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LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制 被引量：1
1
作者 黄锐 陈海浚 +3 位作者 韦总当 秦国文 钟书 庞刚 《中西医结合心脑血管病杂志》 2024年第15期2761-2769,共9页
目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组... 目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。 展开更多
关键词 颅内动脉瘤 长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA LncRNA NORAD miR-513b-5p grem1 血管平滑肌细胞 实验研究
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独立生长因子1负调控GREM1基因抑制肝星状细胞增殖与活化实验研究
2
作者 刘刚 朱冬梅 +2 位作者 赵芹 刘晓玲 彭洪 《陕西医学杂志》 CAS 2023年第6期655-659,共5页
目的:探讨独立生长因子1(GFI1)负调控GREM1基因对肝星状细胞(HSC)增殖与活化的影响。方法:选择HSC细胞株LX-2培养并进行相关实验。采用CCK-8法检测GREM1基因和GFI1对LX-2细胞增殖的影响。采用Western blot分析GREM1基因和GFI1对α-平滑... 目的:探讨独立生长因子1(GFI1)负调控GREM1基因对肝星状细胞(HSC)增殖与活化的影响。方法:选择HSC细胞株LX-2培养并进行相关实验。采用CCK-8法检测GREM1基因和GFI1对LX-2细胞增殖的影响。采用Western blot分析GREM1基因和GFI1对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。利用生物信息学方法分析GREM1基因的转录因子并通过染色质免疫共沉淀(CHIP)实验验证GREM1基因是否可与GFI1结合。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测GFI1对GREM1 mRNA的影响。通过抑制GFI1并下调GREM1表达分析GFI1是否通过负调控GREM1抑制LX-2细胞增殖和α-SMA表达。结果:过表达GREM1可促进LX-2细胞增殖及上调α-SMA蛋白表达水平(均P<0.05)。GFI1可能是GREM1的上游转录因子,CHIP实验证实GFI1可与GREM1直接结合。下调GFI1表达可促进GREM1 mRNA表达和LX-2细胞增殖,并上调α-SMA蛋白表达水平(均P<0.05)。下调GREM1表达可以减弱GFI1表达(P<0.05)。结论:GREM1可促进HSC活化,而GFI1可通过负调控GREM1基因抑制HSC增殖与活化。 展开更多
关键词 肝星状细胞 独立生长因子1 grem1基因 增殖 活化 机制
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GREM1在人胆管癌中的表达及临床意义
3
作者 吕秀芳 周晓倩 《交通医学》 2020年第6期573-577,共5页
目的:研究GREM1在人胆管癌(CCA)中的表达,探讨其在临床诊疗中潜在的应用价值。方法:利用公共数据库分析GREM1基因在人体组织器官中表达的差异,应用qRT-PCR和免疫组化染色法检测胆汁淤积性肝硬化大鼠肝组织中GREM1基因和蛋白表达情况。检... 目的:研究GREM1在人胆管癌(CCA)中的表达,探讨其在临床诊疗中潜在的应用价值。方法:利用公共数据库分析GREM1基因在人体组织器官中表达的差异,应用qRT-PCR和免疫组化染色法检测胆汁淤积性肝硬化大鼠肝组织中GREM1基因和蛋白表达情况。检测84例胆管癌患者手术切除的癌组织及配对癌旁组织中GREM1蛋白表达,并分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果:GREM1基因在人体胆囊组织中高表达。与假手术组大鼠相比,胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中GREM1基因和蛋白表达水平显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.0001)。与健康对照者相比,胆管癌组织中GREM1基因表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.0001)。与配对癌旁组织相比,胆管癌组织中GREM1蛋白水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.0001)。GREM1高表达与胆管癌细胞分化、AJCC分级、淋巴结转移和TNM分期均密切相关(P<0.05),与GREM1低表达组相比高表达组患者总体生存率和无病生存率显著缩短,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:GREM1在人胆管癌中高表达,与患者预后不良相关,有望成为胆管癌防治的潜在靶点,也可以作为判断患者预后的指标。 展开更多
