期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到7篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
弓形虫致密颗粒蛋白GRA2真核表达质粒的构建与体外表达 被引量：2
1
作者 李首庆 古钦民 +5 位作者 张加勤 张华楠 丛华 周怀瑜 李瑛 赵群力 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第1期26-28,31,共4页
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA2的真核表达重组质粒。方法设计合成GRA2引物,运用PCR方法扩增其基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(-)而构建重组表达质粒pcDNA3.1-GRA2。脂质体法将构建的重组质粒转染HFF细... 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA2的真核表达重组质粒。方法设计合成GRA2引物,运用PCR方法扩增其基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(-)而构建重组表达质粒pcDNA3.1-GRA2。脂质体法将构建的重组质粒转染HFF细胞,RT-PCR法检测转染细胞中GRA2的表达情况。结果PCR扩增GRA2基因序列正确,构建的重组表达质粒pcDNA3.1-GRA2经PCR、EcoRⅠ/HindⅢ双酶切和测序鉴定正确;转染GRA2基因的细胞,RT-PCR可见目的条带。结论成功获得真核表达重组质粒pcDNA3.1-GRA2,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。 展开更多
关键词 弓形虫 疫苗 致密颗粒蛋白2(gra2) 构建 表达
暂未订购
刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA2全基因的原核重组表达 被引量：3
2
作者 黄敏君 薛峰 +3 位作者 洪彩玲 孙岚 甘绍伯 谷俊朝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第12期1093-1095,1112,共4页
目的克隆弓形虫RH株致密颗粒蛋白2(GRA2)的全长基因,在大肠埃希菌工程菌中重组表达GST-HisGRA2融合蛋白。方法提取弓形虫总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增GRA2基因全长,与pET-41Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠埃希菌RosettaTM(DE3)... 目的克隆弓形虫RH株致密颗粒蛋白2(GRA2)的全长基因,在大肠埃希菌工程菌中重组表达GST-HisGRA2融合蛋白。方法提取弓形虫总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增GRA2基因全长,与pET-41Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠埃希菌RosettaTM(DE3)pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白,然后采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白产物。结果 PCR鉴定弓形虫GRA2全基因重组表达质粒构建正确;诱导表达的GSTHis-GRA2融合重组蛋白分子质量单位为52ku,与预测值相符。结论本研究成功构建了弓形虫GRA2全基因重组蛋白质粒,该质粒能表达GRA2蛋白,为研究GRA2与宿主细胞的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 致密颗粒蛋白gra2 反转录基因克隆 原核表达
原文传递
弓形虫SAG1、GRA2单基因疫苗及SAG1-GRA2复合基因疫苗的免疫效果观察 被引量：4
3
作者 李首庆 古钦民 +1 位作者 杨广民 马寅芙 《中国实验诊断学》 2008年第10期1219-1222,共4页
目的检测SAG1和GRA2基因编码的单基因及复合基因疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果。方法大量制备pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-GRA2、pcDNA3.1-SAG1-GRA2真核表达重组质粒,肌内注射BALB/c小鼠,分别于2周、4周后... 目的检测SAG1和GRA2基因编码的单基因及复合基因疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果。方法大量制备pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-GRA2、pcDNA3.1-SAG1-GRA2真核表达重组质粒,肌内注射BALB/c小鼠,分别于2周、4周后加强免疫一次。另设立pcDNA3.1及PBS对照组。于3次免疫后4周作免疫指标测定(包括ELISA法测定小鼠血清IgG抗体及细胞因子IFN-γ、IL-4,MTT法测定小鼠淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤活性),并观察弓形虫速殖子攻击感染后小鼠的生存时间。结果SAG1-GRA2组小鼠血清IgG抗体、IFN-γ、淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤活性均高于SAG1及GRA2组(P<0.05);各组均未检测到IL-4;复合基因组小鼠生存时间较单基因疫苗组延长(P<0.01)。结论弓形虫SAG1-GRA2复合基因疫苗较SAG1、GRA2单基因疫苗具有更好的免疫保护性。 展开更多
关键词 弓形虫 SAG1 gra2 复合基因 疫苗
暂未订购
弓形虫GRA6-GRA2蛋白表达及检测应用 被引量：1
4
作者 张宁 刘伟 +5 位作者 吴铭洁 夏霖亚 王蕾 殷玉和 石晶 吴丛梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期91-98,共8页
