文摘目的:构建人血管抑素K1-3的重组酵母胞内表达质粒PH IL-D2/K1-3,获得重组目的蛋白。方法:从胎儿肝脏组织用RT-PCR方法扩增人血管抑素K1-3目的基因,克隆至酵母胞内表达质粒PH IL-D2中,线性化后转化到毕赤酵母GS115胞内,经PCR和Sourthern杂交筛选出阳性转化子,并用甲醇诱导表达。表达产物进行SDS-PAGE(12%)和W estern b lot检测,经赖氨酸亲和层析柱纯化后,用Lowry法测定蛋白含量,并进行生物活性测定。结果:SDS-PAGE和W estern b lot结果显示,表达蛋白质的相对分子量为30kd左右,低糖基化。Lowry法测定蛋白表达量为6.8mg/L。活性测定实验表明重组血管抑素能特异抑制人血管内皮细胞的增殖。结论:在毕赤酵母GS115胞内成功表达了人血管抑素K1-3重组蛋白。
文摘目的研究中药降糖复方水提取物(WEJTD)对自发性2型糖尿病(T2DM)模型KK-Ay小鼠骨骼肌糖代谢PI3K/Akt信号通路的影响。方法将KK-Ay小鼠按随机数法随机分为5组:模型组、盐酸二甲双胍(MH,250 mg/kg)组和WEJTD低、中、高剂量(2、4、8 g/kg)组,C57BL/6J小鼠作为对照组,每天ig给药1次,共12周,对照组和模型组ig等体积蒸馏水。给药12周后,取小鼠血清,ELISA试剂盒法检测胰岛素水平;Trizol法提取肌肉组织中的RNA,荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、糖原合成酶(GS)、胰岛素受体底物(IRS-1)m RNA水平。结果与模型组比较,WEJTD高、中剂量显著上调小鼠血清胰岛素水平、骨骼肌中IRS-1 m RNA水平(P<0.05、0.001);高、中、低剂量均显著下调骨骼肌中GSK-3βm RNA水平,显著上调PI3K、Akt、GLUT-4、GS m RNA水平(P<0.05、0.01、0.001)。结论中药降糖复方通过上调PI3K/Akt信号通路,减少糖原沉积,刺激骨骼肌中葡萄糖转运。
