GPMV F、HN及NP蛋白核酸疫苗的构建及体外表达的研究 被引量：1

1

作者 杨玉菊 徐丹丹 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期150-152,232,共4页

为了更好地预防和控制严重威胁养禽业的鹅副黏病毒病,试验采用基因重组的方法,以F、HN和NP基因作为候选基因,真核表达载体pcDNA3.1(+)作为载体,构建含以上3种基因的DNA疫苗,并用构建的3种DNA疫苗转染293T细胞进行瞬时表达。结果表明:3种... 为了更好地预防和控制严重威胁养禽业的鹅副黏病毒病,试验采用基因重组的方法,以F、HN和NP基因作为候选基因,真核表达载体pcDNA3.1(+)作为载体,构建含以上3种基因的DNA疫苗,并用构建的3种DNA疫苗转染293T细胞进行瞬时表达。结果表明:3种DNA疫苗质粒均能在体外获得表达,表达的蛋白可与抗GPMV抗体发生特异性结合,于荧光显微镜下可见黄绿色荧光,而真核表达载体pcDNA3.1(+)及未转染质粒的293T细胞均未见荧光出现,呈阴性反应。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒(gpmv) F基因 HN基因 NP基因 DNA疫苗 瞬时表达

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GPMV HN基因于禽痘病毒载体中的构建与表达 被引量：2

2

作者 杨玉菊 李曦 +4 位作者 王君伟 马德滨 魏红 吴伟峰 吴疆 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期86-90,共5页

本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒主要保护性抗原基因-HN基因和报告基因-LacZ基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体与禽痘病毒FPV-017共感染鸡胚成纤维(Chicken Embryo Fibroblasts,CEF)细胞,... 本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒主要保护性抗原基因-HN基因和报告基因-LacZ基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体与禽痘病毒FPV-017共感染鸡胚成纤维(Chicken Embryo Fibroblasts,CEF)细胞,通过蓝白筛选获得重组病毒;间接免疫荧光试验结果显示重组禽痘病毒中HN基因在CEF细胞中获得表达,并且表达产物具有良好的反应原性;为进一步的重组禽痘病毒的免疫保护性的研究奠定基础。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 HN基因 重组禽痘病毒

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GPMV NA-1株致弱F基因真核质粒的构建及免疫试验

3

作者 李国江 张立春 +3 位作者 张秀峰 姜成 刘立明 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1427-1431,共5页

将本实验室致弱的GPMV F基因克隆到真核表达载体pCI-neo中,构建pCI-rf质粒,经脂质体法转染BHK细胞后,Western blotting检测pCI-rf能正常表达。采用pCI-rf和本实验室构建的含有GPMV的F基因的真核表达质粒pCI-f分别肌注7~9日龄雏鸡,间接EL... 将本实验室致弱的GPMV F基因克隆到真核表达载体pCI-neo中,构建pCI-rf质粒,经脂质体法转染BHK细胞后,Western blotting检测pCI-rf能正常表达。采用pCI-rf和本实验室构建的含有GPMV的F基因的真核表达质粒pCI-f分别肌注7~9日龄雏鸡,间接ELISA检测抗体,并采用淋巴细胞增殖试验和特异性CTL杀伤活性试验对试验鸡的细胞免疫进行检测,最后做攻毒保护试验。结果表明,pCI-f和pCI-rf能诱导试验鸡产生细胞免疫和体液免疫应答,与LaSota疫苗比较,免疫效果没有显著差异。PCR扩增检测结果显示,未能从免疫雏鸡各组织的基因组中扩增出F基因片段。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 致弱F基因 核酸疫苗 免疫原性

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鹅副粘病毒人工感染鹅、鸡、鸭试验

4

作者 邓舜洲 何后军 +3 位作者 朱芝秀 李闽 董荣华 邬向东 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2000年第5期170-173,共5页

用江西农大预防兽医学实验室分离的一株鹅副粘病毒(JXG1)的F4代鸡胚尿囊液人工感染鹅、鸭、鸡试验.结果表明:该毒株对鹅、鸡具有较强致病性,40日龄鹅感染后发病率100%,死亡率50%～80%;25日龄雏鸡感染后的发病率和死亡率达100%;人工感染... 用江西农大预防兽医学实验室分离的一株鹅副粘病毒(JXG1)的F4代鸡胚尿囊液人工感染鹅、鸭、鸡试验.结果表明:该毒株对鹅、鸡具有较强致病性,40日龄鹅感染后发病率100%,死亡率50%～80%;25日龄雏鸡感染后的发病率和死亡率达100%;人工感染致死鹅、鸡的眼观病理变化与自然发病鹅的病变基本一致;鸭人工感染后仅表现一过性拉白色稀粪;鹅、鸡、鸭感染后均能产生相应抗体. 展开更多