关键词 grem1 胆管癌 胆管结扎 细胞外基质
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GREM1对根尖牙乳头干细胞成骨/成牙分化功能的影响机制研究 被引量：5
4
作者 朱行燕 刁树 +1 位作者 杨东梅 范志朋 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期409-415,共7页
目的研究骨形态生成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)拮抗剂Gremlin1(GREM1)对根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs)功能的影响,并探索其机制。方法体外分离培养SCAPs,免疫荧光染色实验检测GREM1在SCAPs的... 目的研究骨形态生成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)拮抗剂Gremlin1(GREM1)对根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs)功能的影响,并探索其机制。方法体外分离培养SCAPs,免疫荧光染色实验检测GREM1在SCAPs的亚细胞定位;利用GREM1shRNA慢病毒转染,敲低GREM1;分别对GREM1敲低组和对照组SCAPs进行成骨诱导,实时荧光定量PCR(Real time-PCR)和Western blot检测转染后GREM1的敲低效果。取两组细胞,成骨诱导7 d后进行碱性磷酸酶(ALP)活性测定,成骨/成牙本质诱导3周后进行茜素红染色,并用Real time-PCR检测成骨诱导0周、1周、2周、3周后成骨/成牙相关基因骨钙素(OCN)、骨桥素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白(DMP1)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)以及成骨/成牙关键转录因子Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、同源盒基因2(DLX2)的表达。取两组细胞,CCK8和流式细胞术检测细胞增殖能力变化;Real time-PCR检测衰老相关基因p53、细胞周期调控因子1(Waf1)和干性相关基因krupple样因子4(KLF4)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的表达,以及BMPs相关基因(BMP2、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP9)的表达。结果免疫荧光实验表明GREM1在胞核内表达量比胞浆中更高;Real time-PCR和Western blot验证了GREM1敲低组的敲低效果。GREM1敲低组ALP活性高于对照组(P<0.05),茜素红染色浅于对照组;OCN、DMP1在1周、2周、3周时表达均有升高,OPN在2周时升高,BSP在3周时升高,DSPP在1周时升高,差异有统计学意义(P<0.05),成骨关键转录因子RUNX2、OSX、DLX2均在不同时段升高,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法和流式细胞术显示GREM1敲低组增殖能力较对照组下降(P<0.05)。与对照组相比,GREM1敲低组BMP2、BMP6、BMP7表达升高,SOX2、KLF4表达升高(P<0.05),P53、Waf1表达下降(P<0.05)。结论GREM1敲低后,能促进SCAPs成骨/成牙分化及干性,抑制SCAPs的增殖及衰老;GREM1对SCAPs的功能作用可能是通过在mRNA水平调控BMP2、BMP6、BMP7的表达实现的。 展开更多
关键词 根尖牙乳头干细胞 grem1 骨形态生成蛋白 成骨/成牙分化
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GREM1对胃癌细胞增殖迁移的作用 被引量：2
5
作者 林雅静 李天捷 +1 位作者 王华 邵世和 《临床检验杂志》 CAS 2019年第6期418-422,共5页