为建立一种敏感性好、特异性强、方便快捷的检测猫弓形虫抗体的方法,本研究通过分子生物学方法、优化合成了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2基因,采用大肠杆菌ER2566表达了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2三种蛋白;表达产物利用His亲和层析柱纯... 为建立一种敏感性好、特异性强、方便快捷的检测猫弓形虫抗体的方法,本研究通过分子生物学方法、优化合成了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2基因,采用大肠杆菌ER2566表达了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2三种蛋白;表达产物利用His亲和层析柱纯化后,经Western blot鉴定三种蛋白表达产物都有较好的抗原特异性;通过ELISA方法进行检测比较,确定GRA6-GRA2蛋白敏感性最高;以GRA6-GRA2蛋白作为标记抗原,制备弓形虫抗体检测试纸条,分别对敏感性对照阳性血清、特异性对照血清进行检测,并与弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清进行对比检测。结果表明:检测敏感性对照阳性血清可检测至1∶256,检测临床常见的猫细小病毒阳性血清、猫杯状病毒阳性血清和猫疱疹病毒阳性血清结果均为阴性;在弓形虫抗体检测试纸条和弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清的对比检测中,阳性率分别为2.42%和2.07%,符合率为99.5%。通过以上结果可知,采用GRA6-GRA2蛋白作为诊断抗原制备的胶体金试纸,具有良好的敏感性和特异性,为弓形虫病的快速诊断提供了切实可行的检测手段。 展开更多
关键词 弓形虫 抗原 GRA6-gra2蛋白
在线阅读 下载PDF
新孢子虫NcGRA2基因真核表达质粒的构建及其在293细胞内的表达
5
作者 金春梅 朱慧敏 +1 位作者 于龙政 张守发 《安徽农业科学》 CAS 2015年第6期147-148,共2页
[目的]为了构建新孢子虫Nc GRA2基因的真核表达载体,探讨重组载体在体外细胞的表达。[方法]从含有Nc GRA2基因的重组质粒p GEX-4T1-Nc GRA2中,用限制性内切酶进行酶切获得带有粘性末端的Nc GRA2基因片段。经琼脂糖凝胶电泳切胶回收Nc G... [目的]为了构建新孢子虫Nc GRA2基因的真核表达载体,探讨重组载体在体外细胞的表达。[方法]从含有Nc GRA2基因的重组质粒p GEX-4T1-Nc GRA2中,用限制性内切酶进行酶切获得带有粘性末端的Nc GRA2基因片段。经琼脂糖凝胶电泳切胶回收Nc GRA2基因片段,与pc DNA3.1载体连接。将构建的真核表达质粒pc DNA3.1-Nc GRA2转染到293细胞中表达。[结果]经酶切分析和序列测定,证实了重组质粒的正确连接。经免疫荧光抗体试验验证pc DNA3.1-Nc GRA2能在293细胞中表达Nc GRA2蛋白。[结论]获得重组质粒pc DNA3.1-Nc GRA2,并能在体外细胞中表达Nc GRA2蛋白,为进一步研究核酸疫苗的动物免疫试验奠定了基础。 展开更多
关键词 新孢子虫 NC gra2 真核表达
在线阅读 下载PDF
刚地弓形虫RH株GRA2分子基因克隆与序列分析
6
作者 张华楠 古钦民 +4 位作者 何深一 丛华 周怀瑜 李瑛 赵群力 《基层医学论坛》 2004年第9期781-782,共2页
目的克隆刚地弓形虫RH株致密颗粒抗原2(Dense Granule Antigen,GKA2)分子基因,为研究使用重组的GKA2分子作为抗原诊断弓形虫病及进行弓形虫分子疫苗研究奠定基础。方法弓形虫DNA的提取。目的基因GKA2片断的扩增、酶切及纯化。目的基因... 目的克隆刚地弓形虫RH株致密颗粒抗原2(Dense Granule Antigen,GKA2)分子基因,为研究使用重组的GKA2分子作为抗原诊断弓形虫病及进行弓形虫分子疫苗研究奠定基础。方法弓形虫DNA的提取。目的基因GKA2片断的扩增、酶切及纯化。目的基因片断的纯化。目的基因的克隆。核酸序列分析。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出的402 bp的GRA2基因片断,与以往报道的RH株GKA2分子有100%的同源性。结论本研究成功地获得了刚地弓形虫KH株的GKA2分子基因,为今后此分子作为抗原诊断弓形虫病及进行弓形虫核酸疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 诊断 分子基因 RH 抗原 克隆 扩增 GRA 结论 基础
在线阅读 下载PDF
华支睾吸虫特异性富甘氨酸2a类抗原基因的克隆、表达和免疫学诊断价值评价 被引量：6
7
作者 许学年 周岩 +6 位作者 张鸿满 包意芳 徐斌 欧阳颐 程娜 黎学铭 冯正 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期91-96,共6页
目的采取免疫学方法筛选华支睾吸虫成虫cDNA表达文库,寻找新的抗原基因。方法使用华支睾吸虫病人混合血清以及华支睾吸虫排泄分泌抗原的免疫小鼠血清,分别免疫学筛选华支睾吸虫成虫λZAP cDNA表达文库;将阳性噬菌体克隆、测序以及核苷... 目的采取免疫学方法筛选华支睾吸虫成虫cDNA表达文库,寻找新的抗原基因。方法使用华支睾吸虫病人混合血清以及华支睾吸虫排泄分泌抗原的免疫小鼠血清,分别免疫学筛选华支睾吸虫成虫λZAP cDNA表达文库;将阳性噬菌体克隆、测序以及核苷酸序列比对分析;将目的基因的编码区克隆至原核表达质粒pET28a(+)中,采用制备不带N端融合标签的天然蛋白的策略表达融合蛋白,使用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化融合蛋白;采用间接ELISA法,检测血清中的特异性抗体,共检测35例华支睾吸虫虫卵粪检阳性血清,36例正常人血清,15例日本血吸虫、15例卫氏并殖吸虫和13例猪囊尾蚴病人血清,评价重组蛋白的免疫学诊断价值。结果发现华支睾吸虫特异性富甘氨酸2a(GRA2a)类抗原基因家族,将其中的Cs4抗原基因植入重组表达质粒pET28a(+)的NcoI位点,成功实现融合蛋白的表达,并进一步纯化得到可溶性重组蛋白。采用间接ELISA法检测血清中的特异性抗体,该ELISA法的敏感性为80.0%,特异性为97.2%,总符合率为88.7%;日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴病人血清的假阳性率分别为6.7%、6.7%和7.7%。经核苷酸序列同源性比较,华支睾吸虫GRA2a类抗原是迄今为止尚未进行功能研究的华支睾吸虫特异性抗原。结论发现华支睾吸虫GRA2a类抗原基因家族;成功构建重组表达质粒,并表达、纯化出可溶性重组蛋白;该抗原具有较高的免疫学诊断价值。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 免疫学筛选 gra2a类抗原 原核表达 ELISA
暂未订购
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部