关键词 鹅副粘病毒(gpmv) 人工感染 鹅 鸡 鸭

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鹅副黏病毒胶体金检测卡的研究 被引量：7

5

作者 王翌 周铁忠 +1 位作者 张喜悦 胡桂学 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期876-878,887,共4页

将制备的抗鹅副黏病毒(GPMV)JG04株单克隆抗体3A5标记胶体金颗粒,提纯的鸡IgG(抗JG04株GPMV)喷涂在NC膜上,建立检测GPMV的快速夹心胶体金免疫层析检测卡(ICS)。该检测卡检测鸡减蛋综合征病毒、传染性法氏囊炎病毒、传染性支气管炎病毒... 将制备的抗鹅副黏病毒(GPMV)JG04株单克隆抗体3A5标记胶体金颗粒,提纯的鸡IgG(抗JG04株GPMV)喷涂在NC膜上,建立检测GPMV的快速夹心胶体金免疫层析检测卡(ICS)。该检测卡检测鸡减蛋综合征病毒、传染性法氏囊炎病毒、传染性支气管炎病毒、小鹅瘟病毒鸡胚或鸭胚尿囊液和麻疹病毒、犬瘟热病毒细胞培养物呈阴性,与鹅副黏病毒、孔雀源新城疫毒株,鸽源新城疫毒株、新城疫La sota株、鸡源新城疫病毒的尿囊液出现阳性反应。敏感性试验结果表明,该检测卡可检出血凝效价为24以上的鹅副黏病毒尿囊液。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 单克隆抗体 免疫层析检测卡 胶体金

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鹅副粘病毒LS-1株的分离鉴定及F基因分析 被引量：5

6

作者 张伟 刁有祥 +3 位作者 徐福亮 李宏梅 马艳芳 孙宁 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期31-35,共5页

从山东省梁山县疑似鹅副粘病毒感染的病死鹅中分离到1株LS-1病毒株,经血凝和血凝抑制试验,证实该毒株为禽1型副粘病毒.毒力测定结果表明,该病毒对鸡胚平均致死时间（MDT）为39.5 h;1日龄无特定病原体（SPF）鸡脑内接种分离病毒的致病指... 从山东省梁山县疑似鹅副粘病毒感染的病死鹅中分离到1株LS-1病毒株,经血凝和血凝抑制试验,证实该毒株为禽1型副粘病毒.毒力测定结果表明,该病毒对鸡胚平均致死时间（MDT）为39.5 h;1日龄无特定病原体（SPF）鸡脑内接种分离病毒的致病指数（ICPI）为1.76;6周龄SPF鸡静脉接种致病指数（IVPI）为2.42.序列测定结果表明LS-1株F基因核苷酸长度为1 653 bp,编码为551个氨基酸,有6个糖基化位点,其裂解位点的氨基酸序列为112-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe-117,与已公布的强毒株裂解位点的氨基酸序列相符.同源性分析表明,该毒株F基因与目前已公布的鹅副粘病毒F基因核苷酸同源性在87.0%~98.4%之间,推导的氨基酸序列同源性在87.0%~98.5%之间. 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 F基因 RT-PCR 序列分析

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鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立 被引量：4

7

作者 孙玉章 丁壮 +4 位作者 孟柯音 丛彦龙 母连志 王昌庆 李少丽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期6-9,28,共5页

应用cRACE等方法扩增鹅源副黏病毒NA-1株cDNA5′末端和3′末端,分6段扩增得到病毒的结构基因序列,而后连接本室构建的TLH-T转录载体,构建其cDNA全长克隆。在引入分子标签和验证辅助质粒的功能后,4质粒系统共转染VT7细胞系,成功拯救出了... 应用cRACE等方法扩增鹅源副黏病毒NA-1株cDNA5′末端和3′末端,分6段扩增得到病毒的结构基因序列,而后连接本室构建的TLH-T转录载体,构建其cDNA全长克隆。在引入分子标签和验证辅助质粒的功能后,4质粒系统共转染VT7细胞系,成功拯救出了具有感染性的鹅副黏病毒。鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立为进一步深入研究该病毒基因组的功能以及新型疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 病毒拯救 反向遗传

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“拯救”NA-1株鹅源副黏病毒辅助质粒的构建及鉴定 被引量：3

8

作者 宋子运 丁壮 +5 位作者 徐明 马爱霞 杜眉 常爽 毕玉海 尹仁福 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期515-517,526,共4页