目的检测胃癌细胞中GREM1基因的表达,探讨其对胃癌细胞生物学特性的影响并评估其在胃癌诊断和胃癌患者预后中的临床价值。方法运用数据库分析GREM1基因在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异,评估GREM1基因表达水平对胃癌患者预后的相关性。... 目的检测胃癌细胞中GREM1基因的表达,探讨其对胃癌细胞生物学特性的影响并评估其在胃癌诊断和胃癌患者预后中的临床价值。方法运用数据库分析GREM1基因在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异,评估GREM1基因表达水平对胃癌患者预后的相关性。Western blot检测胃癌细胞系中GREM1蛋白质表达水平。AGS细胞中沉默GREM1基因后,采用平板克隆、Transwell和western blot检测其对胃癌细胞增殖、迁移、上皮间质转化(EMT)发生及Wnt/β-catenint通路的影响。结果 Kaplan-Meier分析表明,GREM1基因高表达患者总体生存率(OS)和无进展生存率(PFS)均降低。GREM1蛋白在AGS细胞系中的表达水平(1.967±0.056)最高。平板克隆、Transwell及western blot实验显示,沉默GREM1基因可导致胃癌细胞的增殖及迁移能力降低(t分别为22.00,29.60;P均<0.01);E-cadherin表达上升(t=10.65,P<0.01),ZEB1、MMP2表达均下降(t分别为10.74和13.67,P均<0.01);Wnt/β-catenin通路中β-catenin、CyclinD1、c-myc、p-GSK3β和PCNA的表达水平均降低(t分别为12.65,16.21,8.74,7.75和8.42;P均<0.01)。结论 GREM1通过激活Wnt/β-catenin诱导EMT发生,促进肿瘤转移和生长。GREM1可作为新的胃癌分子诊断和预后指标。 展开更多
关键词 grem1 胃癌 增殖 迁移 上皮间质转化
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骨形态发生蛋白拮抗剂GREM1作为胃癌肿瘤微环境免疫活性预测指标的临床价值
6
作者 张旭东 李晓宁 +3 位作者 崔海康 杨希 杨兰 张文杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期741-751,共11页
目的:筛选出可预测胃癌(GC)肿瘤微环境(TME)免疫活性的预后基因。方法:收集55例GC患者术后石蜡组织标本及其对应的癌旁组织;从TCGA数据库和GEO数据库中共下载了976例GC患者的转录组数据及临床数据;采用估计算法(ESTIMATE)和反卷积算法(C... 目的:筛选出可预测胃癌(GC)肿瘤微环境(TME)免疫活性的预后基因。方法:收集55例GC患者术后石蜡组织标本及其对应的癌旁组织;从TCGA数据库和GEO数据库中共下载了976例GC患者的转录组数据及临床数据;采用估计算法(ESTIMATE)和反卷积算法(CIBERSORT)分别评估各样本中免疫/基质得分及免疫细胞浸润程度;R语言中的“limma”包筛选差异表达基因(DEGs);采用单变量Cox回归分析筛选具有预后价值的DEGs;qRT-PCR检测枢纽基因mRNA的表达情况;GSEA探究GREM1的潜在生物学功能。采用TISIDB和CellMiner数据库分析GREM1与免疫特征分子及药物敏感性的相关性。结果:免疫评分与GC患者的预后呈正相关;在免疫得分和基质得分高、低分组中共筛选出40个共享的TME相关DEGs;通过对DEGs进行单变量Cox回归分析,得到GREM1、SFRP2、CYP1B1和MGP共4个具有预后意义的共享DEGs。通过比较基因在肿瘤与癌旁组织的表达差异及与免疫微环境的密切程度,发现GREM1最可能对TME中的免疫重塑发挥作用;GREM1的表达与GC患者的临床病理特征(TNM)呈正相关,而与生存率呈负相关;GSEA结果显示GREM1高表达组主要富集于免疫相关通路,GREM1的表达与M2型巨噬细胞呈正相关,而与CD8+T细胞呈负相关;GREM1与免疫抑制剂TGF-β1、免疫增强剂ENTPD1、趋化因子CCL14及受体CCR2呈正相关;GREM1高表达的肿瘤细胞对抗肿瘤药物维莫德吉的治疗敏感性最强。结论:GREM1可作为反映GC TME免疫抑制状态的临床指标。 展开更多
关键词 grem1 胃癌 肿瘤浸润性免疫细胞 肿瘤免疫微环境 预后因子
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CircMYLK通过miR-32-5p/GREM1信号轴调节宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭
7
作者 孙丹 万晓芳 周文婷 《中国优生与遗传杂志》 2023年第2期255-261,共7页
