0.06,均P<0.05),表明抑制EZH2可增强脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞IFN-γ分泌能力;同时,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结PD-1+CD8^(+)比例较CLP+DMSO组显著下降(0.092±0.006比0.135±0.004,P<0.01),表明抑制EZH2可降低脓毒症小鼠淋巴结CD8^(+)细胞PD-1的表达量,但对PD-L1^(+)比例无明显影响。结论EZH2参与了脓毒症诱导的T淋巴细胞功能障碍的调控,该作用可能部分通过调节PD-1表达介导。 展开更多
关键词 脓毒症 T淋巴细胞 组蛋白甲基转移酶 EZH2选择性抑制剂GSK126 程序性死亡受体-1
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