将本实验室保存的NA-1株鹅源副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒NP、P和L基因片段,并将目的基... 将本实验室保存的NA-1株鹅源副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒NP、P和L基因片段,并将目的基因片段消化、回收纯化,克隆pCI-neo表达载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切、PCR鉴定并进行序列测定,结果表明NP、P和L基因正确克隆到pCI-neo表达载体中,并分别命名为pCI-NP、pCI-P和pCI-L。将构建好的pCI-NP、pCI-P和pCI-L重组质粒单独转染Vero细胞,在荧光显微镜下观察到特异绿色荧光,表明NP、P和L蛋白得到成功表达。 展开更多

关键词 鹅源副黏病毒 反向遗传操作技术 辅助质粒 间接免疫荧光

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鹅副黏病毒与新城疫病毒对鸡胚和鹅胚成纤维细胞的感染性分析 被引量：3

9

作者 单松华 谢爱织 +1 位作者 邹键 姚龙涛 《动物医学进展》 CSCD 2005年第2期73-76,共4页

用鸡新城疫病毒F48E9,Komarov, LaSota,V4/66株和鹅副黏病毒SF02株分 别感染鸡胚和鹅胚成纤维细胞,用MTT显 色方法检测存活细胞数目。结果表明,不同 毒力新城疫病毒致细胞病变的作用不一样, 鸡新城疫强毒F48E9株和鹅副黏病毒SF02 株均... 用鸡新城疫病毒F48E9,Komarov, LaSota,V4/66株和鹅副黏病毒SF02株分 别感染鸡胚和鹅胚成纤维细胞,用MTT显 色方法检测存活细胞数目。结果表明,不同 毒力新城疫病毒致细胞病变的作用不一样, 鸡新城疫强毒F48E9株和鹅副黏病毒SF02 株均引起两种细胞几乎全部死亡,感染动物 时,SF02与NDV强毒株的致病性有显著的 区别,但感染细胞时,二者并无明显差别; NDV与GPMV在感染水禽时的致病性差异 并不是因为诸如细胞膜受体等细胞水平的因 素不同造成的,可能与干扰素途径有关。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 新城疫病毒 胚胎成纤维细胞 感染性 致病机制

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鹅副黏病毒核酸探针检测方法的建立与应用 被引量：1

10

作者 张伟 刁有祥 +5 位作者 杜爱庆 高晓伟 张瑞平 刘方娜 臧大鹏 刘霞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期879-882,896,共5页

根据GenBank中已发表的鹅副黏病毒F基因序列,设计合成1对引物,利用RT-PCR扩增出1条与目的片段大小一致,约856bp的基因片段,回收并纯化此PCR产物。用随机引物法合成cDNA,地高辛标记,建立了地高辛标记探针检测鹅副黏病毒的方法。该探针能... 根据GenBank中已发表的鹅副黏病毒F基因序列,设计合成1对引物,利用RT-PCR扩增出1条与目的片段大小一致,约856bp的基因片段,回收并纯化此PCR产物。用随机引物法合成cDNA,地高辛标记,建立了地高辛标记探针检测鹅副黏病毒的方法。该探针能与鹅副黏病毒核酸发生特异性杂交,最低检出限量为3ng/L;而与H9N2亚型禽流感病毒、鹅细小病毒、大肠杆菌等核酸杂交均为阴性。对疑似鹅副黏病毒感染病变组织检测结果表明,气管、肺脏、脾脏、肝脏均可检测出鹅副黏病毒,以气管的检出率为最高。该研究为鹅副黏病毒的诊断和流行病学调查提供了一种可靠的方法。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 地高辛标记探针 RT-PCR

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鹅禽副粘病毒病的病理学研究 被引量：1

11

作者 张洁 辛朝安 任涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期84-86,共3页

用分离到的鹅禽副粘病毒 (GPMV)毒株 ,进行人工发病实验 ,证实该毒株对 1、1 4、2 8、48日龄的鹅都有较强的致病力 ,但其致死率随年龄增大而下降 ;通过不同感染途经对 2 8日龄鹅的发病实验 ,表明点眼、滴鼻、口服、肌注、皮下注射都可... 用分离到的鹅禽副粘病毒 (GPMV)毒株 ,进行人工发病实验 ,证实该毒株对 1、1 4、2 8、48日龄的鹅都有较强的致病力 ,但其致死率随年龄增大而下降 ;通过不同感染途经对 2 8日龄鹅的发病实验 ,表明点眼、滴鼻、口服、肌注、皮下注射都可造成鹅感染发病和死亡 ,但口服途经致死率最高 ,滴鼻最低 .该病毒主要引起鹅的败血症变化及神经组织的变化 ,电镜下 。 展开更多