目的探讨环状非编码RNA(CircRNA)MYLK通过微小RNA(miR)-32-5p/GREM1信号轴,对宫颈癌(CC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测CC细胞系(CasKi、HCC94、C-33A、HT3)及人正常宫颈细胞系(Ect1/E6E7)中CircMYLK、miR-32-5p及G... 目的探讨环状非编码RNA(CircRNA)MYLK通过微小RNA(miR)-32-5p/GREM1信号轴,对宫颈癌(CC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测CC细胞系(CasKi、HCC94、C-33A、HT3)及人正常宫颈细胞系(Ect1/E6E7)中CircMYLK、miR-32-5p及GREM1 mRNA表达水平;取对数生长期的CasKi细胞,设置为干扰CircMYLK载体(sh CircMYLK)、阴性对照(sh NC)组、sh Circ MYLK+miR-32-5p抑制物(miR-32-5p inhibitor)组、shCirc MYLK+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组,同时以未转染的细胞作为对照组。检测各组细胞增殖、凋亡、细胞迁移与侵袭、细胞周期素D1(CyclinD1)、GREM1、活化半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase3)及基质金属蛋白酶(MMP)-2、miR-32-5p、GREM1 mRNA、CircMYLK表达水平及miR-32-5p与GREM1、CircMYLK靶向关系。结果与Ect1/E6E7细胞相比,CC细胞系(CasKi、HCC94、C-33A、HT3)中miR-32-5p表达显著降低,CircMYLK、GREM1表达显著增加(P<0.05);与shNC组相比,shCircMYLK组CasKi细胞24h、48h的OD450值、迁移与侵袭细胞数、CyclinD1、CircMYLK、GREM1、MMP-2表达显著降低,细胞凋亡及Cleaved Caspase3、miR-32-5p表达显著增加(P<0.05);miR-32-5p inhibitor逆转了干扰CircMYLK对CasKi细胞的恶性生物学行为。结论干扰CircMYLK表达,可通过上调miR-32-5p进而抑制GREM1表达,阻止CasKi细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 CircMYLK miR-32-5p/grem1信号轴 宫颈癌
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人卵丘细胞GREM1基因表达与卵母细胞发育潜能关系研究
8
作者 林素霞 黄荣富 +5 位作者 吴端宗 王育梅 陈小莉 吴培雅 李金姑 姚建凤 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期535-538,共4页
目的探讨辅助生殖技术中人卵丘细胞GREM1基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系。方法回顾性分析福建泉州市妇幼保健生殖医学中心2012年3月至2014年3月接受卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSIET)治疗的男方因素不孕妇女42例的160个... 目的探讨辅助生殖技术中人卵丘细胞GREM1基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系。方法回顾性分析福建泉州市妇幼保健生殖医学中心2012年3月至2014年3月接受卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSIET)治疗的男方因素不孕妇女42例的160个卵母细胞,以形态学评分标准将正常受精的胚胎分为优质胚胎30个和非优质胚胎70个,移植后剩余胚胎冷冻保存或囊胚培养。根据卵母细胞成熟与否、D3胚胎质量及D5/D6囊胚培养情况,实时荧光PT-PCR分别检测其卵丘细胞中GREM1表达水平的差异。结果成熟卵母细胞的卵丘细胞GREM1表达水平比不成熟卵母细胞高(1.9739±0.5114 vs.1.5105±0.2629,P<0.001),同样在D3优质胚胎中,检测其卵丘细胞GREM1表达水平比非优质胚胎中的高(2.2693±0.4193 vs.1.9263±0.4912,P<0.05);进一步的囊胚培养发现,D5/D6囊胚培养成功的卵丘细胞GREM1表达水平比失败组的明显升高(2.3874±0.2999 vs.1.5943±0.2078,P<0.001)。结论卵丘细胞GREM1表达水平与卵母细胞成熟及胚胎质量有关,成熟的卵母细胞与后期形成的胚胎质量密切相关,检测卵丘细胞GREM1表达可预测胚胎发育潜能。 展开更多
关键词 卵丘细胞 grem1 基因表达 卵子成熟度 胚胎发育潜能
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miR-144-3p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制 被引量：3
9
作者 乔素青 李涵 +3 位作者 曹妍 邢辉 郭红 奉泽锦 《山东医药》 CAS 2021年第7期46-50,共5页
目的探讨微小RNA-144-3p(miR-144-3p)对卵巢癌ES-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用qRT-PCR法检测35例卵巢癌组织和对应癌旁组织中miR-144-3p和骨形态形成拮抗蛋白1(GREM1)mRNA表达。构建miR-144-3p高表达或GREM1敲低的E... 目的探讨微小RNA-144-3p(miR-144-3p)对卵巢癌ES-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用qRT-PCR法检测35例卵巢癌组织和对应癌旁组织中miR-144-3p和骨形态形成拮抗蛋白1(GREM1)mRNA表达。构建miR-144-3p高表达或GREM1敲低的ES-2细胞,采用四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达。TargetScan在线软件预测GREM1的3′UTR含有miR-144-3p的结合位点,双荧光素酶报告基因验证miR-144-3p与GREM1靶向关系。结果与癌旁组织比较,卵巢癌癌组织中miR-144-3p表达降低(P<0.05),GREM1 mRNA表达升高(P<0.05)。miR-144-3p高表达或敲低GREM1,ES-2细胞存活率、迁移和侵袭细胞数降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达降低(P均<0.05)。miR-144-3p在ES-2细胞中负调控GREM1表达,高表达GREM1能部分逆转miR-144-3p高表达对ES-2细胞增殖、迁移和侵袭及PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制作用。结论miR-144-3p高表达可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调GREM1表达及抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。 展开更多
关键词 卵巢癌 微小RNA-144-3p 骨形态形成拮抗蛋白1 细胞增殖 迁移 侵袭
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缺血性股骨头坏死患者血清骨形态形成拮抗蛋白1的水平及其临床意义
10
作者 廖林波 梁俊卿 +5 位作者 农峰 吴昭元 唐毓金 谢克恭 卢贤哲 蓝常贡 《右江医学》 2017年第2期146-149,共4页
目的检测缺血性股骨头坏死患者骨形态形成拮抗蛋白1(GREM1)的表达水平,以研究其临床意义。方法选择2016年4~10月收治的58例缺血性股骨头坏死患者作为观察组,同期选择在体检中心进行健康体检的76名健康者作为观察组,应用酶联免疫吸附法(E... 目的检测缺血性股骨头坏死患者骨形态形成拮抗蛋白1(GREM1)的表达水平,以研究其临床意义。方法选择2016年4~10月收治的58例缺血性股骨头坏死患者作为观察组,同期选择在体检中心进行健康体检的76名健康者作为观察组,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组血清GREM1的表达含量,同时应用常规方法对C-反应蛋白(CRP)进行检测,比较两组间GREM1、CRP水平的表达差异,分析观察组GREM1水平与CRP水平之间的相关性。结果观察组血清GREM1、CRP的表达水平均较对照组显著增高(P<0.01);在观察组中,临床FicatⅢ/Ⅳ期患者血清GREM1的水平较FicatⅠ/Ⅱ期患者升高(P<0.001);经Pearson线性相关性分析发现,观察组患者血清GREM1水平与CRP水平之间的相关性不显著(r=-0.118,P>0.05)。结论缺血性股骨头坏死患者血清GREM1的水平显著升高,提示其可能参与缺血性股骨头坏死的发生与发展。 展开更多
关键词 股骨头坏死 骨形态形成拮抗蛋白1 C-反应蛋白
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