关键词 鹅 禽副粘病毒 病理变化 自然感染

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鹅源副黏病毒致弱株的“拯救”及分子生物学鉴定 被引量：1

12

作者 张晓东 孙玉章 +4 位作者 刘佳旭 母连志 丁壮 王昌庆 李少丽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期790-794,共5页

以本课题组前期构建的鹅源副黏病毒NA-1株的全长感染性克隆为模板设计2对引物,用overlap PCR方法将其F蛋白裂解位点处的112、115和117位碱性氨基酸定点突变成为具有典型弱毒株特征的非碱性氨基酸。随后将突变后的F基因序列替换全长感染... 以本课题组前期构建的鹅源副黏病毒NA-1株的全长感染性克隆为模板设计2对引物,用overlap PCR方法将其F蛋白裂解位点处的112、115和117位碱性氨基酸定点突变成为具有典型弱毒株特征的非碱性氨基酸。随后将突变后的F基因序列替换全长感染性克隆的对应序列,构建突变后的克隆质粒FL-cDNA-F′。将改造后的感染性克隆质粒与pCI-NP、pCI-P和pCI-L 3个辅助表达质粒共转染VT7细胞系,成功拯救出了致弱的鹅源副黏病毒。经过分子生物学鉴定,该毒株F基因序列具有典型的弱毒株特征。救获病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)为96h,表明救获的病毒毒力已被成功致弱,可以作为当前流行的鹅副黏病毒病的一个较为理想的疫苗候选株。 展开更多

关键词 鹅源副黏病毒 反向遗传 疫苗候选株

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表达鹅副粘病毒F基因的禽痘重组病毒构建

13

作者 杨玉菊 王君伟 +1 位作者 马德滨 李俊艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期430-433,共4页

本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒(GPMV)主要保护性抗原F基因和LacZ报告基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体转染禽痘病毒(FPV)017株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白筛选获得重组病毒;West... 本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒(GPMV)主要保护性抗原F基因和LacZ报告基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体转染禽痘病毒(FPV)017株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白筛选获得重组病毒;Western blot和间接免疫荧光试验结果显示重组禽痘病毒中F基因在CEF中获得表达,并且表达产物具有良好的反应原性;本研究为进一步的研究重组禽痘病毒的免疫保护性奠定了基础。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 F基因 重组禽痘病毒

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鹅副黏病毒L基因片段的克隆及其主要抗原表位区的原核表达

14

作者 马辉 边传周 +2 位作者 赵绪永 郑宝亮 郑鸣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期23-25,共3页

利用PCR扩增鹅副黏病毒编码L蛋白的主要抗原表位区基因片段,并将该片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,通过诱导表达条件的摸索,实现了L蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中的高效中的表达,SDS-PAGE检测表达的融合蛋白主要以可溶形式存在,West... 利用PCR扩增鹅副黏病毒编码L蛋白的主要抗原表位区基因片段,并将该片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,通过诱导表达条件的摸索,实现了L蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中的高效中的表达,SDS-PAGE检测表达的融合蛋白主要以可溶形式存在,Western blot分析重组蛋白具有良好的抗原性,并利用亲和层析得到融合蛋白。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 L基因 原核表达 亲和纯化

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鹅源副黏病毒NA-1株F蛋白抗原表位预测和三维结构建模

15

作者 孙聪 宋战昀 +4 位作者 张学东 丛彦龙 张晓东 孙志民 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1783-1786,共4页

以鹅源副黏病毒NA-1株F蛋白的氨基酸序列为基础,分析预测蛋白的理化性质、三维结构与B细胞的抗原表位。运用生物信息学方法及手段对NA-1株F蛋白的理化性质、亲疏水性、可及性、信号肽、跨膜结构域、二级结构等方面进行分析,预测其抗原... 以鹅源副黏病毒NA-1株F蛋白的氨基酸序列为基础,分析预测蛋白的理化性质、三维结构与B细胞的抗原表位。运用生物信息学方法及手段对NA-1株F蛋白的理化性质、亲疏水性、可及性、信号肽、跨膜结构域、二级结构等方面进行分析,预测其抗原表位。同时利用同源建模法预测其三维空间结构。结果NA-1株F蛋白存在多个潜在的抗原表位位点。该研究为进一步通过试验方法确定其优势表位和从结构出发了解其生物学功能提供了理论依据。 展开更多

关键词 鹅源副黏病毒 F蛋白 抗原表位

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